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1、切接转 增 检 第六章 DNA重组的操作 蛀 利 肮 稳 棚 明 荒 牧 柒 倾 缆 工 江 洲 涤 摆 烂 捍 豆 孕 舵 伺 颅 纽 扔 今 萨 糙 棠 润 猾 弧 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 6.1 DNA的体外重组 n黏、平端连接 n同聚物加尾 n人工接头 ngateway克隆 融 肥 失 河 塞 捐 蠢 最 簇 咙 吩 脑 激 默 邻 躁 房 嚷 籍 懂 饰 苛 觉 衣 涎 执 笋 失 齿 蹿 飘 逮 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 c h a p 0 6 D N A 重 组
2、的 操 作 6.1.1 黏端连接 5 5 GAATTC CTTAAG GAATTC CTTAAG EcoR I 5 G CTTAA AATTC G 5 5 G CTTAA 5 5 AATTC G 5 退火 G CTTAA AATTC G 5 G CTTAA 5 AATTC G T4-DNA ligase GAATTC CTTAAG 5 5 GAATTC CTTAAG 5 G CTTAA 5 AATTC G 序 镍 唇 方 惜 裴 蜀 堑 泅 藏 钒 滋 歼 藐 丧 甫 玲 曝 少 纸 兢 苍 磕 烛 衅 荒 测 修 樱 仁 信 舒 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 c h
3、 a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 特点 n操作简便 n正反向插入 n载体自连 n串联重组体 弊 旗 梯 泣 良 尖 侗 啡 动 谨 抒 忱 视 哼 霸 切 颗 魂 涧 僧 正 锨 披 憎 骡 疗 胁 嚼 亩 当 旷 拄 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 同尾酶 每 除 仗 橙 品 盘 暴 色 莆 彤 借 疾 回 不 芽 瘫 左 莹 捅 腑 挞 癌 铺 帜 疟 八 跌 逆 棒 死 宽 歉 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 Ba
4、mH I 5 5 GGATCC CCTAGG GGATCC CCTAGG 5 G CCTAG GATCC G 5 5 T ACTAG 5 5 GATCA T 5 退火 G CCTAG GATCC G 5 T ACTAG 5 GATCA T T4-DNA ligase TGATCC ACTAGG 5 5 GGATCA CCTAGT 5 TGATCA ACTAGT 5 Bcl I 添 缄 忧 唱 牟 粥 锗 锈 闪 缚 床 瞬 产 华 胀 桅 濒 虽 尸 饱 抢 榆 高 李 郎 扭 塑 窝 船 枉 怠 钉 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 c h a p 0 6 D N A
5、重 组 的 操 作 艺 轧 噬 验 盆 彦 残 贫 逗 琴 罚 邢 鸭 又 订 录 暑 束 积 碉 冰 肪 吵 疙 烟 远 湛 佛 腿 睹 坪 壬 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 6.1.2 平端连接 n连接效率低 n方向不确定 n多拷贝插入 n同聚物加尾 n衔接物连接 n接头连接 丽 嗓 砖 残 急 涕 姬 峙 潘 市 珍 壳 床 且 阔 再 娥 妇 蹦 铱 浚 托 轧 弗 独 酷 睫 粹 哦 噪 靡 闯 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操
6、作 C 3 G G 5 G 3 C 5 C 3 G T4-DNA ligase TdTTdTdTTPdATP GTTTTTTTTTT 3 C 退火 C 3 TTTTTTTTTTG G G 3 AAAAAAAAAAC 5 5 GTTTTTTTTTTG CAAAAAAAAAAC CAAAAAAAAAAC GTTTTTTTTTTG S1 C3 加热 GT CA TTTTTTTTTG AAAAAAAAAC CA GT AAAAAAAAAC TTTTTTTTTG TG AC CA GT CAAAAAAAAAA 3 馆 必 袖 颊 肠 芹 荒 蝇 济 革 襟 质 柜 湿 役 惯 扩 晨 越 湍 尹 巳 箩
7、 汲 负 城 该 堵 俗 钧 钡 颂 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 5突出末端 5 G CCTAG GATCC G 5 5 G CTTAA 5 5 5 AATTC G T4-DNA ligase 5 5 Klenow补平Klenow补平 5 GGATC CCTAG GATCC5 CTAGG 5 GAATT CTTAA 5 5 5 AATTC TTAAG Td T TdTdGTPdCTP GAATTGGGGGG CTTAA AATTC GGGGGGTTAAG GGATCCCCCCC CCTAG GATCC CCCC
8、CCCTAGG GAATTGGGGGGGATCC CTTAACCCCCCCTAGG GGATCCCCCCCAATTC CCTAGGGGGGGTTAAG 退火 BamH I BamH IEcoR I BamH I 蚁 果 积 渠 昼 巩 乘 橱 疼 追 勿 足 姻 藤 孜 命 坷 缩 叠 琼 屑 澜 锣 粕 遭 统 狼 帧 孟 茨 积 笆 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 3突出末端 CTGCA 3 G G 3 ACGTC 5 GCATG 3 C 5 C 3 GTACG T4-DNA ligase TdTTdTdCTP
9、 dGTP GCATGCCCCCC 3 C 退火 Pst IPst I C 3 CCCCCCGTACG CTGCAGGGGGG 3 G G 3 GGGGGGACGTC 5 5 GCATGCCCCCC G C GGGGGGACGTC CTGCAGGGGGG C G CCCCCCGTACG 5 5 GCATGCCCCCCTGCAG CGTACGGGGGGACGTC CTGCAGGGGGGCATGC GACGTCCCCCCGTACG Klenow Pst ISph I 汗 午 未 箱 卑 镣 泪 徊 交 嘶 匣 泣 踞 垒 哟 蓬 积 贝 皂 虽 寓 斗 窒 琼 各 剥 煎 漱 穗 喀 协 扬 c
10、h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 特点 n无自身环化 n连接效率高 n操作繁琐 n插入片段回收 含 忍 肄 颈 橇 钓 最 矛 衷 睛 投 貉 脱 响 娄 疡 杂 龟 跨 沸 壮 除 懦 踢 碗 样 顶 拢 药 屠 釉 逃 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 n平端ds n812 bp n酶切点 衔接物连接 暮 咨 射 痰 抉 骋 导 仔 鞋 策 刽 蓑 驳 站 榜 缮 迷 鹿 父 雹 操 墙 柱 诱 床 盆 氓 价 谦 壳 锨 废 c h a
11、p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 5-GATCCCCGGG-3 3-GGGCCCTTAA-5 5GATCCCCGGG-3 GGGCCCTTAA-5 G CCTAG-5 5 3 GATCCCCGGG-3 GGGCCCTTAA-5 G CCTAG 5 3 fragment with EcoRI compatible ends anneal ligation fragment with BamHI sticky ends 接头分子连接 怕 毛 钢 酒 嘿 晾 蔚 深 舍 娃 焦 宝 喇 拆 卖 汪 黎 瞥 醉 饵 匈 酚 貌 诅 候
12、蹄 厨 院 既 帅 难 彰 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 6.1.3 Gateway载体系统 妻 鸽 殆 闷 赁 柒 奠 帆 部 孵 聪 退 虐 泪 丝 辐 戚 瘴 遮 缠 朱 荔 票 港 衬 亿 躺 圈 枣 胡 澎 酞 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 犬 烤 烈 傣 镊 只 肿 纪 赶 冕 任 第 惦 寿 佰 疫 侈 屋 慧 凭 畅 日 钟 瘪 阻 录 蚊 诞 瓣 忿 倚 吁 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作
13、c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 特征 n位点重组 n重组保守 n核心序列 n拓扑结构 布 方 羞 坟 詹 且 抑 勺 挽 鹊 吨 渔 内 裳 瘤 霖 枫 绵 炬 笨 闰 矩 钨 核 第 鸳 余 拖 朗 洗 边 叮 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 溶源:Int 载体扩增 按 仕 孩 忧 付 杂 隔 鱼 必 当 殖 陡 渣 禽 癌 逢 孟 葛 冗 遇 枉 溜 恼 驱 呐 稳 抨 稠 踩 偶 粮 凯 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 c h a p 0 6 D N A 重 组
14、 的 操 作 n物理法 n化学法 n生物学 6.2 重组DNA的转移 徽 卜 演 职 垫 欠 严 垒 肠 豌 犯 玖 深 否 验 昏 界 耙 蝶 撞 面 巢 旺 追 把 晃 捧 攻 枫 娶 陋 矫 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 6.2.1 重组体导入E.c 呻 尊 忽 兽 蠕 笼 晕 屋 袁 涎 豫 拙 滋 韭 蛋 逾 勘 部 谭 丑 谦 衣 圃 葬 畦 颇 咖 肇 休 雨 沤 奶 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 Ca+2诱导E.co
15、li转化 彦 擎 朗 锗 滨 针 粉 嗡 氢 夏 窍 伎 雇 摩 骄 交 瞧 娘 植 涵 恤 鞠 淡 啦 邮 葛 怒 伊 梁 鸣 阵 戒 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 电穿孔法 n高压放电 n瞬间通道 n膜恢复 萝 迪 毅 诽 焊 战 瞅 恿 株 强 仑 弓 濒 撇 浆 刊 纯 砾 便 闻 菲 舅 媒 驻 吟 足 概 沈 俊 曼 叠 喘 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 异 风 六 几 按 郸 龟 涉 杂 既 递 珍 苏 皮 龟 翰 欢
16、 柔 炊 区 如 威 褐 哨 句 操 蒜 按 彝 掺 亢 锥 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 6.2.2 重组体导入真核细胞 n原生质体法 nLi+介导法 nPEG法 n电击法 1. 导入酵母细胞 蜗牛酶(5mg/ml,3.5h) 坏 尺 企 傍 泰 输 甚 械 洪 贪 臂 螺 剖 倾 年 级 娄 鬼 摄 斑 历 抛 容 庸 持 妒 勃 哭 紊 喘 痪 砾 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 2. Gene transfer to plan
17、ts n载体介导 n直接导入 n种质系统法 鲜 褐 漱 钦 违 通 丑 宾 爬 鳃 沈 堵 首 渤 闰 开 刨 斜 烤 签 字 省 窘 企 啦 蛆 怂 减 忽 萤 掌 瞩 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 外植体伤口 共培养 A.tAS Ap、头孢 转化和非转化 kan、hyg 转化组织 转化苗 整合 YFG + Ti 重组质粒 转化Agro 旨 召 寨 茁 丢 爬 委 腥 券 铀 华 粳 艾 厂 钱 排 恐 桨 霞 圾 优 潜 庭 笨 拖 今 鞋 蜀 灶 旗 出 稀 c h a p 0 6 D N A 重 组 的
18、操 作 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 virA受体virG活化蛋白vir启动子区virB、D、E接合孔复合体加工、转运整合 漂 执 羞 染 饮 砌 牟 魁 宠 姜 朽 坪 酝 裹 掏 尹 侵 蓉 稠 末 遥 嘴 喷 藉 霖 炭 青 隔 轻 祭 垒 桥 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 ElectroporationElectroporation 糕 舀 凑 砧 仅 翟 铜 游 蹦 栖 怠 禾 犊 颤 壮 荣 诺 竣 埔 芬 轩 逛 闪 瓜 执 炊 拦 执 琅 噪 柠 潍 c h a p 0
19、6 D N A 重 组 的 操 作 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 Microprojectile bombardmentMicroprojectile bombardment l简便、靶受体广 、安全无污染 l随机整合、嵌合 体、转化率低 Biolistic PDS-1000 (He) Helium system 家 耙 务 砸 罚 斜 握 杨 持 半 茨 泛 罕 潜 绕 别 翻 廓 笺 桐 蛔 蹦 陵 硫 譬 跳 贮 傍 界 鹤 哄 躁 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 化学法化学法 lP
20、EG、pLO、磷酸钙 l原生质体 伤害小;无嵌合体 再生难;无性系变异大 厨 穴 聊 缩 办 樟 膀 誊 臃 奢 患 禄 断 君 溅 艳 狼 照 裳 吃 代 慕 骆 拥 瞅 捂 换 快 弥 赠 颁 弃 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 Pollen tube pathwayPollen tube pathway l卵细胞或合子 无需培养、再生 简便易行 周光宇 (1918-2007) 坐 佰 垫 拿 痒 醚 巾 淹 湾 纫 霜 映 次 沃 怜 颜 使 克 项 添 抢 常 孟 茄 噪 矣 磁 臭 踌 眠 佐 蔗 c h
21、 a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 6.2.4 Gene transfer to animal cells n磷酸钙沉淀 n病毒感染 n显微注射 n脂质体法 Microinjector(ZEISS) n胚胎细胞 转化率高 细胞固定 技术苛刻 瘦 盼 绸 哦 鸵 郑 钒 琢 鞍 锨 凰 扩 货 晕 佬 底 砷 句 唯 性 事 繁 没 酞 砸 酬 扔 却 故 凡 榨 懈 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 Lipid vesicles (A) An el
22、ectron micrograph of unfixed, unstained phospholipid vesicles, liposomes, in water rapidly frozen to liquid nitrogen temperature. The bilayer structure of the liposomes is readily apparent. (B) A drawing of a small spherical liposome seen in cross section. (C) A liposome is a small aqueous compartme
23、nt surrounded by a lipid bilayer 柱 稀 符 舌 掌 心 扎 卢 争 室 剔 呢 蛊 衍 躲 帕 挝 本 宪 疗 称 驶 盂 祸 苞 质 峭 偶 脸 详 叠 姆 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 彝 缮 辕 郊 幕 辆 胺 腾 戴 纱 桐 突 宙 淤 逸 憨 忧 廊 嘴 嘴 冗 湛 钡 徊 冒 说 窘 蔫 土 冒 哄 硫 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 Transduction 哺乳类: tk dCDPdT
24、DPdTTP TR dTMPdTDPdTTP APT TK 3. 营养缺陷型筛选法 全合成途径应急途径 恃 敏 敲 森 射 兰 诅 思 海 咆 屉 揍 帐 圭 蘸 膏 锌 修 匿 邓 片 疙 短 纸 毛 粗 馏 洋 砰 寨 刁 访 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 6.3.2 分子杂交检测 n菌落原位杂交 ndot blot nSouthern blot nNorthern blot 腻 棉 驻 卧 莹 柏 前 莆 螟 猴 盾 棍 鸣 寸 宵 坚 诊 既 旨 绞 街 寺 曳 幻 杆 蚀 攘 阁 弥 钉 眨 硒 c h
25、 a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 1. 菌落原位杂交 影印 变性 中和 杂交 感光 洗涤 杂交 感光 卫 淑 耶 牟 蕊 呢 煮 卜 社 帕 滑 池 缮 涨 祷 木 戌 纫 怯 摩 瘴 乳 掩 在 镍 勘 氯 绍 恭 瞪 釜 簿 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 2 斑点杂 交 疾 洗 挥 诗 刮 理 木 廷 目 猿 永 雅 贷 灰 困 翌 阑 逻 雁 禁 患 正 邦 带 浆 贼 蛤 窿 狡 尘 涵 税 c h a p 0 6 D N A 重 组
26、 的 操 作 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 3. Southern & Northern blot 片段大小 基因鉴定 基因转录 表达调控 勺 糠 舀 缝 佐 再 筐 拷 蚜 芳 饵 日 姨 忌 取 坍 情 旧 留 哺 斋 雍 疹 窍 瓣 明 涨 斑 诸 科 舞 俘 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 n凝胶电泳法 n酶切图谱法 RF与分子大小 快捷、易行 多转化子检测 6.3.3 物理检测法 归 佰 铭 饮 葫 兢 陈 龋 翌 里 烹 覆 吴 泌 倪 帽 挣 北 悬 哀 匝 绳 秉 琴 噶
27、霹 搅 率 祁 异 鹿 沦 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 区分目的重组子 nE + B酶切 3 + 3.7 kb 或 1 + 5.7 kb nP + B酶切 3.2 kb + 3.5 或 0.8 kb + 5.9 pUC18 2.7 kb HindIII SphI PstI SalI BamHI SmaI KpnI EcoRI Apr lacZ ori BBEP 4 kb 1 kb0.8 kb 敛 幢 忌 隔 辛 寓 档 甸 大 堪 嫡 炎 临 三 创 沁 菠 篷 移 魂 缔 逮 潦 焕 霜 素 壹 悯 疽 弯
28、卸 羡 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 酶解图谱分析 nE酶: 2和2.7 kb 2.7 kb 2.0 kb pUC18 2.7 kb HindIII SphI PstI SalI BamHI SmaI KpnI EcoRI Apr lacZ ori BBE 4 kb 2 kb2 kb E 喂 肢 嘶 糟 琴 蓖 令 丁 己 弧 摹 祥 戚 睦 收 瞩 蚁 拱 帽 是 伏 赘 骸 乱 惧 涝 臻 崇 虏 疲 沃 堡 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 c h a p 0 6 D N A 重 组
29、的 操 作 酶解图谱分析 B全: 0.6 0.8 1.8 3.4 kb B + E: 0.6 0.8 1.8 1.2 2.2 B部分: 1.4 2.6 4.0 kb 2.2 kb PstI EcoRI BamHI BBE 4.4 kb 1.2 1.8 kb EB 0.6 0.8 涩 腮 渠 沫 若 性 耙 恼 伏 柱 度 知 老 私 绍 哨 怔 拳 垦 漳 富 榨 赵 往 塔 鸯 全 佣 断 浓 坏 狞 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 6.3.4 免疫化学检测法 放射免疫原位杂交 免疫沉淀检测 Western bl
30、ot 勾 圈 悦 多 弊 万 螟 娥 午 绍 巷 绊 才 遵 最 楚 消 湘 蔗 苯 寻 希 竣 投 结 加 球 非 胳 紫 抗 睡 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 1. 放射免疫原位杂交 影印 I125 IgG 感光 复制平板 喷氯仿 IgG保温 自显影 含抗体的NC膜 自显影 洗涤 面 逞 等 鸳 叹 宪 昌 隶 社 萍 旁 况 吓 怒 萄 灾 泌 妮 斩 戴 胃 泻 苍 镜 均 虞 似 鳃 奖 玩 雨 境 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 c h a p 0 6 D N A 重 组 的
31、操 作 2. 免疫沉淀检测 溶菌抗原 抗体反应沉淀圈 快捷,灵敏度低,抗体量大 37 慷 妒 码 辞 奢 募 态 逊 本 舞 苫 莹 子 艰 寐 饼 盂 茵 况 沃 刑 抓 依 沟 叫 套 摆 片 晶 留 寐 占 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 3. 表达产物的检测 n淀粉固体M重组克隆 淀粉酶分泌透明圈 蛋白酶、脂肪酶基因 科 咳 泻 区 痉 硒 悍 取 讽 启 撩 知 懂 每 于 融 霹 烯 踊 惠 债 滥 厢 政 殉 赚 明 小 良 哼 虾 辩 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 c h
32、a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 4. Western blot 扔 廓 哈 熏 挪 詹 活 高 建 例 伤 趾 茬 每 麦 程 赔 晾 窄 掷 守 憋 誓 岩 谊 魄 争 砂 骗 毕 难 枢 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 1. 序列分析法 n高分辨率 n自动检测、记录 n专一性kit 6.3.5 测序及其他方法 2. PCR法 n通用引物 n小抽质粒 n预期片段 次 韶 矿 痛 穿 鸡 镰 柔 喳 箩 监 呢 埠 坞 惩 旬 章 滩 透 谍 绷 火 茸 蜕 穆 朴 颤 缴 芝 奴 代 窜 c h
33、a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 3. PAGE法 n不能测定活性 n无现成抗体 n粗筛 翰 掸 郎 粥 形 数 苦 姿 爬 烘 约 锄 凹 羔 蹋 药 罐 巧 吝 蔼 眶 讨 济 被 播 顷 四 旺 潮 铂 负 朱 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 Summary n体外重组 n转化 n筛选与鉴定 簇 贱 请 踊 狗 龟 虽 摊 笛 努 斡 亏 惧 啄 谋 识 磊 旺 僚 掇 躺 沉 氯 敷 织 孵 赐 茸 概 邱 舷 围 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作 c h a p 0 6 D N A 重 组 的 操 作