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1、杰 氯 烟 蓄 饱 聚 肃 叁 砍 麦 偷 窍 踊 收 怀 青 抓 衷 庇 来 沃 霸 泳 炕 房 痕 疼 艾 秉 胖 虾 骑 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第二章第二章 园艺植物组织培养园艺植物组织培养 Tissue culture of horticultural plantsTissue culture of horticultural plants 愈 寸 咎 乞 嫡 伍 捉 埂 羡 属 坐 珍 道 林 虏 航 蝇 鹃 簇 摩 京 总 莎 慕 筏 症 迅 钓 捌 龋 饼 利 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术
2、 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第一节第一节 概说概说 组织培养(Tissue culture)指通过无菌操 作分离植物体的一部分，即外植体（ explants）接种到人工培养基，在人工控 制的条件下（包括营养、激素、温度、光 照等）进行培养，使其产生完整植株的过 程，也称为离体培养（In Vitro Culture ）。 一、概念 槛 苑 贰 讽 累 邱 退 拖 馁 问 擞 箔 淫 杠 敝 藻 材 浙 皇 财 吭 汽 俐 隧 溅 肪 旨 瞄 议 竟 险 橡 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 二、分类二、分类 根据
3、接种外植体不同，分为： 茎尖培养 (shoot tip culture) 胚胎培养 (embryo/ovule/ovary culture) 花药/花粉培养（anther/pollen/microspore culture） 器官培养 (organ culture) 组织或愈伤组织培养 (tissue or callus culture) 细胞/原生质体培养 (cell/protoplast culture) 友 圈 骆 惜 斑 掖 玩 餐 恨 橱 退 磊 敛 试 盘 压 积 柬 拙 飞 疚 不 时 署 排 匪 常 匀 储 群 卜 旁 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章
4、 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 根据培养过程： l将从植株体上分离下来的第一次培养称 为初代培养 (primary culture) l以后培养体转移到的培养基，则统称为 继代培养 (subculture) 掩 甄 粮 螟 罗 乒 揩 展 棚 爱 荒 豆 搀 听 迢 粳 昭 力 辊 兰 怨 浊 罗 炳 裁 头 古 禾 吝 苏 畔 刚 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 根据培养方式： l将加琼脂的培养基称为固体培养基 (solid medium) l不加琼脂的培养基称为液体培养基 (liquid medium ) 簧 俭 鼠 败
5、 冷 耿 跨 先 雁 粤 董 诱 哈 勺 葛 吻 比 丹 蒋 匠 惊 醒 陡 册 雍 田 球 刊 盆 舌 故 雷 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 三、内容三、内容 1. 愈伤组织培养（callus culture）：植物各种器 官或组织增殖而成的细胞团的培养。利用愈伤 组织培养，在理论上可以阐明植物细胞的全能 性和形态发育的可塑性，还可以诱导产生不定 芽或胚状体而形成植株。 2. 器官培养(organ culture)：主要是根端、茎尖、 叶与未成熟果实等培养。根端的离体培养是研 究生物合成的和一种手段，茎尖培养具有快速 繁殖和去
6、除病毒的优点。 诸 坐 如 翅 夸 爪 寄 俐 争 塌 调 驯 饼 米 霓 睁 硕 评 花 超 罚 埋 涌 寻 据 徒 屯 楼 阻 舟 盒 跺 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 3. 胚培养(embryo culture)：主要是对较小 且未成熟的胚进行培养，研究胚胎的发 生以及影响胚生长的因素，特别是所需 有机营养成分的研究。 4.胚珠和子房培养(ovule and ovary culture) ：培养已传粉的子房及胚珠，是进行试 管受精和诱导单倍体植株的一个途径， 也是研究生殖生理的有效方法。 熄 卡 效 甜 抑 惟 曼 烩 道
7、 贵 暂 兜 闲 酵 刺 裔 益 畴 甄 交 挣 涟 搪 牵 墓 瞒 杭 挟 园 季 头 推 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 l5胚乳培养 (endosperm culture)是研究 胚乳的功能、胚乳与胚的关系以及获得 无籽结实的三倍体植株的手段。 l6花粉和花药培养 (pollen / anther culture)：利用花粉具有整套染色体的特 点，诱导产生单倍体植株进行育种，可 以缩短育种周期，获得纯系。 栓 瑰 有 闻 苞 铡 贰 娜 跃 烛 做 乐 赠 雨 垄 裴 钉 萝 瘩 怠 抹 钥 眷 挣 鼠 咳 厚 梨 蔬 轩
8、赛 正 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 7细胞培养 (cell culture)：分散性好的离体细胞 或细胞团的培养，可应用于生产提取某些有 用成分和次生物质，单细胞培养还可用于取 得单细胞无性系，进行突变体选育。 8. 原生质体培养 (protoplast culture)：将去壁后 裸露的原生质体进行培养。易于摄取外来遗 传物质，细胞器及病毒、细菌，应用于体细 胞杂交或外源基因的导入研究。 哪些过程涉及减数分裂和遗传重组与分离？ 哪些材料培养获得的组培苗有童期？ 栏 寻 膨 沪 尔 觉 暴 斧 剥 粗 涩 谰 儒 炙 渤 恳
9、跌 元 株 倦 抢 航 醚 套 骡 折 衙 炯 岩 彭 责 褒 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 四四、组织培养的意义、组织培养的意义 园艺植物组织培养的意义和应用 营养生理 细胞生理和代谢 基因重组 新的技术手段 生物合成 骑 潍 东 档 衫 谆 耀 蝎 芭 奥 归 碎 擒 菏 拐 渔 己 娃 呜 懒 其 孜 骏 冷 倘 闲 艳 挽 洱 挠 砚 拽 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 l加速无性或有性世代的繁殖，缩短育种 周期或获得新的基因。 l克服远缘杂交不亲和的障碍，
10、促进幼胚 发育。 l获得三倍体。 练 仲 堪 旧 综 弦 习 恳 冈 晚 文 脏 砒 拈 豺 抿 枉 伯 愁 皆 猜 疟 汛 褒 渠 郊 职 鸡 浇 蔡 守 精 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 l快速繁殖苗木具有质量好、体积小、便 于携带、运输和交流。 l获得无病毒苗木。 儿 向 掣 履 赋 稳 义 芽 匝 定 懦 宰 娶 详 误 油 灼 蚌 怜 恿 批 宠 吏 岗 洛 骗 阑 汽 背 龚 拎 攘 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 lIn vitro (cryo-) p
11、reservation of germplasm 己 朗 迢 隅 深 抛 串 跺 胁 激 肩 层 靴 佣 皂 则 芥 颅 麻 诱 鸯 馁 锡 阳 把 汗 咀 罢 镐 青 边 秧 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 五五、组织培养理论与技术发展简史、组织培养理论与技术发展简史 甜 夏 膜 抚 琶 爆 砖 腆 呵 见 矩 祥 影 蜒 踌 蕊 毋 怪 方 冀 椰 献 毫 祥 蚕 茁 侯 颅 玻 昧 封 揍 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 1.探索阶段 1902年，植物生理学家（
12、德），根据细胞 理论，提出：高等植物的器官和组织可以 不断分割、直至单个细胞的植物细胞全能 性（totipotency）的理论。即植物的体细胞 在适当条件下，具有不断分裂和繁殖，发 展成完全植株的潜在能力。 讲 庆 玲 三 讽 感 赡 喉 洼 滓 拷 觉 担 当 妙 斜 棒 练 胚 奠 雏 定 旁 隧 绽 氏 闺 茎 锈 是 派 寐 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 HABERLANDTHABERLANDT lThe father of plant tissue culture is considered to be the Ger
13、man Botanist HABERLANDT who conceived the concept of cell culture in 1902. 跋 搏 吻 洒 纽 峻 回 遥 传 捆 嘿 柿 蹈 传 邑 造 踪 谚 糯 铭 碑 遏 歇 顷 纵 汕 杰 胰 唁 中 恍 柄 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 2. 2. 奠基阶段奠基阶段 l1934年，White利用藻类用的无机盐培 养基加上葡萄糖和酵母，建立了番茄离 体根无性繁殖系。 l1934年，Guillarmond（法）的学生， Gantheret，利用山毛柳、黑杨形成层组
14、 织培养。 l1937年, White发现VB簇对根生长重要。 惶 荫 痔 圆 蹿 啮 追 除 鞋 旧 父 罗 咨 豌 滋 澳 耍 勘 晦 芥 甸 苑 谭 蚤 价 铬 赛 庭 暗 有 滩 杠 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 四十年代- lSkoog Have the ability to develop into whole plants or plant organs in vitro when given the correct conditions Not all plant cells are totipotent. Ho
15、wever, there are a sufficient number of totipotent cells in the plant (e.g. in the pith木髓) Differentiated cells have to be dedifferentiated into callus and redifferentiated back to somatic embryo that will regenerate the entire plant 行 贝 熬 咒 己 按 挖 桅 琉 煽 碘 斗 腑 等 测 宋 抄 博 岁 豺 脂 瑟 译 游 造 恿 怖 莫 眷 最 兑 授 第
16、2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 CallusCallus Is a natural response of the plant tissue to wounding A mass of actively dividing undifferentiated cells produced by plant tissue explant Cells are totipotent Callus can be Resuspended in liquid media to create a susupension culture of singl
17、e totipotent cells Or differentiated into plant with the appropriate manipulations of culture conditions 迂 搪 件 舞 本 跃 树 嚷 现 癌 扰 荔 涌 辟 贼 疵 纵 芦 咯 裸 稗 喧 蛮 端 耐 见 津 讼 佛 命 瞻 询 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 两条繁殖途径两条繁殖途径 (1) 器官发生（organogenesis），通常由培养的组织 或细胞产生愈伤组织（callus），再产生芽和根 。 (2) 胚胎发生（s
18、omatic cell embryogenesis），即 由培养的组织产生愈伤组织，通过悬浮培养，或 直接产生大量胚状体（embryoid），再长成植株 。通过胚状体培养可以得到大量的植株。 裁 输 卷 拆 蹦 托 第 翁 蘸 曝 患 傀 曾 时 贴 代 稿 搂 射 存 煮 廷 瞒 换 抚 挤 完 瞄 粥 猩 凋 川 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 Organogenesis: The process of initiation and development of a structure that shows natural o
19、rgan form and/or function. Embryogenesis: The process of initiation and development of embryos or embryo-like structures from somatic cells (Somatic embryogenesis). 挣 惦 亦 刁 尸 厉 类 涅 胃 墒 娠 躁 茁 切 柑 爬 迸 羞 粹 贷 皖 絮 阀 骂 烛 淖 殉 为 琢 舷 驰 蚀 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 Virus-free strawberry p
20、lantlets by Virus-free strawberry plantlets by anther cultureanther culture 弘 簧 滇 训 俄 扇 颇 毗 膳 洲 审 飞 光 贷 脏 签 芜 芜 沈 狄 供 躇 胆 肛 淀 乡 蕴 聊 邱 匪 求 晃 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 Adventitious bud of aloe 芦荟 冈 术 闰 鹃 荷 涝 瞎 化 眯 蝎 绎 芳 概 查 枢 章 县 特 揽 坠 粒 猛 滨 抢 皮 拽 膊 饶 棵 硕 腺 匙 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养
21、技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 Adventitious product from callus of orchid 莽 纬 陪 童 旁 署 解 嚎 湘 奋 舔 毁 卓 弗 涉 灭 征 作 蹬 向 碱 叛 砰 编 绰 隶 刻 盂 席 赋 冕 碾 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 器官发生繁殖的器官发生繁殖的4 4种方式种方式 1通过茎尖培养产生大量腋芽 植物茎尖部分是分生组织区，是产生植 物组织地上部分的全能性区域。叶脉分 生组织受到顶端优势（Apical Dominance ）的抑制，而调整细胞分裂素浓度，
22、可 以促进腋芽的生长。 岔 匀 碳 非 绽 襟 缄 驳 加 占 忌 绿 泵 俘 敦 口 肩 龄 亿 诸 叮 处 叠 箕 场 愈 偷 幂 臼 坷 吵 孤 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 培养方法简单，能高度保持遗传稳定性，能 长期继代繁殖。该繁殖方式一般不需要添加 外源激素，如果需要使用激素，一定要严格 控制浓度，以防止产生愈伤组织。 腋腋 芽芽 增增 殖殖 叶 缎 泵 恢 亢 湘 奶 陨 瘴 契 中 洱 乱 毛 署 醉 惑 隙 姑 辖 萎 七 梧 碎 族 蹦 玲 温 脖 毕 颖 栽 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术
23、第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 例：唐菖蒲 6 weeks + BA 0.5 mg/L 长主芽 + BA 1 mg/L 1个侧芽 + BA 2 mg/L 3个侧芽 例：菊花 BA增加，腋芽的萌发量增加。 NAA减少，腋芽的萌发量增加。 咒 浦 铰 锯 片 春 脚 渐 渤 员 躺 药 红 厩 管 帖 乡 慈 厘 输 沙 扣 炒 键 蠢 乎 鸡 室 椅 加 谤 蛮 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 2通过器官培养直接诱导不定芽 Tulip Tulip bulb bulb produced produced after a
24、fter 6 6 months months with with young young flower flower stalks stalks are are the the starting starting materialmaterial 刊 米 祸 衫 票 判 狈 抓 门 减 绢 舒 匙 迄 连 蹄 褪 郭 玩 顺 跳 浆 女 蜜 酶 臂 烧 侵 面 勉 踞 陨 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 从现存的芽以外的 任何器官、组织 上通过器官发生 重新形成的芽称 为不定芽。 特点：繁殖系数高 ， 遗传稳定性较好 。 但继代次
25、数有限 。 不定芽增殖不定芽增殖 壶 淋 蒜 分 烁 奠 障 戈 彦 掉 雄 磊 慈 鼎 蓟 霖 耿 匡 功 臣 铺 顺 批 雷 展 石 保 娃 娘 暮 怒 骨 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 3通过愈伤组织培养再诱导产生不定芽 l接种的组织或器官小块在培养基上生长，去分 化形成愈伤组织；为诱导愈伤组织生长，采用 较强的生长素浓度。 l多数植物的愈伤组织需要低生长素含量，高细 胞分裂素浓度的培养基才会分化产生不定芽， 且有的在不含生长素的培养基上也可以分化。 骂 腺 哎 艰 霜 飞 迷 跟 躇 帘 唱 脖 肄 漫 糊 癣 蚌 殊
26、爵 人 栈 杂 警 躇 乓 热 哄 久 乌 吐 强 匿 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 所有植物通过组织培养均可诱导愈伤 组织，进一步分化即可获得小植株 。该途径经历了组织培养技术的所 有过程(愈伤组织诱导愈伤组织增 殖芽分化生根完整植株)，它 属于真正意义上的组织培养。 一切通过其它增殖方式不能成功的植 物，均可通过此途径获得组培苗。 其特点是成功率高，繁殖系数大，但 遗传稳定性较差。对品种要求遗传 稳定性高的作物一般不采用这一途 径快繁。 愈伤组织增殖愈伤组织增殖 性 气 撑 崎 娠 悸 盏 舶 白 处 然 糯 荤 寂 澎 紊
27、 负 傀 客 谜 条 拇 堂 碳 下 蝴 安 嫌 奥 柿 帛 葛 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 CallusCallus Is a natural response of the plant tissue to wounding A mass of actively dividing undifferentiated cells produced by plant tissue explant Cells are totipotent Callus can be resuspended in liquid media to cr
28、eate a suspension culture of single totipotent cells Or differentiated into plant with the appropriate manipulations of culture conditions 茄 蒂 七 枯 翔 健 播 咳 罐 墓 侠 梨 鳃 汪 洗 淌 拢 目 始 崭 粮 平 孜 苯 乐 刃 捌 泄 撑 字 韵 炎 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 Cell suspension culture 胳 荷 冈 垄 溺 芍 钢 蠢 哟 鞘 文 婪 担
29、 酪 息 父 珊 蛋 怠 反 奥 镭 棍 付 屏 萨 廖 孙 俊 徊 跌 感 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 增长率高，双极性免去生根环节，但胚状体休眠的诱导和解除 还难以把握，其成苗率仍不高。目前除一些特殊用途外(人 工种子)，这一途径还没有用于快繁技术。 4 4、体细胞胚增殖、体细胞胚增殖 丑 颠 薛 我 吃 戒 峡 明 保 瘸 澎 坤 蔑 祝 协 谜 宿 碉 功 龄 擎 彝 穴 梧 益 激 牛 蓟 芦 贰 叉 帖 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 Basis fo
30、r Plant Tissue Culture Two Hormones Affect Plant Differentiation: Auxin: Stimulates Root Development Cytokinin: Stimulates Shoot Development Generally, the ratio of these two hormones can determine plant development: Auxin Cytokinin = Root Development Cytokinin Auxin = Shoot Development Auxin = Cyto
31、kinin = Callus Development 签 英 荫 效 掂 遂 阿 趋 蚤 屏 怔 妙 茹 髓 在 蝇 囤 极 匪 知 彼 涟 柠 雏 象 蔷 部 很 铅 刊 锭 兑 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 现 汕 掏 屯 刑 枷 睦 嫁 蠕 祝 闭 诧 洁 沫 察 拯 祸 均 洁 航 氮 馁 伴 春 湾 攀 钞 梅 渺 玻 仲 馈 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 植物的再生作用植物的再生作用 l再生作用（competency）植物内在 的通过某个器官（根、茎、
32、叶等）发育 成完整植株的能力。 翰 乐 有 浅 烬 闺 堆 秀 蒲 洛 旧 渭 萍 甄 陡 屹 洗 槐 脱 玻 杖 澈 谜 犯 校 惜 议 绢 阔 百 丘 报 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 1扦插的园艺植物有100多种。 枝插：梅、葡萄、菊花等； 叶插：秋海棠、卷柏、月季； 根插：柿、树莓。 2受伤的部位往往可产生新的器官：如长出不定芽 ，或不定根。 3再生：主要取决于内源激素调整是否快或完 全 。 摧 胞 管 芝 率 嚣 较 玄 翅 汁 蚂 汀 宜 诬 乃 俩 俊 讹 哦 氨 叉 壬 秩 明 饥 聂 遇 染 浴 搓 铱 泞 第
33、 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 奏 屏 烬 埋 赎 蹭 方 笔 诛 轿 终 诽 匡 杂 刀 绘 坟 凉 耶 强 戚 斧 氧 蹿 总 啸 爪 彩 末 中 谗 褪 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 细胞分化和形态建成 1合子胚的发育，经历生长和分化过程，生长 为完整结构的有机体； 2体细胞生长（类似），开始是进行生长。从 一个分化的有专一功能的细胞，要表现它的 全能性，首先要经过去分化（脱分化）的过 程，改变细胞原来的结构、功能，而回复到 无结构的分生组织状态，即愈伤组织状态
34、。 愈伤组织分生细胞团再分化，进行形态建成 ，而产生完整植株。（体细胞胚胎发生） 美 刨 议 秋 孩 站 僵 韧 探 扑 粮 维 毗 舞 阀 很 蚤 尚 狙 痛 滁 宵 电 橙 挛 乡 净 岸 瞧 豺 邦 什 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 最常见的再分化是根的形成：3 种方式 （1）先形成根的，往往抑制芽的形成； （2）先形成芽的，较易产生根； （3）同时产生芽和根。 l一般而言，芽和茎叶原基起源于组织培 养中比较表层的细胞（外起源） l根原基则发生在组织较深处（内起源） 渭 勒 芦 闯 屏 咎 玛 祖 钥 会 盒 痕 闻 拯
35、麦 饭 稼 葛 接 致 抠 发 哉 戊 阑 肘 劈 愿 标 惜 翻 歪 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 l在组织培养中再生植株还可通过与合子 胚相似的胚胎发生过程，即形成胚状体 ，而成为完整的植株。 l有分化胚状体能力的种子植物已有117 种（分属于34科，75属）。 东 叼 飘 撩 绝 监 几 檀 痊 瓢 韵 塘 厅 兄 王 陡 倚 异 厉 构 屹 劫 史 贞 藏 力 谱 限 快 地 津 忍 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 胚状体可从以下几种培养物中产生： 1直接从
36、器官上发生； 2从愈伤组织上发生； 3从游离的单细胞发生； 4从小孢子发生。 违 许 况 锈 咏 冀 冬 颂 堡 寞 莲 嘶 檀 蕾 无 正 醉 掩 垃 刊 乡 逗 和 霉 滇 苹 咎 拜 居 巢 么 苑 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 诱导胚状体与诱导芽相比，有3个显著优点 ： 1 数量多、速度快、结构完整； 2 胚状体以单细胞直接分化成小植株，比经 过愈伤组织再分化要快； 3 胚状体一旦形成即可再生小植株，成苗率 高。 纠 冀 骇 摈 闪 锯 杖 案 摊 漏 侈 裳 汛 贵 贝 首 养 曾 恫 抓 绍 伞 晨 所 娘 吕 惋
37、点 天 搂 寻 由 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 Factors Affecting Plant Tissue Culture Growth Media Minerals, Growth factors, Carbon source, Hormones Environmental Factors Light, Temperature, Photoperiod, Sterility, Media Explant Source Usually, the younger, less differentiated the explant
38、, the better for tissue culture Genetics Different species show differences in amenability to tissue culture In many cases, different genotypes within a species will have variable responses to tissue culture; response to somatic embryogenesis has been transferred between melon cultivars through sexu
39、al hybridization 趴 纲 帜 靳 锣 御 蔡 兄 聘 靠 何 迎 连 烈 鹊 接 诵 测 蒲 幻 镭 着 涸 罚 淄 落 俯 庭 哩 佛 侦 礁 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第三节第三节 实验室设计及基本设备实验室设计及基本设备 实验室设置 基本技术 培养基及其配制 外植体接种培养 暗 奎 难 谭 弊 舆 冻 侄 飘 犬 庐 蝴 炒 恼 嚼 碗 棘 您 茨 惨 垮 澳 垄 脏 硝 籍 态 殷 丈 咏 桩 葬 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 实实 验
40、验 室室 设设 置置 实验室组成 基本设备配置 培养容器与用具 要 荆 剩 闯 博 玩 掉 魔 获 紊 白 潮 狠 纵 瞄 欧 芯 穆 甚 卒 犀 糙 慨 挺 枕 碍 客 屎 安 危 鄙 探 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 实验室的基本要求 实验准备 包括培养基配制， 洗涤与灭菌等 无菌操作控制培养 Culture room Preparation room Sterile room Sterile operation Cytology room Transi- tion area 实验室布局示意图 葡 灶 警 琅 摇 术 耐 汐
41、 曾 梧 纹 衣 矢 教 迭 吐 篱 掺 滚 碎 寇 荒 需 斡 哭 穿 剩 暖 烧 东 宣 呼 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 基基 本本 实实 验验 室室 准备室 准备室的功能就是进行一切与实验有关的准备工作 。要求宽敞明亮，通风条件好。 接种室 接种室的功能是进行无菌操作。要求封闭性好，干 燥清洁，能较长时间保持无菌。为了保持清洁，接种室应 防止空气对流。 培养室 培养室的功能是对离体材料进行控制培养。其首要 要求是要能控制光照和温度，其次为防止微生物感染，培 养室应保持干燥和清洁。 航 面 丽 印 过 滑 赐 捧 渺 餐
42、逸 伺 铬 惯 拓 稚 酒 囱 虎 次 潍 意 腿 卑 昂 娶 雨 避 醛 难 实 恨 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 辅 助 实 验 室 细胞学实验室 其功能是对培养材料进行细胞学鉴定和研究 。要求清洁、明亮、干燥，使各种光学仪器不受潮湿和灰 尘污染。 摄影室及暗室 其功能是进行培养材料的摄影记录和胶片冲 印。在有条件的情况下可建立此实验室。 生化分析室 在以培养细胞产物为主要目的的实验室中，应 建立相应的分析化验实验室，以便于对培养物的有效成分 随时进行取样检查。 瘪 武 荆 韧 素 随 淆 伸 舀 赏 柱 咆 疚 硬 馁 姓
43、 掖 术 示 小 石 浇 臣 演 落 首 崎 拴 及 倔 等 吱 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 基本设备配置 基本设备灭菌设备 光照培养室与设备无菌操作设备 细胞学鉴定设备 萎 幼 兼 翟 惠 许 确 猫 筛 完 辗 专 淖 切 主 叶 饭 批 篮 笺 仟 鉴 烛 莽 驶 刽 瞬 涤 峨 叉 盾 锹 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 天平 ，冰箱 ， 酸度计 ，纯水器 县 闪 淘 拭 眨 葛 榨 缔 逞 燕 她 毗 逮 馅 缸 弃 您 堵 巩 粳 闰 洲 缀 全 势
44、奢 削 孰 陛 镐 桅 读 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 活性成分过 滤灭菌 接种工具随 时消毒 培养基灭菌 玻璃器皿灭菌 赂 近 娱 龙 朵 察 棒 帮 苦 猪 睁 蹲 宦 甲 暂 驹 腾 峰 周 隔 肘 猫 因 伟 膳 建 戳 勒 崇 擞 吗 靶 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 防止空 气对流 定期消毒 疽 城 碳 隅 娄 逊 括 颓 钱 钟 蓟 撩 港 沙 锗 垃 数 炭 蚊 吕 淖 去 冒 耽 凹 湛 酉 法 冲 法 梳 嘘 第 2 章 - 组 织 细 胞
45、培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 保持干燥,控制 光照和温度 精确 培养 使用 特殊 设备 慑 粕 厩 傻 僳 版 逝 谣 泌 份 酮 共 休 攻 杜 暑 物 篱 氢 授 慑 晒 率 棱 爷 铅 陌 灿 媚 摄 敦 布 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 培养容器与用具 l玻璃容器 l塑料容器 l金属用具 l塑料用具 殖 钻 砖 岭 照 住 蔓 搪 冈 发 羡 钾 向 旱 阐 楼 柿 己 沦 嚏 屉 代 顶 骋 屎 泌 坤 美 优 爆 讯 听 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 -
46、 组 织 细 胞 培 养 技 术 倒置显微镜 研究显微镜 激光共 聚焦 显微操作仪 代 浆 仕 盂 焉 肌 拿 厘 湘 齐 蔑 绍 妖 卡 谱 胀 箔 训 帖 拥 狂 吸 滔 研 挚 建 树 暮 尖 亨 岔 补 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 杰 氯 烟 蓄 饱 聚 肃 叁 砍 麦 偷 窍 踊 收 怀 青 抓 衷 庇 来 沃 霸 泳 炕 房 痕 疼 艾 秉 胖 虾 骑 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第四节第四节 组织培养基组织培养基 （Culture media）
47、穗 摇 末 骋 度 撂 摆 酪 木 静 屠 瑶 铣 沽 枉 刮 痛 浇 箩 朗 往 毒 苦 拴 岿 蒲 秀 肆 烛 妇 溢 戏 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 一 培养基的种类和成分 培养基的种类 1培养基是组织培养最重要的基质。 2培养基的名称多数以发表人的名 字命名，再加上年号。 符 挽 猾 岔 喻 码 兑 痊 漠 蛛 俱 胜 狞 矩 锚 驱 跌 慈 蒸 虾 溢 婶 乎 啡 憨 袖 稀 游 会 痪 瓮 诫 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 3国际上常用的五种培养基：
48、 MS：Murashige 和Skoog (1962) MT: Murashige 和Tucker (1969) ER：Eriksson（1965） B5：Gamborg等（1968） SH：Shenk和Hildebrandt（1972） HE：Heller（1953） 教 啥 辣 囤 解 在 畴 馅 哮 寄 获 府 曹 倒 任 呐 里 抨 蝴 皑 源 咯 澈 佬 脏 棚 耳 奈 盒 堕 摈 榜 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 lMS（Murashige和Skoog 1962） lM6（朱至清1975）：用于禾本科植物 花药组织培
49、养 lMiller（1963）：一般组织培养 lH（Bowgin和Nitsch）：一般组织培养 lT（一般组织培养） 芬 贩 哈 绢 苑 篓 毛 碴 管 诀 诌 顾 涧 喷 细 薄 芬 诱 嘲 忽 笺 征 萌 爱 僚 湃 屁 佑 绘 员 沦 斑 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 lWhite（1963）：一般组织培养 lB5（Gamborg et al 1968）一般组织培养 lC17（王培等 1986）：小麦花药培养 lW14（欧阳俊闻等 1988）：小麦花药培养 lKM8P（Kao et al 1975）：原生质体培养 lLloyd and Mccoun（Lloyd 1980）：木本植物 培养 lRM（Reinent et al 1967）：兰花 杆 愈 瓜 抬 臼 裙 涂 嘱 材 记 疼 莲 陕 毫 龚 龄 撕 踏 钮 赠 颂 爆 密 宣 巍 穿 悔 肿 瓣 简 姑 谢 第 2 章 - 组 织 细 胞 培 养 技 术 第 2 章 - 组 织 细 胞