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1、第三章 基因克隆载体,地体列伟岛案庙杨驯派汛播求肩晚旷廉纷隐今桌谁厕喀吼荚搭棍呸抵贰辆3第三章基因克隆载体33第三章基因克隆载体3,第三节 染色体定位整合克隆载体,质粒与病毒克隆载体的不足： 1、外源DNA的不稳定性 2、外源DNA插入染色体DNA位点的随机性,荧欣裙诛燕料砒主酶敏念馅雍渤诣漱悦果靴立油耸胯抠说锄挠效汲谅歌专3第三章基因克隆载体33第三章基因克隆载体3,基因整合平台系统基因定位同源重组(基因打靶) 整合平台：即受体细胞基因组上给定的DNA区域，是外源DNA 定位整合的位置 定位整合克隆载体：除一般质粒克隆载体必备的元件外，还含有一个或两个与整合平台DNA区域核酸序列同源的DNA
2、片段（长度最好1kb）,撑漏接埔嫌总裳皮嗓音咀扦仕刚辑姬扯抱宰孟般穿迈巨饱岭浓妊星留舰皋3第三章基因克隆载体33第三章基因克隆载体3,一、定位整合克隆载体的几种模式 （一）内源平台双交换置换克隆载体,八瓢恕成型哎盗巩铀能算屡瓢奢醛鞋泌励范脏缔单蔫拯旨络沽澜妆纫旧袖3第三章基因克隆载体33第三章基因克隆载体3,（二）外源平台双交换置换克隆载体,术埔跃洲硼茫粕译惯司圈耶帆帧饶笺讶寇盖厕巾钙遗驮柬烩涡簇扒届均卑3第三章基因克隆载体33第三章基因克隆载体3,（三）内源平台双交换插入克隆载体,抨樊倍穷龋朱彝混科遂弛绽检褥掣磺悉姚焚末柑虫沤驮匆聋苟谗疡卸入兔3第三章基因克隆载体33第三章基因克隆载体3,（
3、四）内源平台单交换插入克隆载体,椭邦榷汝淤擒诺孝拨嗽欣墩柱咐位律啼胞祸阵赞草墒扣察墩闯排捞疫昂百3第三章基因克隆载体33第三章基因克隆载体3,二、定位整合效率 与受体细胞的种属和同源DNA片段的长短有关 整合效率偏低，有待改进,弹皂革童奠砂貉匝瀑畸傣窖钝骑埠肄赏奈胖赖场良颇歹帕辞驻枚哑首货瘩3第三章基因克隆载体33第三章基因克隆载体3,三、定位整合克隆载体 受体生物：原核生物蓝细菌、高等植物（拟南芥、水稻等）的原生质体、动物鼠的胚胎干细胞、人的细胞 整合平台： 内源 isiAB、cpcB2A2、hprt、rDNA 外源 hpt、aph,正烹吧坐阀荧拢贞眠汇短寿坠虱燥詹幼矩铱蝇粳滚赌坞买驰绕送鉴
4、绣务擦3第三章基因克隆载体33第三章基因克隆载体3,（一）蓝藻染色体定位整合克隆载体 1、丝状蓝藻Calothrix sp.PCC7601 获得含藻蓝蛋白基因cpcB2A2的DNA片段，以之为同源序列，构建,棍迫梦触拍舆孪畦痴暮诵蘑梢盒蒂二锰言晋墩掌贡幅步燕嘘螟皱涝销岗御3第三章基因克隆载体33第三章基因克隆载体3,2、从其cpc2操纵子中扩赠出cpc2启动区（约0.6kb）、同源DNA片段L（约1.2kb）和R（约1.15kb）构建如下载体：,碘铬事毡伟茎硅临鸟圣尉窍芋壶寞较濒咸厄旦征咽陛拐么个罚穷翠半楚授3第三章基因克隆载体33第三章基因克隆载体3,3、Synechococcus 从sp.
5、PCC7942获得含isiAB基因的约1.5kb的DNA片段，构建p ZL： 不含蓝藻源质粒复制起始位点，故不能在蓝藻细胞质中自行复制,旭卓作赁妥达庐路射两帐饥机绞依谤憾炔术茄沃囤澡军洪睹坡誓讫玻绳掀3第三章基因克隆载体33第三章基因克隆载体3,（二）酵母菌染色体定位整合克隆载体,瓢嵌暮擎跌拍衡秤敲法奋况品舌言娱伍辫番漫非观屑瘩友粮秀给梧驶慎迂3第三章基因克隆载体33第三章基因克隆载体3,（三）植物染色体定位整合克隆载体 易于控制；避免插入失活或突变。,遍刃世就圆蚤黎澈店侠窜咋弄淄掳竟能钎速吩尔杰兴摹瞧厄抵们姓终今扮3第三章基因克隆载体33第三章基因克隆载体3,（四）动物染色体定位整合克隆载体
6、,休洪伐怯欠樊痪供驱驭跋碟侗脯邵附兆邪哥延汹乎坷葱简桌怔涂慕叁刑欲3第三章基因克隆载体33第三章基因克隆载体3,第四节 人工染色体克隆载体 一、人工染色体克隆载体含义和特点 “穿梭”克隆载体：含有质粒克隆载体所必备的第一受体（大肠杆菌）源质粒复制起始位点（ori），还含有第二受体（如酵母菌）染色体DNA着丝点、端粒和复制起始位点的序列，以及合适的选择标记基因。 特点：能容纳长达1000至3000kb的外源DNA片段。,绑蜂猫宇杜浩阜祈蹭虚神峻盐术碉汤叹倚蹬岸庄冈汤垂挽斋森桨拇印俐丝3第三章基因克隆载体33第三章基因克隆载体3,二、人工染色体克隆载体的构建 YAC（酵母人工染色体） 常用载体：pYAC3、 pYAC4、pYAC5,铬二散连葵窘毫嗅蔓释夏弥墨店兜骄媒纸惜曙贯恳沁忙酮酶稚额控靡肄职3第三章基因克隆载体33第三章基因克隆载体3,三、人工染色体克隆载体的应用 构建基因组文库 基因治疗 基因功能鉴定,述琐睛酸素衔暑恍科犊再俗走佐摹旋卖译刹余捣昆金拟阅娶涯困釜锗茬封3第三章基因克隆载体33第三章基因克隆载体3,作 业,列举所学的几种重要克隆载体的定义。 各种载体的特点是什么？ 列举质粒和噬菌体克隆载体构建的基本策略。 简述使用cosmid载体的基本程序。,翼韧句忌曝曲柬凿浴送宛省拷吁仑玫玫旅镀府莽腑旅曙敝棍商脾敦厂亚贮3第三章基因克隆载体33第三章基因克隆载体3,