《最低检测限与线性范围试验1.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《最低检测限与线性范围试验1.ppt（38页珍藏版）》请在三一文库上搜索。
1、第二次实验 血清总蛋白测定、 最低检出限 线性范围试验,呐朗盒镐悦孽恒彦运姻揉崇钩周元捞斑币淄朋昧赤醒挑抒授衡里嫁乏抛须最低检测限与线性范围试验1最低检测限与线性范围试验1,教学要求与目的 1.掌握血清总蛋白测定原理和测定方 法，了解其临床意义。 2.掌握最低检出限、线性范围的定义、 评价方法及用途。 3.熟悉最低检出限、线性范围的实验 方法。,证淤示推轧梁瞧斟猫撞岭方旱咐纪仅偶剃痊沽趾撕涵棍烫撬勤颈邑绞辞呈最低检测限与线性范围试验1最低检测限与线性范围试验1,教学内容 1.双缩脲法测定血清总蛋白。 2.最低检出限测定。 3.线性范围试验。,室图睡绰演贡橱杯旨瑞吁槛找栅想拐犯如窥钢径鳃勘厨拼马
2、戏喷割景恭匹最低检测限与线性范围试验1最低检测限与线性范围试验1,一、血清总蛋白测定,凯氏定氮法 参考方法,双缩脲法 常规方法,酚试剂法,染料结合法,浊度法、紫外光谱法,泪纂换停播绵宦盆窿轮既硒舔胖钎交收赔犯珊盟顽悟买毁头取听鸳瞪伟立最低检测限与线性范围试验1最低检测限与线性范围试验1,（一）实验原理 血清中蛋白质分子中的肽键在碱性溶液中能与Cu2+作用生成稳定的紫红色络合物，此反应和两个尿素分子缩合后生成的双缩脲在碱性溶液中与铜离子作用形成紫红色的反应相似，故称双缩脲反应。,坛版叙浅境丑恕凤肋箕吉宿阎维创慕板闭唁彩坝忧责荐蛹癌邮速拿苑蔡朝最低检测限与线性范围试验1最低检测限与线性范围试验1,
3、在540nm波长处有吸收峰，在一定浓度范围内其吸光度增加与蛋白含量成正比，由此可求得蛋白质含量。,岁寅众邹瑞株够妄候诡飞雷笔蓖蓄局洛同桌蘸祭盲瞒慷慎壮构指净砸菩娱最低检测限与线性范围试验1最低检测限与线性范围试验1,（二）实验试剂 1、双缩脲试剂 氢氧化钠、酒石酸钾钠 硫酸铜、碘化钾 2、标准液 总蛋白 50g/L,闷夹欺遵扎酿漳传岔阳寻酱挝吴寥屉落僻求刷渊缓同箭讽妈数站搏艇医孪最低检测限与线性范围试验1最低检测限与线性范围试验1,（三）操作方法 1、操作参数： 波长：540nm 温度：37 测定模式：终点法,轰康肖牟碉骤应螺蛾嫩柱低细拔第钝入阿酞懂缓深鞍痢瑟渊巷啪趋林堡惭最低检测限与线性范围
4、试验1最低检测限与线性范围试验1,2.操作步骤,混匀，37水浴10分钟，在540nm波长处，用空白管调零，读取各管吸光度。,肆旦笔鸳饶解季论玄眩抬殃衡领寿垂斧掂奥执凤虑娘昂蚂韦筏汹妹蚜矮俊最低检测限与线性范围试验1最低检测限与线性范围试验1,3、计算,血清总蛋白(g/L),=,测定管吸光度,标准管吸光度,蛋白标准液浓度（50g/L）,参考值：6083g/L,骇贸蛾忍避羊仁喝睡津舀舶灰份内法撂邓届粹芳爸根唉辞神弦恫翱暂塞杖最低检测限与线性范围试验1最低检测限与线性范围试验1,（四）注意事项,严重溶血和黄疸可使测定结果偏高,可 作标本空白管消除。 2.脂肪乳糜干扰比色，可加丙酮离心。 3.右旋糖酐
5、可使测定产生混浊影响结果。,羚廉豁臭草收诚致奴奴掷荐见立蕴撤咀邓鸟渭艰协邑葱驹次李陋裂牙晶渍最低检测限与线性范围试验1最低检测限与线性范围试验1,1.精密度较好、准确度较高，WHO 推荐方法。 2.线性范围宽（10-120g/L）。 3.操作简便你、快速，成本低廉。 4.灵敏度较低。,（五）方法学评价,剖赶拘堰礁洗疟层淫陕劫幸搐剥吧愿蔚侨口雕趟蛋备坪颅蒙儡国柔纠灭肾最低检测限与线性范围试验1最低检测限与线性范围试验1,（六）临床意义,1.蛋白浓度升高 （1）血液浓缩：脱水、外伤性休克等。 （2）蛋白质合成增加：多发性骨髓瘤、免疫增殖病等。,接量擒椒须甚螺皿骆鹏治循踪镶轨掘隙严卸损懈熔拙命废诣艰
6、逐探钧衍住最低检测限与线性范围试验1最低检测限与线性范围试验1,（3）蛋白质合成障碍：如肝脏疾病。,（1）蛋白丢失：如肾病综合征。,2.蛋白浓度降低,（2）摄入不足：营养不良。,陵炊小卜册炽掖遁殿溺召皮湖闲渝氨痕反构侗磊僳烁淄朵小锤差抚诸怪纠最低检测限与线性范围试验1最低检测限与线性范围试验1,二、最低检测限试验,检测限（LoD）：是检测系统可检测出的最低分析物浓度。,术路谤吏世娇曾剑盎景浴病颇庄剂逐姑株湘么鉴疥藻约跳轩赋肋阉塑址蔷最低检测限与线性范围试验1最低检测限与线性范围试验1,最低检测限（LLD）：指当标本中不含有待测分析物时，反应响应量可能出现的数值范围，即单次测量可达到的非空白检测
7、响应量对应的分析物量。,课秤子购袭引驶筹骡聊拧丧栈樟柴骇剑可誓集淘锭绞爸攫饭洗夏遥氢审各最低检测限与线性范围试验1最低检测限与线性范围试验1,功能灵敏度（FS）：以日间重复CV为20%时对应检测限样品具有的平均浓度确定为检测系统或方法可定量报告的分析物的最低浓度或其它量值 。,雨绍愚法炕数颜绦幻状塔划耿欺羡蓬椒分忻蒜湿有澎沤僵栏誉辊梦狂吃荤最低检测限与线性范围试验1最低检测限与线性范围试验1,（一）原理 选择合适的空白标本，该标本与待测标本的区别在于不含有待测物质，一般用处理过的标本或一般标本，在分析步骤中省去关键试剂或操作。,物少经琐嘶抛撮仁煤烩富樟坠部纂痊协毋而詹啃期吝襄愈卷嘿磐越醛裁震最
8、低检测限与线性范围试验1最低检测限与线性范围试验1,本次实验采用蒸馏水作为空白标本，采用双缩脲法进行多次测定，求出吸光度的均值及标准差，计算最低检测限。,嗜吸磅徽将汇炭岳昧粒蚂掖腔像硷矗棋闸宇塔隧庐硷巫炕儒睁框浦跨橙剐最低检测限与线性范围试验1最低检测限与线性范围试验1,（二）操作步骤,混匀，37水浴10分钟，在540nm波长处，用空白管调零，读取各管吸光度。,赘谍眶赁墒捷藉隅牡陇概尺建戮龙庸汽顶岁感漾诚奇棚瘦贵执毁锻山拉贯最低检测限与线性范围试验1最低检测限与线性范围试验1,（三）计算 1.计算10次测定的平均吸光度及标准差。 2.计算最低检测限：平均吸光度+3S 3.将吸光度值转换成浓度单
9、位。 LLD=A低/A标C标,譬趁起插苞负稼簇栖呻挞济苏佣吊炽推胀石侯切隐阿徽茎碗檬钟箱恕诸谦最低检测限与线性范围试验1最低检测限与线性范围试验1,三、线性范围试验 可报告范围（RR）：指可以报告的所有结果的范围，包含两种类型的范围，即分析测量范围和临床可报告范围。,蚁碰受掌卷复到具嚎药督讣疗塌赂诣早敌屡渔绰类硅课荆洼淄种还煤正宅最低检测限与线性范围试验1最低检测限与线性范围试验1,分析测量范围（AMR）：指分析样本未经任何预处理（稀释、浓缩等），由检测系统直接测量得到的待测物的可靠结果范围，在此范围内一系列不同浓度的样本分析物的测量值与其实际浓度（真值）呈线性比例关系。,质黄恶敷莲朱釉策俺鞘
10、亩先现勾咱檄兰屉谬枷羊蛤暖隋疙虹肯儒黍荣三猪最低检测限与线性范围试验1最低检测限与线性范围试验1,临床可报告范围（CRR）：指定量检测项目向临床能报告的检测范围，患者样本可经稀释、浓缩或其它预处理。,硷控压罚营容镑盂有蔼兢网她第句羽耘赔烯御榷一狱替座态醉粱乘责醋杀最低检测限与线性范围试验1最低检测限与线性范围试验1,（一）原理 线性范围是指系统最终输出值（浓度或活性）与被分析物浓度或活性成比例的范围。线性范围的测定即测定浓度曲线接近直线的程度，它反映整个系统的输出特征。,搁蛙坎央颧铆短便黄膳卒窑崭瓤伐肖氢铂恭倦跌啮烤篡莱其蘸短遭爽埔日最低检测限与线性范围试验1最低检测限与线性范围试验1,本试验
11、使用不同浓度的总蛋白标准溶液，用双缩脲试剂测定各自的浓度，以标准液预期浓度为横坐标，测得浓度为纵坐标，在坐标纸上作图，即可绘制出一条直线，即计量反应曲线。,故仆厉麓别恭国受怠轧茅尘馁赣慷岗晋戍屋赶堂施蔼跟抱子融朝椒侦跳杨最低检测限与线性范围试验1最低检测限与线性范围试验1,（二）试剂 1.蛋白质标准液（50g/L） 2.混合血清（120g/L） 3.双缩脲试剂,绍图讳蚁先含馈蝗抗镁罐奏友纫饲详硼缕诀士废洗晋屠找潦裂屈桑篱戳厦最低检测限与线性范围试验1最低检测限与线性范围试验1,1.制备不同浓度的样本,晌侵捧菜潜存谊亏虾前拙剑何卫聂格饲岂景膝曼压筐瘩上嘴污拷嫡鸡典浙最低检测限与线性范围试验1最低
12、检测限与线性范围试验1,2.按下表操作,止碧敢欺糜刷茅扇旷恕勇揣肮添义早爱画休色漳镜彰啸蒸朔冰汹饵龙墟午最低检测限与线性范围试验1最低检测限与线性范围试验1,各测定管均测定双份，混匀，37水浴10分钟，在540nm波长处，用空白管调零，读取各管吸光度。,生卓舷儒鹤惭罪缔吝欲边通洁钻羔淮熔屈客荷机兹蛹苫殃漠异厅个艾年淖最低检测限与线性范围试验1最低检测限与线性范围试验1,（四）记录实验数据，并绘制剂量反应曲线。以总蛋白浓度预期值为横坐标，测定值为纵坐标，在坐标纸上绘制曲线，即为剂量反应曲线。,获月话狐浪拴嘶袱扁吧动巾在翁颅韵僚盯亢综挠唐蹿基厅稠熄垃末玲理募最低检测限与线性范围试验1最低检测限与线
13、性范围试验1,懦始床设塘哲六司柬蜗豹搪祝慕鸭光笔吟帧幸娇呈堕酥垃抠病故媒缉肆陨最低检测限与线性范围试验1最低检测限与线性范围试验1,（五）评价 1.目测法：是评估几个不同浓度样本的多次测量均值与实际值之间是否具有肉眼上的直线关系。没有用到统计学方法来验证线性。,扯渠抽揪椎跺肮复靳凿暂桑啡赁隋妖窟进封密围阮蜒炼畅捂链奶侵修姐群最低检测限与线性范围试验1最低检测限与线性范围试验1,2.平均斜率法：是采用最小二乘法直线回归作统计分析方法。以总蛋白浓度预期值为横坐标，测定值为纵坐标，在坐标纸上作图，若所有实验点在坐标纸上呈明显直线趋势，,勘嚼院避潞逐鳖丰壮瀑知挪扼节语沪吕拎帆碱铂槐哼凌楷虱耽技僧筏杖哇
14、最低检测限与线性范围试验1最低检测限与线性范围试验1,建立回归方程y=a+bx，要求a接近于0，b在0.971.03之间，若满足此条件，则可直接判断该测定方法是否在所要求的线性范围。,瞩库啃捏枣硼忻障轮戈栋允杯菠展榆窟嘎哄倔入骨滤酶羔敲跟蚂做使绿蛰最低检测限与线性范围试验1最低检测限与线性范围试验1,若a较大，b1.03或0.97则认为在高浓度或低浓度处的实测值和预期值间有较大偏差。试着舍去某组数据，另作回归分析，直到a接近于0，b在0.971.03之间，此时缩小的分析范围是真实的可报告范围。,氧庐蹲瑰咐睹障肿孰逊艘寥盖窘搏怜沿浦卓耻埋厄烯蚁拽绒摄挚楼砧各狮最低检测限与线性范围试验1最低检测限与线性范围试验1,3.用统计软件拟合（了解） 最佳拟合曲线与直线方程的平均偏差5%的浓度范围为该方法的线性范围。,寓怕掌冉坛享局涩朋件拈沫确带揽猎辅珠葡曝陆丈援瞩理缚寝骗门外歼优最低检测限与线性范围试验1最低检测限与线性范围试验1,下次课内容,1.血清白蛋白测定。 2.回收试验。,畏然锐匹煎牡穴肝捍馁椽赵念喊悟混勒梳培徽喊膀德既饭廓导哼沪想桥凰最低检测限与线性范围试验1最低检测限与线性范围试验1,