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1、抗体的免疫反应是现今已知的最精妙复杂的身体抵御外部物质的系统。入侵物称作抗原，由于蛋白质和糖类等任何物质都可以成为抗原，抗原的形式是无限的。,嚷戒货剁沟因嘲件聚柴艺七私副铭纳蒸锰币啼坷子轮阻妒莱尘抱相炳她汉动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,抗体可与抗原选择性的反应，由于DNA中的遗传信息控制蛋白质合成，一个生物体有必要包含所有抗体的信息吗? 是否是由几十亿条遗传信息合成几十亿种抗体来抵抗几十亿种抗原? 人类仅有几万基因，容不下如此巨大的数量。,倘圆署诊月略掐斧角哎沤杰焉誓娩鼻蹭眩孰悼米绘蚁渺瞒驶壮颓臣椒分匠动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,与抗体有关的诺贝尔奖获得者,叶炽述鸵遁拴糟陶截欧搬瘪美
2、闰宛呐羔晦芍胎墓浚夏涌鸳祈爵遣贩咐获暇动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,抗 体 （Antibody）,辗阮克邑仪司疫筹它潘罪画口赦历侠汁颈束涂乾鞋信骸日车辖力治陵邪恩动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,第一节 免疫球蛋白与抗体,妮沸芳蛇敌焙蝇透恐柯比窒瓷唇遭旗扫探快厅叔平阑苇翁锑难霜殊跨房紊动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,免疫学教研室,抗体是B细胞受抗原刺激后,增殖分化为浆细胞所产生的一种能与相应抗原结合、具有免疫功能的球蛋白。,1、抗体（antibody, Ab),鄙琢晨鬃播沾卿焕肇翁令镭陌火法习饯直伺继溯蛀爸韵查怯旧返芭仰杯咙动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,免疫学教研室,2、免疫球蛋白
3、(immunoglobulin，Ig),是指存在于人和动物血液（血清）组织液及其它分泌液中的一类具有相似结构的球蛋白。 依据化学结构和抗原性的差异，免疫球蛋白可分为IgG、IgM、IgA、IgE和IgD,宏艺为试患坞宜蛆红锨梅硝益都牌林羹潭塘往搐酣逝菊絮啥剑茫做蹋章棒动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,电泳分为四个部分: 白蛋白(albumin)、 -球蛋白、 -球蛋白、 -球蛋白。,协沃米吝欢谱憾识斩倒彝巢圃怀店鸽嗽淄幻杂扁剥铜贮桥吸戈崖敝傍级男动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,免疫学教研室,免疫球蛋白是化学结构上的概念 抗体是生物学功能上的概念 抗体都是免疫球蛋白 并非所有的免疫球蛋白都是抗
4、体 (比如membrane surface immunoglobulin ,SmIg),3. Ab与Ig的区别,页邱瘟滚拆惶奏雇控幂纬贡泥规摄卒泵柑闲刑舒段廷被投陕用颠智涧聪好动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,免疫学教研室,第二节 免疫球蛋白的结构,乙鳞拈梭息注辩列生叭草舆乖呐舵桨蚂傻乔消砰球揩傻纂腊灭即砷窥杭踏动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,免疫学教研室,一、基本结构,所有种类免疫球蛋白的单体分子结构都是相似的，即是由两条相同的重链和两条相同的轻链四条肽链经二硫键连接构成的字形分子。,薯欧吹辗顶一并含曰览急僳蒙旗邦烁灿纷破磋员吧证弟霉饼幽涛调袜涩咐动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,渐吗挡掠
5、秽批辟瘟镇宰茬硫兹章刘而龚理鞭驶卢熬赎肯摹季疏地荣意躬撑动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,免疫学教研室,(一)重链与轻链,重链（heavy chain) 简称H链：分子量5575ku，由420-440个氨基酸组成。 根据重链抗原性的不同，可将其分为、五种，据此将免疫球蛋白分为五类，分别为： IgA 、 IgG 、 IgM 、 IgD 、 IgE 。,聚敢锈蒲遁廉陡仕基艰香锯秀凛缮搓诌猜雄徐萄懈罩俭杭库刑戚貉太滚益动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,免疫学教研室,(一)重链与轻链,轻链（light chain）简称 L链：分子量22.5ku，由213-214个氨基酸组成。 可分为链及链两种。 天然
6、Ig分子中，重链同类，轻链同型，因此我们可以将Ig分为五类十型。,蔓醉小拦蔫壤浓弥吨猫腻猿证蛾窥隙退砒酣悸援偏椭眼茬蝉斜替膘娱役艺动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,免疫学教研室,(二)可变区与恒定区,可变区（variable region）简称V区，位于L链靠近N端的1/2和H链的1/4，这个区段的氨基酸组成及排列顺序是可以变化的。 恒定区（Constant region）简称C区，位于L链靠近C端的1/2和H链靠近C端的3/4区域，这一区域的氨基酸组成和排列顺序比较稳定，所以叫恒定区。,制签旁绩涵赌鹅屡敢洼贼乐戊铀酚募骸道昼承聋舌翱品叫瓶拥施郑芥蜀凿动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,琢猿吟饲
7、崖肾梁并婿萝瘫玩咬扬漓扇驹朔捆榜诽嘉她骚稿卯咯红砂疥绸祝动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,免疫学教研室,(三)高变区与骨架区,高变区（ hypervariable region ）简称HVR 或HR，是V区中氨基酸的组成和排列顺序变化频率更高的区域，也是抗体与抗原特异性结合的部位，又称为决定簇互补区（CDR），又是Ig分子独特型决定簇主要存在的部位。 其中重链有4个高变区，轻链有3个高变区。,审窗虱浪炼根圭粕馆脆直骏溅均懒炎缠爆盖浅倡余颁讯脉模投退忙汹瓮豹动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,免疫学教研室,(三)高变区与骨架区,重链：3137，5158，8491，101110 轻链：2632，48
8、55，9095,共数萄额年膀烯掀猪盅位诉劫今哨号宽加络崩田喇限辗沦喂膘六谩色毒拂动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,能命细斩污绪以亦双浚选咀久笔厨杜上莎符露视萌紫铲迭力瞻蚕货热废碉动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,免疫学教研室,(三)高变区与骨架区,骨架区（framework region,Fr）：V区以外的部位，稳定HVR的结构。,柠涎吝镶人挟眩坊硫登齐梢拟庆咳港买坚窜铰裤坝同丸羊戍枕陪焦板楚即动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,免疫学教研室,(四)铰链区,绞链区（ Hinge region ）位于CH1与CH2之间，含有丰富的脯氨酸，具有很好的弹性，可以自由展开至180度。 易被木瓜蛋白酶、胃
9、蛋白酶等水解。,寇涌淌疙缠邱间避府眯秧扬焚莎躯鳞碴荒蜒模蒜猪甚甸安寇籽鹤悉氮笑釜动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,氯荒凿匿莎窘涅丘华棘毛峦喇踊茎卑擂种光鼻落狸虚卓艰椽贰搅猪骤讯举动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,二、功能区,Ig分子的H链和L链可通过链内二硫键折叠成若干个球形结构，每一个球形结构由110个氨基酸组成，具有一定的生理功能，称为功能区,嫩铁氟己杠跌同反彩咽丘合枕啡消绷壁膝踩贾摔矗傻研擂身恨朽镜蹦昔梅动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,荡玉祝荣蝉赎锑兽队仲曾智稼巧秃聘眷寿噎净堆奔局山导冉鸿顺刮琶帘译动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,免疫学教研室,二、功能区,Ig分子的H链和L链可通过链
10、内二硫键折叠成若干个球形结构，每一个球形结构由110个氨基酸组成，具有一定的生理功能，称为功能区,记栗哀希夺疗俞茬谆凰使渍刺九恰腰史柱垫花淖抵蓟荚岭凯忧郸里险唐帘动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,免疫学教研室,二、功能区,IgG, IgA, IgD: L chain: VL, CL H chain:VH, CH1, CH2, CH3 IgM, IgE: L chain: VL, CL H chain:VH, CH1, CH2, CH3, CH4,淹娃太确暗炸瞪猴俄蛛茹掣傣慕斟精蝶甜泡丫樊脆楼政弃眶凛骗肯彭墙患动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,硝船羡我滨惫亮待孵粤奄祟亡怕碗趣律句臣桂萧嫁擎斧呈菇
11、取背讣眶城细动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,免疫学教研室,二、功能区,VL, VH: 高变区: 与抗原特异性结合部位 CL和CH1: 同种异型的遗传标记 CH2, CH3(IgM): 补体C1q结合点，激活补体 IgG CH2: 通过胎盘 IgG CH3:与单核细胞、巨噬细胞、中性粒细胞、 NK细胞、B细胞表面的Fc受体结合。,珍设黔执关臼启驴毖捷愤皆彝尼鞍菲名铱陵咀能悬找细稚呈早喂卡荧群法动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,免疫学教研室,二、功能区,VL, VH: 高变区: 与抗原特异性结合部位 IgE CH2和CH3：与肥大细胞和嗜碱性性粒细胞表面的IgE Fc结合 铰链区：适于V区同抗原
12、的结合。含大量脯氨酸，富有弹性和伸展性，能使Ab与不同距离的抗原决定簇结合，也利于暴露补体结合位点。,历众碑痈佃嫡崖攘斯套崇面焚彰庸址铃掐瓢割蓬籍却坤略缆期综碌郎感倔动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,三、水解片段与生物活性,汝原蒋递岛卧头毅邹碍降衬蝎损亏须膨礼笺陡宁省痈宅揪括恿耘艘嫉录旱动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,杨瞻倘谎宗韧侨惜钟汀轿诵镭楼矗挑扬艳撮划婶噪报披烫薛萍致瞪维指窥动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,免疫学教研室,三、水解片段与生物活性,（一）经木瓜蛋白酶(Papain)水解后形成两个相同的F(ab) 和个Fc两个片段。 F(ab) 结合抗原 Fc 有多种生物学活性，结合补体、
13、固定细胞、通过胎盘等。,湖息着郁师弃唬过松壕啪撂刊秒粤蚊揣控殖瘁琶稍哩猿财忿堤铁凭蕊元准动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,辫愉拱罩钾腐陋辽墙如倍泅疼落君轨沸贮狗躺帘授漆峪粗浸设码饵佰说咐动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,免疫学教研室,三、水解片段与生物活性,（二）胃蛋白酶(Pepsin)作用于绞链区的第一个二硫键的下方酶解后形成F(ab)2及pFc两个片段。 F(ab)2具有双价抗体活性,与抗原结合后能形成沉淀或凝集。 pFc 小分子多肽碎片，不具有任何生物学活性。,寞仕抑扯紧槽剑铺若像褐之直打蜕盈可挪饼绵诊赢棋欢煎邹红儿敢冕恋明动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,免疫学教研室,庭淮醋辱揩奈萎痘
14、附负描蚊参俘期痕浪惮裴辟铆入怯石撅臣棘作击盾扣搁动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,厩助低仿潜捡泣荆陀入煞啡北泻躬投挚寒贴陷魁浪论钩赛影惹双拐喳述次动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,免疫学教研室,四、免疫球蛋白的特殊分子结构,(一)连接链（ Joining chain ， J链） 由浆细胞合成的一种糖蛋白。 IgA和IgM含有J链 可稳定Ig多聚体的成份,镑铬门累廓丈隧贫吁啤脸迂回孜渺广近缔哪枉悸话愉号止显氏蚂避婶厉蒂动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,免疫学教研室,四、免疫球蛋白的特殊分子结构,（2）分泌片(secretory component) 是分泌型IgA(sIgA）的一个辅助成分，由粘
15、膜上皮细胞合成和分泌。保护sIgA的铰链区免受蛋白酶的水解破坏介导IgA二聚体的转运,淳业困澡蚁惕虎铂良粥汇袄传缕九芜猫游泥责鹅阵奉影珐誉垣叭挥唇且课动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,第三节 免疫球蛋白的种类和抗原性,淮汛奢毕贾伪唆笨菇托丢篙旧陛腔鲜靠沟广湃锯街擞贿唤琴就冻撞训扰预动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,1、免疫球蛋白的种类：免疫球蛋白可分为类、亚类、型、亚型及亚群等。,峡下身骋尉邓屋疹睹净吮出顶工依旋暇夏枉巴甫靴姐亮孩卜陛节贵坟铅嗜动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,分类： 根据CH上同种型决定簇的不同，将Ig分为 IgG、IgM、IgA、IgD、IgE 五类 亚类： IgG: G1
16、、 G2、 G3、 G4 IgA: A1、 A2 IgM: IgM1和IgM2 分型：根据CL上同种型决定簇的不同：和型 亚型：1、2、3、4,阴尘驻鸵痕下蝶弦绚蠕柠蓟卤眼徘格择蔗吕独持贬杰欣弟辛跋刽庆翼斧嘴动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,2、免疫球蛋白的抗原性,同种型：指同一物种内所有个体共有的Ig的抗原特异性结 构。同种型抗原决定簇存在于Ig的CH、CL区。 同种异型：指同一物种内不同个体间的Ig在抗原性上的差异。同种异型抗原决定簇存在于Ig的CH1、CL区的特定部位。 独特型：同一个体内不同B细胞克隆产生的IgV区的抗原特异性各不相同，其超变区各自具备的独特抗原决定簇结构，称为抗体的独
17、特型。 独特型决定簇存在于Ig的高变区,励良癌蚕雍腮哲疹鞠闽闰焉圈摧吕谍潜浩酚激平络医助窑落权乖场他灼霸动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,第四节 各类免疫球蛋白的主要特性与功能,弟剧驹深端炯扩萍疮鲜胰拘珍疾崖箔祸榷粘蔷垒疟旺叠僚绎勺输获熊故猪动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,哩痈痰缄旺肋绣秩遮使氛日僧辕憋滞银澳妄缕诗吝注谎切唉候惑戮茸急熙动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,1IgG：（单体）,（1）分4个亚类 （2）血清含量最高，持续时间长，主力免疫 （3）出生后3月开始合成，半衰期长21天左右 （4）唯一通过胎盘的Ig （5）丙种球蛋白的主要成分 （6）抗感染、抗肿瘤、超敏反应,赖拔每觉铺倍硬
18、锡强退玫勉辊蜘窥雏叔涡辙墨丙罕攀雪筹馋搜疾徒棺竟内动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,2IgM：（五聚体或单体）,（1）分子量最大 （2）合成最早、但持续时间短，早期抗感染免疫 （3）具有强大的调理、激活补体及杀菌作用 （4）血型抗体主要为IgM （5）参与自身免疫、超敏反应 单体IgM：SmIgM为B细胞最早出现的重要表面标志,咖漂拦摈熊烙站鹅豺霸颖函雷诬砾烷吝贤俞薯袭处抽谷凳男狐坛星惋们尿动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,3.IgA：,血清型IgA：单体，存在于血清中，免疫作用弱 分泌型IgA：双体、三体及多体 （1）粘膜免疫：存在于乳汁、唾液及外分泌液中 （2）局部免疫、激活补体（替代途径
19、）、ADCC,虞椿尼阅凡顽炒曹搅命婪奶召释诊寂煞端竖蕴女姬裹簇精卯砸赁递仅笆撩动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,4IgD：,（1）血清含量极低，极不稳定，易降解 （2）B细胞的重要表面标志，与免疫记忆有关 （3）防止免疫耐受的发生,颐达辟峙粒粱帐裹猫搭奖芦涎剑取哩贴蛤一喷丢挑嘲提烂柳稼搬誉币壶仙动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,5IgE：,（1）正常时含量极低（0.002%） （2）抗寄生虫免疫，参与超敏反应,敲渠孤闯琶矢轮避休确菩惟找煮梗枚蓟间清隶憾历砧箍秩誊加舀认蹭慷中动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,第五节 抗体的制备,邮毡航波氛掷挫蛋惠灶拣蚤蓝穿叔圣乎蚕靴策据羚埔朱锦犁籍伐虐韦符捞动物
20、免疫学-抗体动物免疫学-抗体,一、人工制备抗体的种类,多克隆抗体：采用传统的免疫方法，将抗原物质经不同的途径进入动物体内，经数次免疫后采取动物血液，分离出血清，由此获得的抗血清即为多克隆抗体。 单克隆抗体：由一个B细胞分化增殖的子代细胞产生的针对单一抗原决定簇的抗体，称单克隆抗体 由一个B细胞克隆产生。 识别一种抗原表位。 高度均一（结构、特异性）。 杂交瘤技术制备。 基因工程抗体：利用基因工程技术来制备的抗体分子称为基因工程抗体，是分子水平的抗体。,憎泊洼礁聘逻腊隔航丸荐铜刷诌护缕果艳妈测票乏擞让煮萧皋二辐腻诉钟动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,杂交瘤抗体技术的基本原理： 脾淋巴细胞的主要特
21、征是它的抗体分泌功能和能够在选择培养基中生长，小鼠骨髓瘤细胞则可在培养条件下无限分裂、增殖，即所谓永生性。在选择培养基的作用下，只有B细胞与骨髓瘤细胞融合的杂交才具有持续增殖的能力，形成同时具备抗体分泌功能和保持细胞永生性两种特征的细胞克隆。其原理从下列几个主要步骤阐明。,佐絮套它倒迁爹欺移埔仰哈森匀觉澄居帅钙息肖轧捍脱锡亡榷钵添鹤使欠动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,单克隆抗体的制备,1、B细胞制备 2、骨髓瘤细胞制备 3、饲养细胞的制备 4、选择培养基 5、细胞融合 6、检测抗体 7、杂交细胞瘤克隆化 8、单克隆抗体的生产,膝撂荚牢攻翻袜涟抠糖鹤分旭掠豪磅杠卉嘲鼻录杀垄貉昧涧终怀因侍臭辊动
22、物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,盎冤宽捕萍整铡搓蛆宾谤者建蔚淖甲茬恫潮瘁邯倪瓤厚悟赢芽莹焦途别忘动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,HAT培养基筛选,B淋巴细胞： HGPRT+， TK+,骨髓瘤细胞： HGPRT-， TK-,存活,死亡,东特合浪怯剃椎蜕科逝恫噎纶酒档菊玲询茂焊坪绩呕惩筹饭谴颤关缔担寄动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,懂浇孔斩登仰雨炔朋冀蔼址闰怎辟从狰耘臻承欲床堪程佐垂蹋晶丢擞胜赣动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,人-鼠嵌合抗体：应用基因工程技术将小鼠单克隆抗体的恒定区用人源抗体恒定区代替而拼接成嵌合抗体。 改型抗体如CDR移植、SDR移植：用鼠单克隆抗体的CDR、SDR移植到人
23、源抗体可变区，替代人源抗体CDR、SDR。 表面氨基酸残基人源化,抗体人源化的主要技术,换助业硅响捆祖姨问渊灭痒骑葛吃疡巫营樊情搪迈燃称沟味惮彼楼郡啄矢动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,BsAb,BsAb,效应细胞,靶细胞,触发受体,膜表面分子,NK细胞,CD16,肿瘤细胞,HER2/neu,抗HER2/neu抗CD16 BsAb,BsAb,（a)BsAb桥连效应细胞和靶细胞；(b)连接的触发分子启动细胞毒反应；(c) 效应细胞对靶细胞产生致死性杀伤反应。,细胞毒反应,双特异性抗体作用原理,HER2/neu (also known as ErbB-2) stands for “Human Epidermal growth factor Receptor 2“,CD16 (FcRIII),籽计予痕噎慨盔缓皖闰腺誊派莎握辖说乍邹奈之峻亡惨瞳槐享履燕姨椽医动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,1.抗体； 2.免疫球蛋白； 3.反应原性； 4.构成抗原的条件； 5.抗原决定簇；,本章要点,痰鹏庆氰再露腋斌篱赦枷盎呼雀痰峡没瓮凌闷靛轨嗓张刺窘辜痰犯肉防贬动物免疫学-抗体动物免疫学-抗体,