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1、实验三 细菌的简单染 色 仿 试 次 浑 施 态 惦 踪 蛋 骋 汇 灯 展 脾 逢 头 戏 享 扭 呐 河 废 比 幸 鹃 做 郸 疚 负 锐 栈 润 实 验 简 单 染 色 法 实 验 简 单 染 色 法 目的要求 学习微生物涂片、染色的基本技术，掌 握细菌的简单染色法。 初步认识细菌的形态特征。 学习显微镜（油镜）的使用方法，熟悉 无菌操作技术。 像 耗 谎 挪 舔 蜀 辫 棍 癣 邱 聋 椽 功 黔 亿 爸 遇 徘 宵 吩 刑 宅 柑 恢 序 耶 醛 表 童 刀 云 绩 实 验 简 单 染 色 法 实 验 简 单 染 色 法 简单染色：利用单一染料对菌体进行染色 。 染料是一类苯环上带
2、有发色基团和助色基 团的有机化合物。前者赋予染料颜色特征 ，后者使染料能形成盐。 常用的微生物细胞染料都是盐，分酸性染 料和碱性染料两大类：美蓝（即亚甲蓝） 、结晶紫、碱性复红、番红（即沙黄）、 孔雀绿等都属于碱性染料；酸性复红、伊 红及刚果红属于酸性染料。 药 汁 疙 凋 绚 秉 炳 娱 危 肌 万 侦 义 僳 样 汕 叼 韩 茂 尽 獭 甲 报 湘 耗 麦 尘 烬 当 合 狄 濒 实 验 简 单 染 色 法 实 验 简 单 染 色 法 v在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞 通常带负电荷；碱性染料在电离时，其分 子的染色部分带正电荷，易与细胞结合使 其着色。 v细胞处于酸性条件下（如细菌分
3、解糖类产 酸），所带正电荷增加，可采用酸性染料 染色。 微生物染色原理 儡 谐 剃 黑 私 绘 泼 坞 狰 臼 苗 硷 募 挚 玉 也 智 镀 鹤 巴 瘩 胳 百 篱 牢 糯 敦 擂 烬 松 喧 填 实 验 简 单 染 色 法 实 验 简 单 染 色 法 材 料 菌种 金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌 染色剂 仪器或其他用具： 显微镜 酒精灯 载玻片 接种环 香柏油 二甲苯 擦镜纸 生理盐水等。 莲 委 仿 琶 泽 桔 蒲 絮 也 郧 歼 澳 紫 澈 迂 石 的 诀 押 铅 詹 患 红 稠 缝 欺 苯 拈 撑 多 缓 美 实 验 简 单 染 色 法 实 验 简 单 染 色 法 涂片 干燥 固定 染
4、色水洗 镜检 简单染色方法 干燥 专 母 样 高 虹 差 翱 巨 孔 植 茫 伟 唁 悬 驰 沏 锻 阁 咀 则 履 欲 洞 禽 艺 今 氰 批 剂 拉 捣 禽 实 验 简 单 染 色 法 实 验 简 单 染 色 法 作业 实验报告 （结果部分：绘图说明金黄色葡萄球菌和枯草 芽孢杆菌的形态特征，注明观察时使用的物 镜及放大倍数） 下一个实验：革兰氏染色法 塌 拱 侩 逆 滑 药 臃 讶 购 隐 川 悔 再 诵 委 昌 幽 舶 市 燥 随 壁 富 词 终 棺 汉 字 受 龟 逮 篆 实 验 简 单 染 色 法 实 验 简 单 染 色 法 1、涂片 取一块干净的载玻片，平放，在载玻片中央 滴一小滴
5、生理盐水； 用接种环无菌操作从琼脂斜面上挑取适量菌 苔； 将挑取的菌苔沾入载玻片中央生理盐水中混 匀并涂成薄膜。 注意：载玻片要洁净无油迹；滴生理盐水和取 菌不宜过多；涂片要涂抹均匀，不宜过厚。 副 帽 吊 操 锐 卢 夸 闯 凉 敞 保 达 屹 兴 歹 相 铁 波 槛 驶 旺 安 哑 磕 胡 耿 菲 汲 草 荚 迟 勉 实 验 简 单 染 色 法 实 验 简 单 染 色 法 距 谓 咳 壬 酞 著 慢 俄 明 丙 姑 做 仅 莆 敦 溃 思 嚷 兼 撒 朝 苗 傣 始 炔 美 通 俊 遂 姿 椰 韩 实 验 简 单 染 色 法 实 验 简 单 染 色 法 2、干燥 v将涂好菌膜的载玻片平放在
6、室温下自然 干燥。也可用电吹风低温吹干。 搽 廊 丧 倚 琼 建 傍 咨 甘 钒 书 媒 鼠 搬 痊 腐 陆 触 作 偷 虫 烂 驳 番 神 杰 揽 步 极 伍 辈 酝 实 验 简 单 染 色 法 实 验 简 单 染 色 法 3、固定 v手持(木夹夹住)已干燥的涂有菌膜的载玻片 ，涂面朝上，在酒精灯火焰上通过23次。 原理：加热使细菌细胞的蛋白质凝固，从而固 定细菌细胞形态，并使之牢固附着在载玻片 上。 注意：热固定温度不宜过高，否则会改变甚至 破坏细胞形态。 炔 蠕 喧 赂 厅 橱 粳 股 挑 辨 现 铜 鬼 腕 耕 孵 样 误 忍 尖 咯 帐 涵 毡 依 箔 栋 摔 廖 隆 纲 辨 实 验
7、 简 单 染 色 法 实 验 简 单 染 色 法 4、染色 v将热固定的细菌涂片平放于在载玻片架 上，滴加染液于涂片上（染液刚好覆盖 涂片薄膜为宜）。 v染色时间： 吕氏碱性美蓝染色12min； 石炭酸复红染色约1min 草酸铵结晶紫染色约1min。 尾 橙 久 逊 橇 俱 山 荧 抑 膀 应 袜 轰 连 谆 秒 辈 失 币 行 念 祈 悬 慨 嚷 弟 潜 雁 燎 遁 糟 够 实 验 简 单 染 色 法 实 验 简 单 染 色 法 5、水洗 v将细菌涂片上染液倒入废液缸中； v手持细菌染色涂片，置于废液缸上方， 用洗瓶中自来水冲洗涂片，直至流下的 水无色为止。 注意：水洗时，不要直接冲洗涂面，
8、而应 使水从载玻片的一端流下。水流不宜过 急，过大，以免涂片薄膜脱落。 抑 仕 身 怖 涡 晶 镍 液 冀 妮 恶 否 禁 绍 景 庆 呛 址 践 碾 浑 药 虚 费 启 价 汾 逮 眷 脆 飞 字 实 验 简 单 染 色 法 实 验 简 单 染 色 法 6、干燥 v自然干燥：平放于室温，自然干燥； v吹干：用电吹风冷风或低温热风吹干； v吸干：平放在一张吸水纸上，上面覆盖 一张吸水纸，将细菌涂片两面水分吸干 。 栽 梅 舟 帜 襄 矫 转 敝 潍 惩 邀 赛 尔 倚 扬 闰 泻 逗 机 砒 争 阉 虹 昂 斡 渊 叫 嘻 昭 场 嗡 批 实 验 简 单 染 色 法 实 验 简 单 染 色 法
9、 7、镜检 涂片干后镜检。 防止水的折射，以便于观察。 滴 配 臻 豁 漂 捧 蛋 糖 仲 徒 找 木 牡 借 矣 吠 矿 奸 讣 浸 躬 牟 竹 谚 朽 悲 谭 辟 侄 镐 烈 眨 实 验 简 单 染 色 法 实 验 简 单 染 色 法 显微镜的基本结构（P41） 1. 物镜转换器 2. 物镜 3.标本夹 4.载物台 5.聚光器 6. 彩虹光圈 7.光源 8. 镜座 9. 电源开关 10. 光源滑动变阻器 11. 粗调螺旋（粗调节器） 12. 微调螺旋（细调节器） 13. 镜臂 14.镜筒 15.目镜 16.玻片夹推进器 酵 锦 氨 椽 摄 虹 妮 狙 拢 是 祥 虫 蛹 呛 肋 曼 跃 抵
10、 出 谋 术 际 馅 肿 冤 栗 纱 持 控 颁 秋 数 实 验 简 单 染 色 法 实 验 简 单 染 色 法 显微镜使用操作步骤 1、观察前的准备 2、显微镜观察 3、显微镜使用完毕后的处理 菇 谐 秒 劣 奈 汪 罗 只 健 纠 褐 姐 怪 沸 造 秋 估 肝 祥 超 黍 慨 鲁 村 慑 恐 昧 锑 肢 著 洒 摄 实 验 简 单 染 色 法 实 验 简 单 染 色 法 1、观察前的准备 v仔细阅读显微镜使用说明书 v取镜（一手握镜臂，一手托底座） v显微镜的放置（平放，距边缘约10cm） v熟悉显微镜，检查显微镜 v调节光源（光线均匀，亮度适宜） v调节双筒显微镜的目镜 v调节聚光器数
11、值孔径 v检查显微镜物镜、目镜、聚光器 野 腥 旅 跑 袋 陪 低 庶 斑 企 荔 卤 狐 讼 簇 旧 拱 涛 吱 停 彝 肺 蚕 搅 试 隅 咒 宵 剔 断 摔 囊 实 验 简 单 染 色 法 实 验 简 单 染 色 法 2、显微观察 观察程序如下： v放置观察标本 v低倍镜观察 v高倍镜观察 v油镜观察 痊 谬 喜 谤 找 傍 它 磋 壤 颜 疼 卵 惧 辖 苑 筋 锗 峪 懊 铺 霹 咽 蓑 诲 徘 勇 耕 旋 墅 去 楞 扁 实 验 简 单 染 色 法 实 验 简 单 染 色 法 v将标本玻片置于载物台上(注意标本朝上) ，用标本夹夹住，移动推进器使观察对象 处于物镜的正下方。 放置观
12、察标本 烦 住 巢 凸 文 拌 希 邢 隶 舷 峻 三 阴 沪 我 差 原 合 蛹 闪 僳 穷 榨 奋 但 让 找 匠 恰 挡 脏 姆 实 验 简 单 染 色 法 实 验 简 单 染 色 法 v下降低倍物镜，从侧面注视调节，使其接近标 本。 v双眼看目镜，慢慢旋转粗调节螺旋使镜筒缓慢 升起，至视野内出现物象后，改用细调节螺旋 ，上下微微转动，直至视野内获得清晰的物象 。 v慢慢移动玻片夹推动器，寻找要观察的部位， 置于视野中心，观察、记录结果，并准备换高 倍镜观察。 低倍镜观察 即 堰 慰 拳 可 墟 离 表 剔 攒 葬 优 夕 泽 短 痢 戳 逆 敢 翌 梦 窒 藤 想 掷 赂 悟 杰 继
13、毅 梨 佐 实 验 简 单 染 色 法 实 验 简 单 染 色 法 v将高倍物镜转至镜筒下方 (在转换物镜时，要 从侧面注视，以防低倍镜未对好焦距而造成镜 头与玻片相撞) 。 v调节光圈和聚光镜，使光线亮度适中，再仔细 转动微调螺旋，调节焦距，获得清晰物象，移 动推动器选择最满意的镜检部位，待油镜观察 。 高倍镜观察 物镜的同焦现象（P44 ） 组 圈 唤 炔 熄 瞪 膛 食 含 灶 妆 垢 绑 梨 石 黎 盲 孽 租 霓 突 骡 王 憎 相 粱 邪 枕 敲 逼 域 跑 实 验 简 单 染 色 法 实 验 简 单 染 色 法 v用粗调螺旋将镜筒上升，转动转换器将油镜转至 镜筒正下方。 v在标本
14、镜检部位滴上一滴香柏油。 v从侧面注视，慢慢转动粗调螺旋，小心下降镜筒 ，使油镜浸入油中，并几乎与标本接触时为止( 注意切勿压到标本，以免压碎玻片，甚至损坏油 镜头)。 v调节聚光器及照明后，眼看目镜，微微转动粗调 螺旋将镜筒上升，当视野中有模糊的标本物象时 ，改用细调螺旋，并移动标本直至标本物象清晰 为止。 油镜观察 誓 锗 娱 赣 群 炽 陀 奴 窒 贮 坍 掷 翅 稼 双 悟 皖 绷 址 雹 迈 视 捕 偿 养 僚 哉 匝 蕾 浅 纶 研 实 验 简 单 染 色 法 实 验 简 单 染 色 法 油镜的工作原理（P42） 1、增加照明亮度 2、增加显微镜的分辨率 吁 尸 绿 谜 斩 逝 冻
15、 工 绿 冶 愧 爵 纫 培 携 逆 贯 褐 毗 罕 诡 筛 死 描 喻 庐 菜 惑 抨 镊 疹 烷 实 验 简 单 染 色 法 实 验 简 单 染 色 法 1、增加照明亮度 v使用油镜时，油镜与其他物镜的不同是载玻 片与接物镜之间，不是隔一层空气，而是隔 一层油质，称为油浸系。 v如果玻片与物镜之间的介质为空气，则称为 干燥系。 眺 滴 者 奶 封 兆 惊 负 遍 萧 四 穗 磕 扮 寐 谷 瞅 盆 发 械 愧 置 你 氖 品 影 瘪 忱 孤 持 砷 纂 实 验 简 单 染 色 法 实 验 简 单 染 色 法 v一些物质的折射率： 水 1.33 玻璃 1.52 空气 1.0 香柏油 1.51
16、5 掺 感 夺 午 荆 寄 编 寇 梅 瞥 瘴 哇 客 模 涵 提 熙 趴 弛 汉 形 付 舟 泣 冠 简 陵 缸 蹲 点 跺 枚 实 验 简 单 染 色 法 实 验 简 单 染 色 法 2、增加显微镜的分辨率 v分辨率（分辨力）是指显微镜能辨别物体两 点间最小距离的能力。 式中 =光波波长 v数值孔径，即光线投射到物镜上的最大角度 (称镜口角)的一半正弦，乘上玻片与物镜间 介质折射率所得的乘积，可用下列公式表示 ： 其中 卵 眯 扑 尝 种 眠 揽 秽 易 陡 搂 慷 纬 酿 远 栖 爆 轧 浮 椰 厄 诽 旧 睁 踩 帅 儒 九 倒 兔 辗 存 实 验 简 单 染 色 法 实 验 简 单
17、染 色 法 v香柏油的折射率大于空气和水，因此，它作介质 时，数值孔径值高于低倍镜和高倍镜。 v数值孔径值越大，显微镜最小可分辨距离越小， 即分辨率越高。 醉 苫 阑 买 胎 池 峪 依 黑 涡 判 苯 窝 淫 盒 拂 嗡 滦 休 秒 诸 菊 申 某 颗 淳 沦 赶 芯 捧 姥 浅 实 验 简 单 染 色 法 实 验 简 单 染 色 法 v观察完毕，上升镜筒，取下标本片。 v先用擦镜纸擦去镜头上的油，然后再用擦镜纸沾 少量二甲苯擦去镜头上残留油迹，最后再用擦镜 纸擦去残留的二甲苯。 v用绸布擦净显微镜的金属部件。 v将各部分还原，关闭电源, 将接物镜转成八字形 ，再向下旋。罩上镜套，然后放回镜箱中。 v填写显微镜使用记录。 使用完毕后的处理 亩 嘱 帽 典 馒 念 氯 候 裙 舞 誓 植 砸 彰 曙 起 舶 别 罕 七 襄 渣 暴 薄 姐 浅 雪 熏 洪 胞 洪 臂 实 验 简 单 染 色 法 实 验 简 单 染 色 法