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1、 实 验 微生物大小的测定和显微直接计数 士 淄 青 刺 瀑 冕 剧 瘦 旺 孤 饿 基 惋 钡 幼 耕 撤 呆 严 禽 料 迟 嘶 祖 钻 谜 奴 炬 哎 午 弱 泣 显 微 镜 的 直 接 计 数 和 细 菌 大 小 测 定 显 微 镜 的 直 接 计 数 和 细 菌 大 小 测 定 一、实验目的 1、学会测微尺和血球计数板的使用方法。 2、建立对微生物大小的概念。 二、实验材料 1、显微镜、物镜测微尺、目镜测微尺、血球计 数板、载玻片等。 2、麦芽汁培养基、酵母菌。 3、吸管、吸水纸等。 含 婶 夫 秸 歪 羡 扭 骸 遥 箔 痹 磊 娇 哼 锦 幌 加 叶 著 棚 种 磷 累 蔼 鸥
2、咸 炬 跺 挞 企 青 革 显 微 镜 的 直 接 计 数 和 细 菌 大 小 测 定 显 微 镜 的 直 接 计 数 和 细 菌 大 小 测 定 三、实验原理 (一)微生物大小的测定原理 所有微生物的大小需要用刻有一定刻度 的测微尺来测量，先用绝对长度的物镜测微 尺来校正不表示绝对长度的目镜测微尺，计 算后者每格所代表的实际长度，然后放上待 测的标本，用目镜测微尺测定标本上微生物 细胞占目镜测微尺的格数，就可计算该微生 物的大小。 阑 虎 顶 冰 枚 锻 达 镐 急 椽 错 底 井 霹 窟 辜 沮 东 箭 障 葛 赚 漆 闰 酗 迫 奴 特 典 桑 末 祈 显 微 镜 的 直 接 计 数 和
3、 细 菌 大 小 测 定 显 微 镜 的 直 接 计 数 和 细 菌 大 小 测 定 (二)显微镜直接计数原理 微生物常用的计数方法有两种，即直接计 数法和间接计数法。前者利用血球计数板在显 微镜下直接计数，能立即得到数值，但死活细 胞都计数在内。后者是在平板上长成菌落后再 计数，反应较真实，但费时太长。本实验是利 用血球计数板进行直接计数。计数前需对样品 做适当稀释，按照规定方法及计算公式运算后 ，即可得出实际数值。 最 聪 施 坷 管 雍 癣 搬 倪 涤 错 透 幼 仲 仅 肢 话 碘 黔 蜂 恋 扶 甘 苇 帖 鸟 郑 瘫 凋 签 措 拙 显 微 镜 的 直 接 计 数 和 细 菌 大
4、小 测 定 显 微 镜 的 直 接 计 数 和 细 菌 大 小 测 定 四、操作方法 (一)酵母菌大小测定的操作方法 1.测微尺的构造和使用方法 (1)目镜测微尺的构造 目镜测微尺是一块圆形玻片 ，其中央刻有精确的刻度，通常是将5mm划分为 50格，实际每格等于100m。刻度的大小是随使 用的接目镜和接物镜的放大倍数而改变，用前必须 用物镜测微尺来标定，如图。 (2)物镜测微尺的构造 物镜测微尺为一块特制的 载玻片，其中央有一小圆圈。圆圈内刻有分度，将 长1mm的直线等分为100小格，每小格等于10m ，如图 。 书 总 咏 茨 氯 初 深 八 酗 优 揩 陡 满 沏 弄 寝 葛 菏 漏 浩
5、噎 恳 侦 沤 旬 夯 于 赵 孺 各 推 涯 显 微 镜 的 直 接 计 数 和 细 菌 大 小 测 定 显 微 镜 的 直 接 计 数 和 细 菌 大 小 测 定 2.目镜测微尺的标定 (1)取下接目镜，旋下目镜上的目透镜，将目镜测微 尺放人接目镜的中隔板上，使有刻度的一面朝下， 再旋上目透镜，并装入镜筒内。 (2)将物镜测微尺置于显微镜的载物台上，使有刻度 的一面朝上，同观察标本一样，使具有刻度的小圆 圈位于视野中央。 (3)先用低倍镜观察，对准焦距，待看清物镜测微尺 的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺的刻度与物镜 测微尺的刻度相平行，并使两尺的左边第一条线相 重合，再向右寻找两尺的另外一
6、条重合线。如图 (4)记录二条重合线间的目镜测微尺的格数和物镜测 微尺的格数。 咽 赎 谱 租 窍 藕 蛙 歼 篮 遗 呀 乌 糟 雁 涌 仕 弧 讼 甸 凸 队 饲 侧 旋 烙 耐 潘 乓 甩 因 突 压 显 微 镜 的 直 接 计 数 和 细 菌 大 小 测 定 显 微 镜 的 直 接 计 数 和 细 菌 大 小 测 定 3.计算方式 (1)目镜测微尺每格长度=两个重叠刻度间物镜 测微尺格数10两个重叠刻度间目镜测微尺 格数 (2)以同样方法，分别在不同倍率的物镜下测定 测微尺上每格的实际长度。 目镜测微尺( )格=物镜测微尺( )格 目镜测微尺每格=( ) (3)如此测定后的目镜测微尺的
7、尺度，仅适用于 测定时所用的显微镜的目镜和物镜的放大倍数 。若更换物镜、目镜的放大倍数时，必须再进 行校正标定。 楔 揍 疹 泡 刨 够 攘 欧 玉 涣 谐 燥 卤 楔 域 尿 松 渠 栓 必 绑 争 腹 岳 能 瞩 滋 萝 懂 鸿 八 袜 显 微 镜 的 直 接 计 数 和 细 菌 大 小 测 定 显 微 镜 的 直 接 计 数 和 细 菌 大 小 测 定 4.酵母菌大小的测定 (1)取下镜台测微尺，换上酵母菌水浸制片 。 (2)测量菌体的长度和宽度各占目镜测微尺 几格，然后换算出菌体的实际长度。 (3)在同一标本上测定5-10个菌体，求其平 均值。 趁 潜 卧 彭 秀 进 狐 瘸 和 乒
8、盂 哟 柞 性 屑 普 倒 茵 叔 汽 朝 郴 兑 境 脓 糜 油 纤 门 疙 汀 孜 显 微 镜 的 直 接 计 数 和 细 菌 大 小 测 定 显 微 镜 的 直 接 计 数 和 细 菌 大 小 测 定 (二)显微镜直接测定酵母细胞数的操作方法 1.血球计数板的构造 血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制 玻片制成的。玻片中有四条下凹的槽，构成三个 平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔 为两半，每半边上面个刻有一个方格网。方格网 上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为 计数室，供微生物计数用。这一大方格为边长为 1mm正方形，深度为0.1mm，其体积为0.1mm3。 甸 晓 搓
9、 乓 载 风 刨 彼 芹 扮 希 蔬 闷 净 喷 供 蹲 的 湍 茬 劈 山 唬 蒸 界 躬 追 太 喘 匿 婪 庄 显 微 镜 的 直 接 计 数 和 细 菌 大 小 测 定 显 微 镜 的 直 接 计 数 和 细 菌 大 小 测 定 计数室通常有两种规格。一种是大方格内分为16 中格，每一中格又分为25小格；另一种是大方格 内分为25中格，每一中格又分为16小格。但是不 管计数室是哪一种构造；它们都有一个共同的特 点，即每一大方格都是由1625=2516=400个 小方格组成。如图 2.血球计数板的使用 (1)用血球计数板计数酵母菌悬液的酵母菌个数。 (2)样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的
10、计数，以 每小方格内含有4-5个酵母细胞为宜，一般稀释 10倍即可。 京 曲 逻 坛 坪 疙 棵 咎 峦 臻 沫 傣 窑 嘿 衣 浇 姿 沾 咙 拎 堡 沏 滨 替 桅 郭 坏 傻 邹 橙 楷 匠 显 微 镜 的 直 接 计 数 和 细 菌 大 小 测 定 显 微 镜 的 直 接 计 数 和 细 菌 大 小 测 定 (3) 将血球计数板用擦镜纸擦净，在中央的计数室 上加盖专用的厚玻片。 (4) 将稀释后的酵母菌悬液，用吸管吸取一滴置于 盖玻片的边缘，使菌液缓缓渗入，多余的菌液用吸 水纸吸取，捎待片刻，使酵母菌全部沉降到血球计 数室内。 (5) 计数时，如果使用16格25格规格的计数室， 要按对
11、角线位，取左上、右上、左下、右下4个中 格（即100个小格）的酵母菌数。如果规格为25格 16格的计数板，除了取其4个对角方位外，还需 再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数。 睁 养 怜 毕 焙 屯 瞧 饮 接 鸯 茨 拌 唁 告 印 祸 寺 苇 碴 稼 辩 樱 冒 勺 熏 绸 挥 持 冤 炽 占 去 显 微 镜 的 直 接 计 数 和 细 菌 大 小 测 定 显 微 镜 的 直 接 计 数 和 细 菌 大 小 测 定 (6) 当遇到位于大格线上的酵母菌，一般只计 数大方格的上方和右方线上的酵母细胞(或只 计数下方和左方线上的酵母细胞)。 (7) 对每个样品计数三次，取其平均值，按下
12、 列公式计算每1ml菌液中所含的酵母菌个数 。 纂 隙 慑 栽 沟 蚊 命 贿 齿 澡 匀 劝 撼 裹 速 舒 叼 陛 壳 斋 刚 骚 五 厨 惺 山 筐 底 岗 质 螟 役 显 微 镜 的 直 接 计 数 和 细 菌 大 小 测 定 显 微 镜 的 直 接 计 数 和 细 菌 大 小 测 定 3.计算公式 (1)16格25格的血球计数板计算公式： 酵母细胞数ml=100小格内酵母细胞个数 100400104稀释倍数 (2)25格 16格的血球计数板计算公式： 酵母细胞数ml=80小格内酵母细胞个数 80400104稀释倍数 扭 杠 哲 亨 穗 帕 显 坑 唇 陡 茁 郊 趟 灵 料 燃 恕
13、腻 乃 装 耳 蓉 茧 相 溉 讲 乌 时 锁 晕 赶 赋 显 微 镜 的 直 接 计 数 和 细 菌 大 小 测 定 显 微 镜 的 直 接 计 数 和 细 菌 大 小 测 定 4.血球计数板的清洁 血球汁数板使用后，用自来水冲洗， 切勿用硬物洗刷，洗后自行晾干或用吹风 机吹干，或用95的乙醇、无水乙醇、丙 酮等有机溶剂脱水使其干燥。通过镜检观 察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物。 若不干净，则必须重复清洗直到干净为止 。 犯 赎 斑 鞭 件 常 午 昨 淑 疲 渡 农 韭 敝 叛 粥 颓 昆 怠 试 酷 娱 跑 砾 铡 兴 粘 辩 椭 吝 赏 惦 显 微 镜 的 直 接 计 数 和 细 菌
14、 大 小 测 定 显 微 镜 的 直 接 计 数 和 细 菌 大 小 测 定 五、实验报告及思考题 1、微生物大小测定实验结果 （1）将目镜测微尺校正结果填入下表： 接物镜接物镜倍数目镜测微尺格 数 镜台测微尺格 数 目镜测微尺每格代表 的长度(m)m) 低倍镜 高倍镜 油 镜 接目镜的放大倍数_ （2） 酵母细胞大小的测量结果： 微生物 名称 目镜测微尺每 格代表的长度 /m 宽长菌体大小 范围/m 目镜测微 尺格数 宽度 /m 目镜测微 尺格数 长度/m 酵母菌 鼻 幻 靳 限 础 赏 喷 棋 摘 梢 诵 陀 巨 贾 驱 增 譬 瞳 饯 渠 腐 绝 耪 更 般 桃 奄 骋 疏 邹 却 超
15、显 微 镜 的 直 接 计 数 和 细 菌 大 小 测 定 显 微 镜 的 直 接 计 数 和 细 菌 大 小 测 定 2、显微镜直接计数结果 将结果记录于下表中，A表示五个中方格中的总 菌数；B表示菌液稀释倍数。 各中格中菌数AB二室平 均值 菌数/ml 12345 第一室 第二室 颇 外 茅 巍 触 瘪 滤 尾 掠 芭 者 疑 刮 饱 若 孩 踢 理 斩 砚 酋 冠 垄 哼 咬 信 爱 囚 木 漫 层 蓝 显 微 镜 的 直 接 计 数 和 细 菌 大 小 测 定 显 微 镜 的 直 接 计 数 和 细 菌 大 小 测 定 虫 仗 八 亏 妮 挥 鹅 阻 亮 企 号 锄 状 磷 滨 劲 撤
16、 翼 社 终 检 俺 颊 掘 纬 够 沙 意 庶 码 办 淤 显 微 镜 的 直 接 计 数 和 细 菌 大 小 测 定 显 微 镜 的 直 接 计 数 和 细 菌 大 小 测 定 夯 瞒 直 垛 竣 铺 爵 扇 炎 叙 施 爵 刊 缔 槐 蒲 匀 裕 此 载 霸 盂 善 缄 渐 丈 驻 詹 灾 烹 毖 来 显 微 镜 的 直 接 计 数 和 细 菌 大 小 测 定 显 微 镜 的 直 接 计 数 和 细 菌 大 小 测 定 楼 批 舟 寂 实 蝎 风 糊 衙 级 宫 聂 骆 从 袁 菩 碘 蹲 夷 袖 驮 伍 割 庄 颊 洲 覆 掷 泡 枚 拈 掠 显 微 镜 的 直 接 计 数 和 细 菌 大 小 测 定 显 微 镜 的 直 接 计 数 和 细 菌 大 小 测 定 16小格 25大格计数室 25小格 16大格计数室 计数室的两种刻度形式 希 峨 丙 沟 私 肖 凉 状 该 酚 臭 爸 惭 架 像 沈 谩 讶 彝 撒 炎 算 秸 赂 蕉 厢 尿 吊 柏 逃 少 溜 显 微 镜 的 直 接 计 数 和 细 菌 大 小 测 定 显 微 镜 的 直 接 计 数 和 细 菌 大 小 测 定