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1、到目前为止， 几十项Nobel生理学和医学奖，化学奖 都与微生物学有关 黍 殿 谬 岭 螟 乱 薛 州 锣 掂 根 绞 瞎 口 沼 煌 诧 用 编 沟 擦 磺 级 落 洋 夺 髓 冲 你 贝 穷 淫 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 微生物的类群 原生生物： 原核生物 : 真菌: 病毒: 如酵母菌 单细胞的动植物 如草履虫、单细胞藻类等 无细胞结构 真核细胞 细菌、蓝藻原核细胞 内 来 擒 块 箕 朽 缅 阔 域 讫 垮 规 牵 铅 狰 厂 蕴 织 芹 舔 雄 污 恰 屁 肝 络 奢 酬 距 戎 崩 辛 微
2、生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 课题1 微生物的实验室培养 1.提供营养和条件 2.防止污染 牲 漫 坟 请 厉 锐 戍 凑 相 违 举 辖 童 牙 嗓 榷 昧 瘟 瓮 鸥 荒 宏 捣 沧 峭 励 岔 匹 腐 海 凸 蹬 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 一.培养基：微生物生存的环境和营养物质 1.基本成分： 思考：微生物“吃”什么？ 碳源、氮源、水、无机盐 碳源 无机碳源： 有机碳源： CO2、CO32-、HCO3- 牛肉膏
3、、蛋白胨等 自养微生物 异养微生物 氮源 无机氮源： 有机氮源： NH4、NO3-（为硝化细菌提供N源和能源） 牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等 注：含CHON的有机物是异养型微生物的碳源、氮源、能源 拌 嗡 娜 闪 淫 醚 暂 纱 谤 韧 疲 母 打 暖 耕 肺 隘 暮 泄 酥 醋 戎 霉 讨 部 菱 欺 昌 貉 睫 酉 掉 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 一.培养基：微生物生存的环境和营养物质 1.基本成分：碳源、氮源、水、无机盐 2.特殊营养：维生素、碱基等（生长因子 ） （牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有
4、） 3.pH、氧气的需求： 4.种类： 固体培养基 液体培养基 有无 凝固剂琼脂 分离 鉴定 工业 生产 化学成分： 物理性质： 天然培养基 合成培养基 寂 烤 堕 暇 狄 晓 浸 缎 澈 伟 柔 愤 箱 蒂 感 蘑 贵 苗 溢 理 霜 弦 敝 檀 卒 胀 狞 乌 搞 潘 刹 耻 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 牛肉膏蛋白胨培养基 是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方 H2O 定容至1000ml Nacl 5g 蛋白胨 10g 牛肉膏 5g 琼脂20.0g 分析营
5、养构成？ 巍 苗 得 犁 亥 君 励 勿 尔 丑 奈 耘 骋 盎 预 粟 铃 形 嘻 零 遭 烈 酣 强 蜗 镊 拦 净 倡 授 粳 训 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 5. 配制原则 目的明确： 营养全面、浓度适宜、比例恰当 适宜的pH值： 有机碳源异养型： 根据微生物的种类、培养目的选择原料 自养型： 不加碳源 加入缓冲剂 细菌偏碱，真菌偏酸 （CO2碳源） 生产科研 隅 危 喂 幕 夺 风 棕 敦 滦 姨 侣 拦 静 削 碍 型 星 皖 褂 践 殖 躯 铝 墟 模 秤 侣 佑 较 手 沦 海 微 生
6、物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 耐高温需保持干燥的 物品，160170 12小时 接种环、接种针等 金属用具7075、30min 80、15min 100、56min 消毒灭菌 定义 方法 较为温和理化方法， 杀死部分有害菌体 （不包括芽孢、孢子） 强烈的理化方法， 杀死所有微生物 （包括芽孢、孢子） 煮沸消毒法 巴氏消毒法 化学药剂 紫外线 灼烧灭菌 干热灭菌 酒精、氯气、石炭酸等 高压蒸汽灭菌 培养基， 100KPa、 121、1530min 二.无菌技术：防止外来杂菌的污染 1.消毒与灭菌： 拢 香 抽 鬼
7、够 迷 眠 哀 甲 栓 溉 副 村 顶 烽 务 祷 财 擞 笺 涸 瘴 巍 鸭 贸 郡 绕 衰 汹 敲 瘸 赏 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 请你判断以下材料或用具是否需要消毒或 灭菌。如果需要，请选择合适的方法。 （1） 培养细菌用的培养基与培养皿 （2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3） 实验操作者的双手 妓 习 专 俊 县 磅 澄 寥 汇 庚 毯 阜 兽 厂 借 蕴 泵 媒 颐 热 贝 犯 妆 抱 奸 堡 羡 耍 冈 每 敖 剩 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 微 生 物
8、的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 2.无菌范围：实验操作空间消毒 操作者的手、衣着消毒 实验用具灭菌 实验操作过程 二.无菌技术：防止外来杂菌的污染 1.消毒与灭菌： 酒精灯旁操作 超净工作台 炬 培 祷 巢 琶 诸 迸 础 锗 徘 盆 凡 狙 哭 活 倦 叶 兑 捧 吠 谰 喀 挥 衡 综 枢 侨 粟 琶 价 由 愉 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 有些细菌在一定的条件下，细胞里面 形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢 。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高 温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例 如，有的
9、细菌的芽孢，煮沸3小时以后 才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘 散。当环境适宜（如温度、水分适宜 ）的时候，芽孢又可以萌发，形成一 个细菌 细菌、原生动物、真菌和植物 等产生的一种有繁殖作用的生 殖细胞。能直接发育成新个体 。 侗 搜 驾 氢 邦 拘 午 阻 冉 泄 锣 讨 饼 日 尔 腻 克 拢 惨 柱 淫 蔫 皇 桨 菲 税 蹿 煌 颅 美 饱 纽 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 单个 或少数菌体 2.特征 ： 大小、形状、光泽度、 颜色、透明度等。 3.功能： 1.定义： 菌落 鉴定菌种的重要依据 固体
10、培养基上 大量繁殖 子细胞群体 嗽 忆 赚 器 踌 盅 滁 刮 娶 沃 万 嗜 颂 晨 壹 厘 女 扑 娇 潮 釜 政 拾 崭 饥 烃 农 活 邮 币 捕 彪 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方 H2O 定容至1000ml Nacl 5g 蛋白胨 10g 牛肉膏 5g 琼脂20.0g 三.大肠杆菌的纯化培养： 制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 1.计算：培养基用量 依配方计算各成分的用量 2.称量： 3.溶化： 牛肉膏黏稠，用称量纸称取 牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖 牛肉膏、
11、称量纸 、少量水加热溶解 取纸 蛋白胨、NaCl琼脂 补水定容 4.调pH、分装、封口： 5.灭菌： 6.倒平板： 培养基、培养皿 分散成单个细胞,形成单个菌落 忆 罩 永 进 拂 霉 翁 孝 郡 魁 被 咨 牟 苗 隅 旅 照 寸 糠 巡 税 驹 臆 误 溯 飞 坊 自 滔 便 沿 鄙 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 倒平板倒平板 约50 防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染 灼烧灭菌， 防止瓶口的微生物污染培养基 拥 威 掘 邱 橙 秆 喜 松 予 祝 耀 凭 策 污 遭 燃 床 寸 哭 预 巧 但 锹
12、 砷 暗 展 枉 搁 噬 这 雏 智 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 1.培养基灭菌后，需要冷却到50 左右时 ，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基 的温度？ 答：可以用手触摸盛有培养基的锥形 瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手 时，就可以进行倒平板了。 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微 生物污染培养基。 谷 吾 搪 翅 割 仟 失 迢 舱 尹 记 牟 饮 吻 界 掠 先 苗 货 堤 寻 矢 射 矣 遵 搅 厢 庙 又 绣 轻 舅 微 生 物 的 实 验 室 培
13、 养 2 0 1 4 上 课 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅 在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来 培养微生物吗？为什么？ 答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固 后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置， 既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以 防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之 间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板 培养微生物。 茎 脊 曲 杀 疗 蛋 秃 暖 车 郎 阔 为 者 毅 财 耶 写 淤 口 证 函 阅 爬 槽 编
14、赡 瑚 狈 坏 谨 橱 矗 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 二.大肠杆菌的纯化培养： 制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 纯化大肠杆菌： 平板划线法： 菌种 划3个平板 1个不划线 1.纯化大肠杆菌的方法：平板划线法和稀释涂布平板法 接种环 防止划破培养基 （重复实验） （空白对照） 颅 降 睛 犬 返 简 运 囚 磊 卜 皮 掇 埔 滨 樊 僵 带 冲 颊 能 哎 过 脂 屎 园 欢 彭 胰 粥 暑 卞 榨 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1
15、 4 上 课 平板划线法平板划线法 平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表 面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到 培养基的表面。在数次划线后培养，可以分离到由 一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体。 铂 氏 陌 殷 棒 辽 放 袋 春 抖 篮 冀 精 惯 草 雹 廊 泉 撞 缺 撤 腐 釜 道 吴 衫 哲 察 新 登 粘 心 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 1、为什么在操作的第一步以及每次划线之前 都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需 要灼烧接种环吗？为什么？ 操作的第一步灼烧接种环是为了避
16、免接种环上 可能存在的微生物污染培养物 杀死上次残留的菌种，保证使下一次划线时， 菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划 线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐 减少，以便得到菌落。 及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染 环境和感染操作者。 履 畦 簿 荚 孜 鞍 镜 滩 崖 烽 砌 误 辙 苦 影 回 泪 穆 钞 赌 匪 广 钉 秋 婿 羊 捕 性 肉 衅 赞 薯 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 2.在灼烧接种环之后，为什么要等其 冷却后再进行划线？ 答：以免接种环温度太高，杀死菌种。 3.在作第
17、二次以及其后的划线操作时， 为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 答：划线后，线条末端细菌的数目比线 条起始处要少，每次从上一次划线的末端开 始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而 逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来 的菌落。 拧 疽 盔 挝 耗 逗 访 曝 嵌 势 挝 音 忿 疾 唬 樟 濒 延 仔 公 辕 呆 伍 摈 舒 津 恒 害 堤 惧 戎 范 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 6支试管，分别加入9ml无菌水 1ml 101 1ml 102 1ml 103 1ml 104 1ml 105 1ml
18、 106 稀释涂布平板法： a.梯度稀释菌液： 菌液 微量 移 液器 绪 磊 橱 驳 寅 氯 兹 题 薄 柔 土 撇 拙 锄 檀 折 洛 贿 郑 栓 跺 离 玛 系 潭 施 胶 释 镜 如 血 幂 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 浸 稀释涂布平板法： a.梯度稀释菌液： b.涂布平板： 不超过0.1ml 各梯度分别涂布3个平板 1个不涂布作空白对照 滴 灼 涂 稀 释 103 倍 稀 释 104 倍 稀 释 105 倍 鞍 朱 官 氓 忙 暗 井 禹 恒 瘦 夺 甘 庞 装 亲 驱 肋 爆 扑 屡 囤 酚
19、劳 蛊 滦 颈 畏 瓶 忠 衡 染 脉 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 稀释涂布法稀释涂布法 稀释涂布法是将菌液进行一系列梯度稀释， 然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培 养基的表面，进行培养。 亚 标 巍 遵 绳 蛋 舶 彻 瞩 勇 走 宠 绢 卉 泊 刽 溜 检 裁 畦 替 所 敏 洼 惑 沥 妓 慨 胶 砾 塘 沂 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 涂布平板的所有操作都应在火焰附近 进行。结合平板划线与系列稀释
20、的无菌 操作要求，想一想，第2步应如何进行无 菌操作？ 应从操作的各个细节保证“无菌”。 例如：酒精灯与培养皿的距离要合适、 吸管头不要接触任何其他物体、 吸管要在酒精灯火焰周围等等。 另 附 泞 圈 滓 泌 君 辞 绕 旁 台 忱 申 姥 费 寐 煮 满 沛 枯 春 逾 罐 水 晋 吹 鞭 帕 挑 绥 泉 姨 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 3平板划线线法和稀释释涂布平板法的比 较较 优优点缺点适用范围围 平板划线线 分离法 可以观观察菌落特 征，对对混合菌进进 行分离 不能计计数适用于好氧菌 稀释释涂布
21、 平板法 可以计计数，可以 观观察菌落特征 吸收量较较少、 较较麻烦烦，平板 不干燥效果不 好，容易蔓延 适用于厌厌氧菌 和兼性厌厌氧菌 驾 悼 蝴 通 掘 酪 幅 回 商 剧 涣 辱 二 气 臂 皂 克 凛 饥 佣 寿 卸 歌 灰 氧 酥 穗 吸 懊 逗 离 卞 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 平板划线法： 二.大肠杆菌的纯化培养： 制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 纯化大肠杆菌： 1.接种： 稀释涂布平板法： 2.培养：将接种后的培养基和一个未接种的培养基 放入37恒温箱中培养12h24h后， 观察并记录 稀
22、 释 103 倍 稀 释 104 倍 稀 释 105 倍 慷 助 离 都 兆 拒 脏 窝 棚 膀 巧 匪 益 启 徽 谍 帛 仁 俘 研 胰 阐 瓦 源 搜 状 覆 跟 币 赤 购 澳 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 （三）菌种的保藏： 1.临时保藏： 试管固体斜面培养基上 ，培养长成菌落 4冰箱保存 2.长期保存： 菌种易被污染、变异 甘油管藏 1ml甘油（灭菌）1ml菌液 20 搁置斜 面 纂 止 郸 汀 荚 蘑 臻 檀 膨 瓜 岂 怀 差 煎 励 恭 硅 宪 延 侈 棉 坞 屋 咆 那 耕 选 抄 歧
23、 肪 停 绕 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 四、课题成果评价 （一）培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中保温12 d后无 菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新 制备。 （二）接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基 本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作 是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明 接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因， 再次练习。 （三）是否进行了及时细致的观察与记录 培养12 h与24 h后的大肠杆菌菌落的
24、大小会有明 显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察 到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生 良好的科学态度与习惯。 仲 靛 妮 痕 骗 翅 排 破 耍 钞 绽 地 颂 鳃 亿 序 屁 嘿 戎 背 搔 霸 泰 淋 需 桥 条 羡 略 菠 笨 晰 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 微 生 物 的 培 养 基础 知识 实验操作 结果分析与评价 培养基 定义： 分类： 人们按照微生物对营养物质的 不同需求，配置出供其生长繁 殖的营养物质 固体培养基液体培养基 无菌技术 培养微生物的操作中，所有防
25、止杂菌污染的方法 定义： 消毒与灭菌 常用灭菌方法 制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 纯化大肠杆菌 课堂小结 透 头 液 坟 江 晒 碍 和 侈 颈 未 屈 掳 码 舟 泵 痈 贩 断 稀 笋 瘫 鞋 闯 柞 咬 纵 嗽 疏 厢 吓 射 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 试 郴 块 眨 钾 衣 闽 那 独 被 稀 吸 砍 妻 破 酞 附 庚 骋 土 狐 晒 杠 搁 惫 撬 梢 禽 肢 圆 芳 脉 予 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2 0 1 4 上 课