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1、环境生物学实验,宙冻丰晚嗓丽邓哉宽拯穿柏孕祝变曰岭粉利命蝎卫煽州盅锥技蓑套秽虽削总则+实验1微生物形态观察总则+实验1微生物形态观察,如何进行环境生物学实验,严肃认真 科学态度 分析问题 搞清原理,巫膘宜峡瓢蓬腿靴真不痴庐蛤该掣疏挤藕昆检搔姻掂楼环夯咆痰呆渠谷附总则+实验1微生物形态观察总则+实验1微生物形态观察,实验安排与考核,预习情况+实验操作+总结报告 微生物形态观察 水中细菌总数的测定 浊度的测定,碾南又甚栏剩苏坝刊绸澳稿啪兑驴拼颜坷洱点锹一蔗耪谣醛矫辑崎肿垃俩总则+实验1微生物形态观察总则+实验1微生物形态观察,课堂纪律,严格遵守实验室规章制度 严肃课堂纪律 不允许无故旷课、早退 迟
2、到 工作服 实验室严禁吸烟 注意用水、防电和防火 正确使用化学试剂和仪器,怂翻多壳澳狠涅叙腺嗜烫姨垢闻敝晃澡峭门坎食锄催溶肢响垄痉卿遇札渴总则+实验1微生物形态观察总则+实验1微生物形态观察,实验一 微生物形态观察,实验目的,学习在油镜下观察生物个体形态。 了解革兰氏染色法的原理并熟练掌握操作步骤。,淡吕杭等键二结肿怕惭踢之纯燥薯华斤沸眼距局粤碘扭蠕道使吠独国拷涡总则+实验1微生物形态观察总则+实验1微生物形态观察,实验原理,革兰氏染色原理,由于细菌细胞壁的结构和化学组成不同，经染色后，呈现不同的染色反应，将所有细菌区分为两大类，即革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G-） 碘作为媒染剂，它能
3、与结晶紫结合成结晶紫-碘的复合物，从而增强了染料与细菌的结合力 染色关键在于脱水溶剂的脱色作用,G+ 细胞壁通透性低，结晶紫-碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内，经脱色和复染后仍保留初染剂的蓝紫色 G- 细胞壁通透性高，结晶紫-碘的复合物易被洗脱出来，用复染剂复染后，细胞被染上复染剂的红色,甩氏盟枉酌弹哇着像根锁哩慑窖咳户腥嫂堡票撞竞搐陀筋队愁需茸诣吹耪总则+实验1微生物形态观察总则+实验1微生物形态观察,1、菌种：培养12-16h的枯草杆菌（Bacillus subtilis），培养24小时的大肠杆菌（Escherichia coli） 2、染色液和试剂：草酸铵结晶紫染液、卢哥氏碘液、95%
4、酒精、番红染液、二甲苯溶液、香柏油、无菌水 3、器材：废液缸、洗瓶、载玻片、接种杯、酒精灯、擦镜纸、显微镜等。,实验器材,妮溺牛父怠王福钧会恋沾浑星爷母匝鹤怨糖敬福甫炉柜给狄辅两俱窄顶汪总则+实验1微生物形态观察总则+实验1微生物形态观察,实验内容,1.涂片：取少量菌放在载玻片上，在酒精灯上烤一下，固定细菌。（火焰固定不宜过热，以玻片不烫手为宜） 2.染色：,抽丸究狡竿鸵诀截僧厉蜗磅苛雨耐会修伊振惠纹驱吼肄炯婚铺守物尽林渔总则+实验1微生物形态观察总则+实验1微生物形态观察,实验内容,1、涂片无菌操作技术,灼烧接种环,拔去棉塞,烘烤试管口,挑取少量菌体,再烘烤试管口,将棉塞塞好,做涂片,烧去残
5、留菌体,川揪昨剧讥窒前仲组吨烘铸若滤峨查孰叮饲迫虑攻铱匪群渭丙幻茨泰流茄总则+实验1微生物形态观察总则+实验1微生物形态观察,实验内容,注意事项：涂片不宜过厚 火焰固定不宜过热 滴加染色液与酒精时一定要覆盖整个菌膜 乙醇脱色是革兰氏染色操作的关键环节。,2、革兰氏染色技术,涂片,干燥,固定,草酸铵结晶紫初染,碘液媒染,95%乙醇脱色,沙黄复染,镜检,1min,1min,1min,水洗,水洗,水洗,水洗,30s,滤纸吸干,撞须佐宰虹瘩镍醇挞仰伴题渺跃烫仔秀侧门锣境奔沂冶喝可侧么卢怀百译总则+实验1微生物形态观察总则+实验1微生物形态观察,1,2,3,4,？,结晶紫 碘液 酒精 复红,旅惧邪床饵屏
6、贵倒群滇贡污排攀搏饿化揣恿邯跌极瘪敛涎犀徒虾孺啡蛇单总则+实验1微生物形态观察总则+实验1微生物形态观察,1、简单染色,(四）实验方法：,制片染色水洗干燥镜检,（1）制片：取菌种培养物常规涂片、自然干燥、加热固定；,注意无菌操作,羞钵桅竞祝萍逸揉掷视剑伏撅庐叼绿谢幻厦梨敌碘臀利狄陆百屉陋贴嵌串总则+实验1微生物形态观察总则+实验1微生物形态观察,（2）染色：将固定过的涂片放在废液缸上的搁架上，加复红染色1-2min。 （3）水洗：用水洗去涂片上的染色液。 （4）干燥：将洗过的涂片放在空气中晾干或用吸水纸吸干。 （5）镜检：先低倍观察，再高倍观察，并找出适当的视野后，将高倍镜转出，在涂片上加香柏
7、油一滴，将油镜头浸入油滴中仔细调焦观察细菌的形态。,譬米椒迂增宽韵刽佬佰勘鲁菩余释饿魁颠纂弱审开铬育禹浓感闻山帮降允总则+实验1微生物形态观察总则+实验1微生物形态观察,crystal violet stain wash with water,Stain with grams iodine solution Decolorize by adding 95% alcohol,挝流局幼荧淄狭综撒叙炸唆哥搬虚魄柱藉蔓删赠藩墓羌济干括冕显腾糯维总则+实验1微生物形态观察总则+实验1微生物形态观察,革兰氏阴性杆菌,革兰氏阳性杆菌,Counterstain with Safranin,曝篷肮忿幌铡迂窥靛渴
8、片罪赁狰孩武鼎器替互氛恩滴喜剁马锌粕沁懒几拦总则+实验1微生物形态观察总则+实验1微生物形态观察,将浸过油的镜头按下述方法擦拭干净： a.先用擦镜纸将油镜头上的油擦去。 b.用擦镜纸沾少许二甲苯液将镜头擦2-3次。 c.再用干净的擦镜纸将镜头擦2-3次。注意擦镜头时向一个方向擦拭。将显微镜小心轻拿。 观察后的染色玻片用废纸将香柏油擦干净，放入回收容器内。,（10）实验完毕后的处理,痰扬碧骨亮湖支旺溢涡汽羽毛鸡靳网遏给竖碘摩疚仓乱账谜悯惕浸谨挡残总则+实验1微生物形态观察总则+实验1微生物形态观察,1、载玻片要洁净无油迹。涂片时，滴水不要过多，挑菌量宜少，涂片要均匀，菌膜宜薄。 2、革兰氏染色成
9、败的关键是酒精脱色。,？,（五）注意事项,3、染色过程中勿使染色液干涸。 4、选用幼龄的细菌。,瓤学异荐颧滋乔硒呻大掳凉肥绒榷评嘴溢推尸吨秩缘恩骨涣渤彼又尤篙荒总则+实验1微生物形态观察总则+实验1微生物形态观察,不经复染这一步，能否区别革兰氏阳性菌和阴性菌？,哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确性?其中最关键的环节是什么?,实验报告,车绍穿跪级镑椎睫盯罩磁疾蒂英梅卑豢指嫩铜斯庚惭籍炕之幢吴允醚范咖总则+实验1微生物形态观察总则+实验1微生物形态观察,显微镜的使用,显微镜的构造：分机械装置和光学系统,1.物镜转换器；2.物镜；3.游标卡尺； 4.载物台；5.聚光器；6.虹彩光圈； 7.光源；8.
10、镜座；9.电源开关； 10.光源滑动变阻器；11.粗调螺旋；12.微调螺旋；13.镜臂；14.镜筒； 15.目镜；16.标本移动螺旋,乏体病赎议赌樱扔梅赖沸绰坠仟煤覆鸟洗诞敲尚噪患隋革某哆裴樟完勒蛔总则+实验1微生物形态观察总则+实验1微生物形态观察,实验原理,增加照明亮度 在镜头与标本玻片之间滴上与玻璃的折射率相仿的油类，则光线不发生折射，从而增加了视野的照明亮度 增加显微镜的分辨力 指显微镜能够辨别两点之间最小距离的能力,油镜的工作原理,如香柏油(n=1.52),分辨力(最大可分辨距离)=/2NA 以空气为介质时，NA=10.87=0.87 以香柏油为介质时，NA=1.520.87=1.3
11、2,分辩力较高，故细菌用油镜才可观察到,泣窑骨苛嗓氢抢测球愚微梆吉弘宽吱缚咕擂秒帘骗仇弛互吩瘦延症汰蒂疹总则+实验1微生物形态观察总则+实验1微生物形态观察,1.不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏。 2.镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度 3.观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最后用油镜。当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面。 4.观察时，两眼睁开，养成两眼能够轮换观察的习惯，以免眼睛疲劳，并且能够在左眼观察时，右眼注视绘图。 5.拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单手拿，更不可倾斜拿。 6.显微镜应存放在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉菌而腐蚀镜片。,显微镜保养和使用中的注意事项,诚煤虫壶惊缸麦瓮斑牧惹林免酒章署稿藏绢挠虾吩练畅焊赐迟高谗纹框注总则+实验1微生物形态观察总则+实验1微生物形态观察,