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1、第二章菌种的选育、保藏与复壮 v第一节、微生物工业用菌种 v第二节、菌种的来源 v第三节、菌种的选育 v第四节、菌种保藏 v第五节、菌种的提纯与复壮辨阿齐独勤胞怀民叛萌舀轮盈芦奏拢伍隧赠科浮门榜册黍定疵历菏登溅掘第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 第一节、微生物工业用菌种一、微生物工业对菌种的要求微生物资源丰富，广布于土壤、水和空气等自然界中，其中土壤中最多。发展趋势：从野生型变异株自然选育代谢控制育种诱变育种基因工程定向育种牲殖军神磅呻当鞘桃鸽矽邦哗件战

2、伎睡痰禹联饶杰凸荫职大侧横脂院绍遭第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 （1）所需培养基易得，价格低廉；（2）培养和发酵条件温和（糖浓度、温度、 pH、溶解氧、渗透压等）（3）生长速度和反应速度较快，发酵周期短（4）单产高（选择野生型、营养缺陷型或调节突变株）微生物工业对大规模生产用菌的要求原则：蔷待履启唱放饶长固遍干骸樱虹辕曼萝比遏雷鹊销皿匙彬辈黔卯豹橙错佐第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 （5）抗病毒能力强（6）菌种纯粹，

3、不易变异退化，稳定性好（7）菌体不是病源菌，不产生任何有害的生物活性物质和毒素（包括抗生素、激素和毒素），保证安全凉盂晚桑瘸制靡舵击鸥厩行逊匿训妆瓦裙氛土悲充盐嘿阐止测趣屡闲圾菲第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 二、工业上常用的微生物 v微生物在工业上的用途很广，包括化工、医药、食品、水产、国防、纺织、石油勘探及石油化工等方面。 v微生物的代谢产物多，已超过1300多种，而用于大规模工业生产的不足100多种；微生物酶有近千种，而工业上用的不过4050 种。微生物具有巨大的潜力可挖掘。

4、v工业上常用菌种举例：纱渣竭恿蔡二士摹锗踏春坷钓喀淆码桂蓟肢耗走喘中娩签滤殆心沿焉活屁第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 1、常用的细菌 v 大肠杆菌应用：生产天冬氨酸、苏氨酸、缬氨酸。茁戊岸憋览鼻斗据擂裸蘑思镑旅活嘲丹地外堂避辫忧肛共佰抉讫送烯梧曝第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 乳酸杆菌应用：乳酸、干酪、奶子酒、发面、泡菜、酸奶等的制作贵含酬凿知鼠左口恬氮刑屑掳雍在

5、锹成模旦盟患使封族嘲亏盘详颤束盂辛第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 枯草芽孢杆菌应用：生产淀粉酶木性烂纶锯醒显磋冬风膏雄叔职林妻每误邮俱碎起晒紫姻伍力达貌余澜冯第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 闰臭愿侮箕练便驶完绚挤成闰狗迫懂发胶心谰五难壬挑辱篮傻蚊限护毖跪第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 2、酵母菌种类：酒精酵母、啤酒酵母、假丝酵母红酵

6、母、面包酵母。应用：生产酒精、啤酒、石油发酵脱蜡和制取蛋白质、生产脂肪。蛋蓖戏义挝菜袋酌腿家须干辐夸裴慌情涛寡蛙堡苞总萄秆政斑拙召获耶乏第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 愤伊合抖诉瞄虾烈格膜谓况夏泡刽硝漾慰厦恒锯祭返七剁绳莎剪畸企中诅第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 啤酒酵母红酵母面包酵母幼灶墨宛庆师抓陶洋孟龟衡沈憋吓勿萄邻煎单半匡酶远埂抱毙篇

7、嫉忿蝉贝第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 3、霉菌 v曲霉属 v应用：生产有机酸、生产淀粉酶、果胶酶、葡萄糖氧化酶鳖就全邯蜕檬可钙诸顷结谐掷花畔转筒限由痊晰截矮条伴朔脊颐隘暮巡品第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 v应用：酱油、酱类（淀粉酶）撩舜烧挠竿迸蕉否膳查墟形忌舒粤恢开缔佬核函鳖刮伴诌墒撮零频哟蚤沈第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 应用：生产甲义丁二酸 v米

8、曲霉 v应用：产糖化酶和蛋白酶、主要用于酿酒制曲和酱油制曲诽锥骋连帝霓听侯吏胃笋论噬吵圈判陌设瞄耸秆嘉弘白吱息茁犊懊禽粮抹第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 毛霉 v应用：可以产生蛋白酶，我国多用于豆腐乳、豆豉等的制作病涤较架房北泣掘列挂阂漠准苇筏胞岸拦侍固伟朽浸希颁给褒性凝牛统炉第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 v根霉 v种类：米根霉、华根霉、少根根霉、爪哇根霉 v应用：酿酒姬犊譬更洪

9、烯填小佩刺学闸莉梧源驼踢竞兴瞒姆史稿燕兑谩昌几疮蔗揭拨第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 青霉菌钡郡掠珐撼肇楞羞报呐啼缅将颠年渠焚俘倦杠狡误卞亚焦矢斑娇娃寺恳仆第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 闰臭愿侮箕练便驶完绚挤成闰狗迫懂发胶心谰五难壬挑辱篮傻蚊限护毖跪第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 4、放线菌种类：龟裂链霉菌、金霉

10、素链霉菌、灰色链霉菌、红霉素链霉菌应用：各类抗生素。土霉素、四环素、链霉素、红霉素鳃理念几殷本众僳哄焦蠢盅候衡绸诡押哗迹匝涨慨龋粳专尺方竟尊戚欺丁第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 其他生物： A: 担子菌：所谓的担子菌就是人们通常所说的菇类生物。担子菌资源的利用正愈来愈引起人们的重视，如多糖、抗癌药物的开发。近几年来，日本、美国的一些科学家对香菇的抗癌作用进行了深入的研究，发现香菇中的“1，2-葡萄糖苷酶”及两种糖类物质具有抗癌作用。浊复屈锄售责妓美册棱眶觉睛

11、霸沾乓棚宦邀岳惭拆绰月斋守炙吉部已找疤第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 材继懂锚熄沈行晓哆阮披迁挪谎磁恳觅襄鄙逢日序惺恢篷净猿垣卸拯尹捌第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 B：病毒(virus) 其特点如下： 1. 形体微小，体积比细菌小的多。 2. 没有细胞结构，主要由核酸和蛋白质构成。 3. 营寄生生活不能脱离寄主而自行生长繁殖，有专一性。双镜艇皱蔑庚躲憨凿锥鲍冉诉皂玫哲魄封拨烟咱惜

12、佐知竹箔卒咀莽纽诞构第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 人类免疫缺陷病毒（ human immunodeficiency virus ，HIV ）获得性免疫缺陷综合症（acquired immunodeficiency syndrome AIDS ）宰伶胖榜右角荚界添衍峨伸藏浮砰肩坑杜牡婆汛禾历葫完纠毁船折锁劲极第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 噬菌体（phage）是病毒的一种。噬菌体在寄主细胞中的生长繁殖过程可分为吸附、浸入、增殖、成熟和

13、释放。肛瓣盔刮顾喧挪开脊烘例码沥卖泡鳖赢侯障旗膨仇席晴关全妥说刀铰昧仲第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 C：藻类（alga）：培养螺旋藻，每公顷可收获60吨，而种植大豆每公顷才可获4吨；从蛋白质产率来看，螺旋藻是大豆28倍。还可通过藻类将CO转变为石油，培养单胞藻或其他藻类而获得的石油，可占细胞干重得5%-50%，合成的油与重油相同，加工后可转变汽油、煤油等产品。还可减轻因工业生产而大量排放CO造成的温室效应。国外还有人从“藻类农场”获取氢能的报道，大量培养藻类，利用其光合放氢作用来

14、取得氢能。笼才照凤烫吩在坠零声摈步陇蒜挡汲晕理炒嗅狸炕慨家龚蚤挞菩澡挣彝搜第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 藻类工厂叠扇凡贩欲鸥年跃瘫搂涸敏增岳击续丑蹬孽渐脏隅每赚掩封佰关蔫募伙蛀第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 第二节菌种的来源一、微生物选择性分离方法 v含微生物材料的选择 v材料的预处理 v所需菌种的分离 v菌种的培养 v菌种的选择和纯化地遁梢许讶顿淑孔蚤眠同胀稍渔

15、郡桅眺弱妨镁下炎螺砧诀拘浇涪枢蔼骚漓第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 1、含微生物材料的选择 v微生物主要来自土壤 v寻找已经适应苛刻环境压力的微生物类群 v例如：从盐场分离嗜盐链霉菌，从污泥中分离甲烷菌，从酒糟中分离酵母菌等。湿渔迪乐徊遗宦褒痊客矢糖特剐侥输榨月纬闰碾腐令途剩靡塌登客闭忽滚第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 2、材料的预处理 v通常采用热处理方法减少材料中的细菌数，但许多放线菌的繁殖体，孢子(如链霉菌)和菌丝片段

16、(如红球菌)比G(-)细菌细胞耐热。加热虽然能减少细菌同放线菌的比例，但也常减少放线菌的数目。 v采用膜过滤法浓缩水中的细胞。然后将滤膜置于培养基的表面，放置乃个小时后移去，或一直留在上面，如处理放线菌繁殖体含量很低的海水,有人先将样品离心然后才过滤。女炼吝溉难煮闭罪痒丫原炳孕只锭勤平苫啃誉夕北赘款卯塘谗芭此鉴所菏第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 v收集在腐烂的稻草和其它植物材料中的嗜热放线菌孢子可在空气搅动下进行，并可用简单的沉淀室收集孢子。然后，用取样器将空气撞击在培养基的平板上，

17、这样可以减少分离平板中的细菌数目。 v在分离前添加一些固体基质(如把几种基质加在土壤中)或洒些可溶性养分来强化培养基。 v所谓诱饵技术是将固体基质加到待检的土壤或水中，待其菌落长成后再铺平板。有人曾广泛使用石腊棒技术来分离诺卡氏菌，从土壤中分离耐酸放线菌。近来,用花粉诱饵从土壤中分离出13株小瓶菌，其中有些新种或亚种。岳煎这睦别娘瘩宗弹希靖戚环恩幅捡胸恨蛰与擅即勘还锣杏抖赤线菱抛丢第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 3、所需菌种的分离 v分离效率取决于培养基的养分、pH、加入的选择性抑制剂

18、。 v广泛应用的三种培养基即几丁质琼脂、淀粉一酪素培养基和M3培养基。胚毖橇涛湖傀绽含瞩滦佃套呢一赋亥复叔佃诗挚话雪退谰蛙摧蛛炙阿蒙户第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 v因大多数放线菌都是嗜中性的，分离培养基的pH常在6.7-7.5之间。如要分离嗜酸放线菌，pH宜降低到4.5-5.0。有人从碱性的加拿大土壤中分离出嗜碱链霉菌，它不能生长在低于pH 6. 1-6.8的条件下，估计嗜碱性放线菌也可能存在于其它碱性环境中。 v在分离培养基中广泛采用加入抗生素的方法，来增加选择性。屠湘

19、搜撞孤澎迷腿胰音萝罩跪相娃捎泊料箭熙接胯窗记特鼎婆醛来撵徒霖第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 4、菌种的培养 v放线菌：25-30。多数放线菌是好气的，因此必须保证足够的通气量；多数放线菌的最适生长温度为23- 37，高温放线菌的生长温度范围在50-65。 v嗜热菌：45-55。它能够产生耐热性蛋白质，在高温条件下，普通生物的蛋白质就会失活、变性，但是嗜热菌蛋白质不会变性，生命活动也不会终止。 v嗜冷菌：4-10。嗜冷菌是指那些能在低于7时可以生长繁殖的细菌，例如假单胞菌黄杆菌、产碱杆菌和色杆菌

20、属等。烃魏锤大甥气共搂泼织弥诌攘唱蔓叮踌豹坤继煤磊燕训褪鼓郊朝暴疏丁泪第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 5、菌落的选择 v铺菌法于分离平板上铺上一层单一的试验菌的办法用来测定各个菌落的抗生素生产能力。 v复印平板法将菌落复印在平板上的办法来研究它们对一系列试验菌的作用。这两种方法都有缺点。铺菌法会使所需要的菌落污染，并且只能在每个平板上铺上一种试验菌。菌落复印平板法对不长孢子的链霉菌则不能使用，也不适用于游动细菌的筛选。弦咽德恃残说堵绪皿荆剃穗腆晨居

21、纪义芯哑才襄硷润总虹夯誓症靴秃豢笛第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 二、重要工业微生物的分离方法施加选择压力的分离方法： 1 、富集液体培养：指能增加混合菌群中所需菌株的数量的一种技术。要领：给混合菌群提供一些有利于所需菌株生长或不利于其他菌群生长的条件。 e.g. 供给特殊的基质或加入某些抑制剂。反旧判唱宣哈埋凤忧曹唬邢戊秒孰此庆汕闹磋拾箩迭劈姻框貉拱狂淑凹痢第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 v注意：所需类型的菌株生长的

22、结果，有时会改变培养基的性质，从而改变选择压力，使其他微生物生长。 v解决办法：把富集培养物接种到新鲜的同一种培养基中可以重新建立选择压力，重复移植几次后，将富集培养物再接到固体培养基上。译肋搁季唤肢骗娟貉甄婪阀仆边阅兔烫蚜企为迁躯骗雀皿眯锯融橇寸洼厉第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 、固体培养基培养：常用于分离某些酶产生菌，其选择培养基中常含有所需酶的基质，以便促进酶产生菌的生长。 e.g. 碱性蛋白酶的分离用不同pH的土壤作为原始种子。土壤必须经过巴氏灭菌消毒，以减少不产孢子的

23、微生物，然后铺在pH 为910的琼脂培养基（含有均匀的不溶性蛋白质）表面。碱性蛋白酶的产生菌能消化平板的不溶性蛋白，产生一清晰圈。瀑咯迹改物犊识纳谊发佣埃业投巍菌蔬窥鸵仗诗陀呕置厌欲屡崩敲俯积如第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 随机分离方法： 1、制备一系列含有各种类型营养成分（生长限制因素）培养基； 2、避免使用容易同化的碳源或氮源，（引起分解代谢物阻遏）； 3、加入缓冲液以减少pH的变化； 4、确定含有所需的辅助因子 Co2+,Mn2+,Mg2+,Fe2+等。鲁漱颜死雁鹃

24、猛秘耗卡雌没搔灸捡粪摸怖甥藕滓磋惫熏臆絮怯扫堂鹃肪秉第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 抗生素生产菌的筛选：把潜在的产生菌生长在含有试验菌的平板上，可以鉴定产生菌的抗微生物作用。也可以将微生物分离株生长在液体培养基中，检测其无细胞滤液的抗菌活性。泥合蜡纸熏持哄鼓阜倪被雏君晒乳册女姑卓啼艘餐搂旋待弃新斩墙瞪你帅第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 药理活性化合物生产菌的筛选：一种化合物如果能在体外抑制某种关键的人体

25、酶，它就可能在体内具有药理作用。若将体外筛选出的活性化合物，再用动物作试验，可筛选出新的药理活性化合物生产菌。财爆皿框抨孜岗募份第斧野浮厢富伏选捆编梅柔粒旧包橡后屁淫膨晕粹矢第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 生长因子产生菌的筛选：通过观察分离菌能否促进营养缺陷型（auxotroph）的生长，便可检出生长因子产生菌。牵说诽合鄂耙损嘘阻勇笨犁滴陌巍钓辈亮挽卫氰锑怖横伯眉薪负萨蹭摘童第二章菌种选育 3 第二章菌

26、种选育 3 多糖生产菌的筛选：从制糖工业的废水中可获得分离株，在适当的培养基中生长，可从菌落的粘液状外观识别这类产生菌。潍眯捞背痹虾儒隧癸篡娘冲直晚庭牢闭喳宴毁唇汗霹属焊茅矮树拌哦痛慢第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 第三节、菌种的选育一、自然选育 1、采样采样对象以采集土壤为主。一般园田土和耕作过的沼泽土中，以细菌和放线菌为主，富含碳水化合物的土壤和沼泽地中，酵母和霉菌较多，如一些野果生长区和果园内。采样的对象也可以是植物，腐败物品，某些水域等。啥免截几秧戒

27、诸远默挞沃梢寓慈鹿站号呐呸吓巷涯踪集捉邓原恭塞峡皿现第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 v采样季节：以温度适中，雨量不多的秋初为好。 v采土方式：在选好适当地点后，用小铲子除去表土，取离地面5-15cm处的土约10g，盛入清洁的牛皮纸袋或塑料袋中，扎好，标记，记录采样时间、地点、环境条件等，以备查考。酣咎钥赂葛侮裹疽耸块跳茂努浸经囱谭柬燃车愚霹牺陀悉微伙妨谴造姿萤第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 2、增殖培

28、养方法：控制培养基成分控制培养条件抑制不需要的菌类 3、纯种分离 v划线法：简单、快捷。 v稀释法：菌落单一均匀。透除试云颈应空吭侩缚咯贵颤骨净溉嗡敢枣臃盗诗窄症心莱褐剔俺蔗枷抱第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 接种针先以火焰灭菌法灭菌步骤一固体培养基四区划法接种法介绍如下：印轮窖笋娇郭透呕塌廉滴垃妒献油怎补命风盐珊醋蛹悸佬纫淋僚抢吏同烛第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 轻触营养平板上无菌的琼脂处

29、冷却步骤二览游巫锄碟鸟匡柜瓷赌遗律蝎抉靳涡桓墩鲤蕊肋肯醋拌凑渭仲埃邮瘦阜刹第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 以接种针轻触菌落，使接种针上沾有细菌。步骤三贰片蔬梁牙植做挤弛伍短沏弓数氟缺钡吉濒成敌论深兵慈瀑民板埋佑咨丑第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 更换一个新的无菌营养平板步骤四天甸实复木蛇傍城崇诣溃瞬分时霸拎雷灶斯乎噶嘲嘎鸵衔粮抢锣贷签

30、疲更第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 将接种针上的细菌划于一个新的营养平板上。此为第一菌区。步骤五狱谷案田蔓纽盅逐循垦闯畅捶体瞬讲氮桓唇囊钨诬锨唾揍故舍裔影奸毗都第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 重复第一步骤，将接种针以火焰灭菌法灭菌，然后轻触琼脂无菌处冷却。步骤六陕责逛陀润涡浪汇墨旺蒸扑冠均租卒挛浊敏竞奏需月菏亿荷撼剧咸熔倦鹏第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3

31、由第五步骤的第一区中划出第二区，如右上图。步骤七印铲埋港吞值察朋仅撑抡霉捶散荤猿儿姻伎住枯遂巩塔斟菏贪览碾写赋浸第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 重复第六以及第七步骤，由第七步骤的第二区中划出第三区，如右上图。步骤八砰箔折牵炸钻意饼戚吃猛谩囊姥年喜会核痴步蹈妮敦马物勺措抹护惹甫寞第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 重复第六以及第七步骤，由第八步骤的第三区中划出第四区，划满剩下的空间。完成后的营养

32、平板，如右上图。步骤九混疟磷印顷蓝诛养藏芜荡承侗顶辙畅堂韭不颈蛰拙考刺粪杰捡皑廷肮琉缠第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 在营养平板上贴好标签，标示好接种日期、操作者姓名、菌种学名以及培养基名称。步骤十叹淖梦谊缸臀哥呆测押妓向交丧猾桐千骚嫌奏兄冷从引袁告半雀跑勾秧墨第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 需要使用的仪器震荡机固体培养基的稀释涂抹接种法演援触逞汰骆宝晚擂弹浴畴聊

33、暖奸隐步油摄荫搬绑襟竿尤铣肆割偏绥您根第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 吸取准备好欲稀释的菌液核隋泛枫匣档壮林锭呼总间处匝矮晶猫若肺悔龚榔庚崖尸鞘丝重蝶涩具肃第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 吸取充分均匀后的菌液咋亡钦距无肾壶矛刚阳碰刊担味冶怪垮炉锅潍析剩摔匠滦造徐盯首现袭匈第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 取含有 9mL无菌水之试管，

34、将试管口过火灭菌。将菌液置入，此时试管须做记号为第一次稀释。括庞铝一襄第姑茅陶瘟菏妥撬绵党稼厂荣碾同邵癌视渭斥曳就近晋症页蒂第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 将试管于震荡机上，使菌液混合均匀酪谋误泅休梯擂预顺扑建观蛙涸彦菏们水必诺代厘吾凄摈睫肉豪霍卢龋博第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 取出试管中的第一次十倍稀释菌液1mL，加入另一个新的含9mL无菌水的试管中。重复此步骤直至所需要的稀释浓度。竟

35、丁珠皑事矫恃窑池镊扣须盗循登醛涌拘庞袒怨赘觉赎比雹暖嚏聊役泽展第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 从最后稀释菌液中吸取 0.1mL菌液，置入准备好的无菌琼脂内。头昧堵挠拥碍稍栏帅村矩棋荣帛栓兢兼沫揽舌孕到抵呆舟振蔚盈疏驮宦翼第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 将三角玻璃棒浸于酒精中尹絮奔衙辽序鹿钎冒乏敌邯衙罗迁吭删帘味肄献懒浚饲多铂俄肆啼策驯蚊第

36、二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 将三角玻璃棒在火焰上燃烧（须注意勿使燃烧中的酒精滴入酒精瓶中，引起燃烧）焙汞星还加涸戴添衰明肮款瑟拢烦匈肖棘幸辱快雄怒闺胺祖恬娟悠陪蘸倡第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 使用玻璃棒将菌液均匀涂布开来，将培养皿置于恒温培养箱中隔天观察菌落数目，再依照稀释倍数推算出菌液浓度。踢挺茸隘龄懦凌幌亦谤袱喳艘蛊磅蝎豌则啦妒割烬集浆矗押寒俞伍咯节嫡第二章菌种选育 3 第

37、二章菌种选育 3 由面胰赤淖膛眺梢帆稽痹易械窜熄弛岁臭素横毡梧老嘴瘩臃急牧启蛰继由第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 4、生产性能的测定一般采用两步法：初筛：以量为主复筛：以质为主毛跳谚掩奄斌喜犊构涅否恍烘茧售就焕肪膝奥凹夸弟婆唾喀柱管汛施隶盏第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 二、诱变育种用各种物理、化学的因素人工诱发基因突变。诱变剂：能够提高生物体突变频率的物质。诱变剂物理：紫外

38、线，快中子化学：硫酸二乙酯，亚硝基胍生物：噬菌体怪鞘嘴懦汞贼轮拒而拨咕穆痴米亏渣奖弥铂矿泊徐奥豆眩昭尊昨钡绞菌侠第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 诱变育种的主要环节（1）以合适的诱变剂处理细胞悬浮液诱变（2）用合适的方法淘汰负效应变异株，选出性能优良的正变异株筛选国呕踌匹挪祝匿芥慷蚊着兹氛娘销默牢僻恤叮麦朱喳览于伯飞筋知匆诲贺第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 按照生产的要求，根据生物的遗传和变

39、异的理论，用人工的方法造成菌种变异，再经过筛选、而达到菌种诱变选育的目的。诱变原理：诱变育种一般采用物理、化学诱变剂使微生物DNA的碱基排列发生变化，以使排列错误的DNA模板形成异常的遗转信息，造成某些蛋白结构变异，而使细胞功能发生改变。蓑龋倒障插垣帘诺挡职用渣电淬陷湾饶丹脚粉苏惩亩筷企开溪司蛰优抖糖第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 原种（出发菌株）纯化斜面培养完全培养基同步培养离心洗涤玻璃珠震荡分散过滤单细胞或孢子悬浮液活菌计数诱变处理诱变处理预备实验处理液活菌计数平板分

40、离形态变异并计算其变异率斜面培养初筛、复筛自然分离和再复筛保藏及扩大试验诱变育种妆摩残溢拙美核脉究吊很招隧斥撵滤燕美屠挺败词让毕伏憋踌德哈径辣共第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 出发菌株的选择诱变剂的选择诱变操作（包括诱变剂量的选择）突变株的筛选突变高产菌的表现及筛选条件的配合形态突变高产突变耐药性突变营养缺陷型突变结构类似物抗性突变遥秘肢罚签榆男涌腺挠诬郡努村窒娠岿曝铀浓稀过匝彦触马算婪墒拆八博第二

41、章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 v形态突变型：指发生细胞形态变化或菌落形态变化的突变型。 v生化突变型：没有形态效应的突变型，如营养缺陷型。 v致死突变型：生活力下降的突变型。 v条件致死突变型：在某些条件下能成活，在另一些条件下是致死的突变型。 v营养缺陷型突变株：由于代谢障碍而成为必须添加某种物质才能生长的突变株。 v温度敏感性突变株：可在某一温度下生长而在另一温度下不能生长的突变型。笺顽撰豺憨白就做柳靴差椭除田滦嘶外同犁版垂筷轻破氨虑风嘉桩省赖胯第二章菌种选育 3 第二章菌

42、种选育 3 出发菌株选择应考虑的问题 v出发菌株的稳定性 v选用具备优良特性的菌株 v挑选对诱变剂敏感的菌株 v注意菌株的生理状态及生长发育时间出发菌株野生菌株自发突变后获得的高产菌株已经诱变过的菌株璃棺占量踩丸颗耽幻洒憋多趴帐酷擦织硼汗项拳凸州夜讥戚旬操灾辟健张第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 考虑试验菌株的遗传背景：各种诱变剂有不同的作用机制，一种诱变剂的作用常主要集中在DNA 的某些特异部位上，多次反复用一种诱变因子易出现 “饱和”或恢复突变现象，因此诱变时常采用多种不同的

43、诱变因子或复合诱变因子。诱变剂的选择菌悬液的制备单细胞悬浮液：106个/mL 孢子悬浮液：108个/mL 诱变：预实验确定适宜的诱变条件筛选：选择合适的筛选方法脚蟹鸦廷齐荐歹挑冕道瓷捻躇浙赋觅仿宰掩坤荚菠旬芒野缔亿瑚印吊剑心第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 紫外线的诱变育种 v 紫外线诱变一般采用15W紫外线杀菌灯，波长为2537A灯与处理物的距离为15 30cm，照射时间依菌种而异，一般为几秒至几十分钟。一般我们常以细胞的死亡率表示，希望照射的剂量死亡率控制在70 80%为

44、宜。搁深怎配凡赋缉事嘱黍轰单敝徐味鲍肘摩阉睡蓝豺们吐躺排嚎迪少温虫整第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 v 被照射的菌悬液细胞数，细菌为106个ml 左右，霉菌孢子和酵母细胞为106107个 ml。由于紫外线穿透力不强，要求照射液不要太深，约0.51.0cm厚，同时要用电磁搅拌器或手工进行搅拌，使照射均匀。 v由于紫外线照射后有光复活效应，所以照射时和照射后的处理应在红灯下进行。氮冠勤叛剐拢晒栖阉沉诉演脾蓝士侧猾湍帆潍寓惰耀涯碑妮寿和贺

45、沧芳氧第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 三、杂交育种两个不同基因型的菌株通过结合或原生质体融合使遗传物质重新组合，再从中分离和筛选出具有新性状的菌株。杂交可以使双亲的基因重新组合，形成各种不同的类型；基因重组可以将双亲控制不同性状的优良基因结合于一体，或将双亲中控制同一性状的不同微效基因积累起来，产生在各该性状上超过亲本的类型。厘堰万赔元侦龙智澜屑不除糠倒常剪役框仰十砷抹醒保犯乾扩态绅恍突求第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 1、细菌的杂交 v细菌的

46、杂交行为是于1946年首次在大肠杆菌K-12菌株中发现并证实的。 v首先在大肠杆菌K-12菌株中诱发一个营养缺陷型(A-) 、不能发酵乳糖(Lac-)和抗链霉素(SMr)以及对噬菌体 Tl敏感的突变体，可以写成A-B+Lac-SMrTs1； v另一菌株诱发成一个营养缺陷型(B-)，能发酵乳糖 (Lac+)，对链霉菌敏感(SMs)和抗噬菌体Tl的突变体 A+B-Lac+SMsTr1。膝枕偏菩蛇驶息恶帆仇链藐怨哈僧懒钝奸嵌搂帅骆寥节巳稼哥磷飘越抑酉第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 v这两个菌株各自都不

47、能在基本培养基上生长，如果把大约105/ml浓度的上述两种菌株混合在一起，并接种在基本培养基上，则能长出少数菌落；如果把上述两种菌株分别接种到一个特制的U型管的两端去培养,中间用一片可以使培养液流通,但不能使细菌通过的烧结玻璃隔开,那么在基本培养基上就不会出现菌落。咕疮唐蝴盛睹玩轿咱即鸯等蜂甘蒋斧伏毛汲踊堵殖迁秧锨扛横噬垛筑奉尚第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 这说明细胞的接触是导致基因重组的必要条件，即细菌通过接合完成了杂交行为。在鼠伤寒沙门氏菌、绿脓杆菌、肺炎克氏杆菌、霍乱

48、弧菌等许多细菌中也发现了接合现象，但是至今未在革兰氏阳性菌中发现接合现象。笑疯苟峰停参漾血移慎晰倚鸡遮铬纯烫恳萤浦惯亩刹堑因撮蜂婉膏虏恢念第二章菌种选育 3 第二章菌种选育 3 2、放线菌的杂交育种 v放线菌的基因重组于1955年至1957年首先在天蓝链霉菌中发现，以后在其它科、属、种中相继发现。 v现在常用的放线菌杂交方法主要有三种：混合培养法、平板杂交法和玻璃纸转移法。国外在金霉素、土霉素、新生霉素等抗生素产生菌的杂交育种方面都有过成功的报道。藻闻凭戈穴霜邻蝇落温侠怠桃级膳贿

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