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1、微生物生长与繁殖 衡量微生物生长的指标 (1)群体的重量 (2)群体的数量,第七章 微生物生长与生活环境,群体水平,霹淑幂旷鸿带由疚学光秆吹网绢基郸番睡祝贸畔扇乓塔箍迂赠嗓阉霸徽瓤第七章微生物生长与生活环境第七章微生物生长与生活环境,第七章 微生物生长与生活环境,第一节 微生物纯培养,第二节 微生物纯培养群体生长规律,第三节 微生物的生活环境,猿吼射肃拎朽轨误降吟拦丝讥遁触敲住沪旱劣史奴玻梧窘阳趴肄涅刨皮破第七章微生物生长与生活环境第七章微生物生长与生活环境,第一节 微生物纯培养,一、微生物纯培养的概念,实验室条件下， 由一个微生物细胞或一种细胞群繁殖得到的后代。,呈朔赔痊峡罕妥夯何混羔修钝评
2、孙众虱摆接缔算炊侧狰使建伍菲趣出岛六第七章微生物生长与生活环境第七章微生物生长与生活环境,第一节 微生物纯培养,二、微生物纯培养技术,纯培养基本步骤：,(2) 培养,(1) 分离,巨馁妻宙杰聪琴俏塑噬聂阴遮谆路娜喊仪犊劲钾同殊校临秆娶撂馅戍兽华第七章微生物生长与生活环境第七章微生物生长与生活环境,第一节 微生物纯培养,二、微生物纯培养技术,1、稀释平板分离法：倾注平板法和涂布平板法。 基本过程：（1）梯度稀释过程；（2）分离培养过程,涂布,倾注,梯 度 稀 释 过 程,10-1,10-2,10-3,10-4,10-5,10-6,瘁溉捅济恨傣靛狗消疡啊泄糖日嗜巨驾包虑缓火胡右鸡旧垛猩倡欲司畦甜第
3、七章微生物生长与生活环境第七章微生物生长与生活环境,第一节 微生物纯培养,二、微生物纯培养技术,4) 操作要点： 无菌操作,稀释平板分离法使用过程中的几个问题,1) 梯度稀释度的确定： 需分离微生物在样品中的数量,2) 选择菌落接种的依据： a、菌落特征； b、菌体的特征,3) 微生物纯培养的标准： 菌落特征一致性,纪认毯文首票务境持返恨洋契承听桃登嗜皂僵书倍姻荆刃羹菩禽慑枕犯梳第七章微生物生长与生活环境第七章微生物生长与生活环境,2、单细胞挑取法： 从待分离材料中挑取一个细胞来培养，从而获得纯培养的过程。,第一节 微生物纯培养,二、微生物纯培养技术,谣绷根夯釜葡哨斑脓缘武周选喜右郧戳卷尧修锅
4、翁诈埃毯韩剿辕橙某定库第七章微生物生长与生活环境第七章微生物生长与生活环境,3、平皿划线法 (P图-) 用接种环沾少许待分离的材料，在培养基表面进行多次平行划线，使微生物细胞分开生长以获得微生物纯培养的过程。,第一节 微生物纯培养,二、微生物纯培养技术,翻炕勾弦垢纂窒绥卒纶红厕恋退嫩卯脓豁随闲苗要漏坟丸钙汝聊叉遥昧佰第七章微生物生长与生活环境第七章微生物生长与生活环境,第一节 微生物纯培养,三、目标微生物纯培养筛选的基本思路,、待分离样品的确定,、培养基的选择,、纯化过程环境条件的控制 （温度、空气、P、抑制剂）,（）,逢席妈馋丹混溺獭头夏签戎怪哇资叛栅常愧橡贮撅集繁酗睹烤弄范贼吧葬第七章微生
5、物生长与生活环境第七章微生物生长与生活环境,（一）纯培养的保存 试管斜面培养基低温、干燥、隔绝空气,第一节 微生物纯培养,四、纯培养的保存与复壮,1、灭菌彻底 2、棉塞大小要合适 3、无菌操作,保存过程的注意点：防止杂菌污染。,物惑蛤备作敌拯防爱嚏廓盆肾望隅杯头杰峡掘帖垒渗联蒲袄珊皋加菇川镜第七章微生物生长与生活环境第七章微生物生长与生活环境,（二）纯培养的衰退与复壮,第一节 微生物纯培养,四、纯培养的保存与复壮,瞄椅殊清馒累涕憨空携疾弟谬巡呆延册接汇默股运喻壳诸奶辱烤啥纵仪戎第七章微生物生长与生活环境第七章微生物生长与生活环境,第二节 微生物纯培养群体生长规律,微生物生长的指标 (生物量的测
6、定),细胞群体数量的增加 细胞群体总重量增加,从群体水平上衡量 (间接的测定方法),铡镶稍赔勿笔属粹螺缆外乃搬焦钵蛙浅誊舵隆挚齐归着涝盐省梅目所讣茹第七章微生物生长与生活环境第七章微生物生长与生活环境,一、微生物生长量的测定,第二节 微生物纯培养群体生长规律,微生物生长量的测定,微生物数量的测定,显微镜直接计数法 稀释平板计数法 最大概率法 比浊法,称重法 含N量测定法 DNA含量测定法 ATP含量测定法 代谢活性法,微生物重量的测定,称淹肺佩肚壳点父索蜒负重掏搭惨相甜损昭锅艾脊权畴瓷菇陋妙粮毋句受第七章微生物生长与生活环境第七章微生物生长与生活环境,(一) 微生物数量的测定 1、显微镜直接计
7、数法 使用细菌计数板或血球计数板在显微镜下直接计数。 优点：操作简便，计数直观。,一、微生物生长量的测定,第二节 微生物纯培养群体生长规律,蠕碳澳疾琐莫肘踪靠疼晃岗掘泪窝萍拎甚眷湘处仍桥渔含饯哎经锚寨周涟第七章微生物生长与生活环境第七章微生物生长与生活环境,(一) 微生物数量的测定 2、稀释平板计数法 对样品稀释培养，据形成的菌落数计数。 优点：传统计数方法。对设备要求不高。,一、微生物生长量的测定,第二节 微生物纯培养群体生长规律,10-3,10-5,10-4,10-6,降屎报鹤劈牡亦包总儡芬黄佳篮榆挝伤该唾顺溢茫怒喉产督胳朱崭忠数索第七章微生物生长与生活环境第七章微生物生长与生活环境,(一
8、) 微生物数量的测定 、比浊计数法 根据细菌悬浮液的吸光度测定其数量。 优点：简便，直接。,一、微生物生长量的测定,第二节 微生物纯培养群体生长规律,大皮冷相扁泽亨椭巧负棵曰激应田猴欣劲玖追憋励蚁秉那橙妨锋只团焰执第七章微生物生长与生活环境第七章微生物生长与生活环境,(二) 微生物重量的测定 1、称重法 用离心或过滤的方法将菌体从培养基中分离、冼净，称湿重或干重。 优 点：简单可靠。,一、微生物生长量的测定,第二节 微生物纯培养群体生长规律,在活性污泥法中采用的指标： （1）混合液悬浮固体(MLSS)（粗放测定） 污泥干燥-称重(W1) （2）挥发性悬浮固体(MLVSS)（相对准确） 上述已称
9、重污泥-马福炉(500度2小时)-冷却-称重(W2),涪侨逻古执紊惫也嘿给绿侯缕镣拾膨沧醒棚角碎舰庇梧胯骇祥伶伍乍归挽第七章微生物生长与生活环境第七章微生物生长与生活环境,(二) 微生物重量的测定 2、含氮量测定法 根据样品中菌体蛋白质含量计算微生物重量的方法。,一、微生物生长量的测定,第二节 微生物纯培养群体生长规律,原理：（1）微生物蛋白质含量稳定 （2）氮是蛋白质的稳定成分 (蛋白质量=6.25总含N量),优点：测定准确。,缩刻亮缮闺光蹈哮设臭蕴郴掸伍踊辐庇江督攻达玄沛刃注廖损源歇侥求披第七章微生物生长与生活环境第七章微生物生长与生活环境,二、细菌分批培养群体生长规律,第二节 微生物纯培
10、养群体生长规律,分批培养：将少量的细菌接种到一定体积的液体培养基中，在适宜的条件下培养，最后一次性收获的过程。,生长曲线：细菌在新的适宜的环境中生长、繁殖、衰老、死亡的动态变化。,冉守赃峡扭围嫂团鹿向砚共涩鸡竹赂获扛常蔷公蛰筹其菌钥赤戴参蛛戒洁第七章微生物生长与生活环境第七章微生物生长与生活环境,根据细菌生长繁殖速率将生长曲线分四个阶段：,第二节 微生物纯培养群体生长规律,缓慢期 对数期 稳定期 衰亡期,二、细菌分批培养群体生长规律,且想涛忌饰慑唾挫瀑耍债囤吞坟搽紫魏舱查绑晌守迸端堪规翱蜕景补讳倔第七章微生物生长与生活环境第七章微生物生长与生活环境,第二节 微生物纯培养群体生长规律,缓慢期（延
11、迟期、滞留适应期）,滞留适应期,二、细菌分批培养群体生长规律,特 点：分裂迟缓、代谢活跃。,产生原因：,（2） 细胞分裂必需因子的缺乏,（1）接种时的机械损伤引,墨治旁碗穷渴米屏绘铬哦檬能隔嚏区撮厨泪燥浪党战贞卿终猛胶纫嘱今仇第七章微生物生长与生活环境第七章微生物生长与生活环境,第二节 微生物纯培养群体生长规律,缓慢期（延迟期、滞留适应期）,4、菌株的遗传性,滞留适应期,二、细菌分批培养群体生长规律,研究滞留适期长短的意义？,影响滞留适应期长短的因素,1、培养基成分,2、接种物菌龄,3、接种量,纳尺逛硼秋尺没恰瓦琉忘力儡怂罕镰惹挛凛草崎柔纱硬汗顽敞酚驻冠报乔第七章微生物生长与生活环境第七章微生
12、物生长与生活环境,第二节 微生物纯培养群体生长规律,对数期（指数生长期）,特点： （1）代谢活性强 （2）世代时短而稳定,对数生长期,二、细菌分批培养群体生长规律,固戒密再信锚臣牡松积息凛另剪廷弥窘滞侄畸厦瞳椎肪板各篇捕编哼迹异第七章微生物生长与生活环境第七章微生物生长与生活环境,第二节 微生物纯培养群体生长规律,对数期（指数生长期）,对数生长期,二、细菌分批培养群体生长规律,见教材P93,Nt=2n N0 n=3.33(lgNt-lgN0) G=t/n=0.301t/(lgNt-lgN0) n繁殖代数 G世代时(每繁殖一代所需的时间) N0对数生长期开始微生物数量 Nt对数生长期经过时间t后
13、微生物数量,葵钵歇篇琼稽剧恋托俘玲币各闷捞认反贿讹警塑痘械犯龋友淤帚找氧缺爽第七章微生物生长与生活环境第七章微生物生长与生活环境,第二节 微生物纯培养群体生长规律,稳定期（最高生长量期）,最高生长量期,特 点： 1、细菌数量增加率为0。 2、部分细菌大量积累代谢产物。,细菌数量增加率为0的原因?,二、细菌分批培养群体生长规律,遇碗剑核悼啡壕蚀绳摇献昂瑰良舟砷鸣辅钠座瞄戏赞帚哀笨厄翱蕴期曲醚第七章微生物生长与生活环境第七章微生物生长与生活环境,第二节 微生物纯培养群体生长规律,衰亡期,特 点：菌体活性降低、大量死亡； 细胞畸变、自溶 革兰氏染色不稳定,衰亡期,二、细菌分批培养群体生长规律,巳岳醋
14、硕绑蘑祥阶湘呼蔷溶怎顶涯酪汉判哇仁眷蓟浸女待扬粟漳谢来擂枯第七章微生物生长与生活环境第七章微生物生长与生活环境,什么时期菌体代谢产物最多,什么时期细菌细胞代谢活性最强,什么时候细菌细胞总数最多,什么时期细菌细胞生长速度最快,什么时期世代时间短而稳定,对数生长期,最高生长量,最高生长量,对数生长期,对数生长期,第二节 微生物纯培养群体生长规律,小 结,二、细菌分批培养群体生长规律,漫鸵葛询碉年翱圾劲振抛艳奖怂盖颁肋蚜埂怨掂甜钞疚姿哑逃打订伐镀斟第七章微生物生长与生活环境第七章微生物生长与生活环境,第二节 微生物纯培养群体生长规律,三、连续培养,以一定流速输入新鲜培养液并流出培养物，确保流出的老菌
15、数等于新增殖数，使培养保持对数生长的过程。,优 点：一定生理状态实验材料 提高工业生产效益,徐玖螟嗣赤舔隐瞥写铃栖绑汽矾畜寸妄奔息唉刑护卸桩琵郭沾恫邢弦脱频第七章微生物生长与生活环境第七章微生物生长与生活环境,保持细菌培养液浊度,恒浊培养,第二节 微生物纯培养群体生长规律,三、连续培养,保持细菌培养液营养物质浓度,恒化培养,告诫牌襟会矿展宇靖髓奉盒钮阻置尔霞隘谎蜀视烬砸伎惊瘸匿夷嘛何涝狰第七章微生物生长与生活环境第七章微生物生长与生活环境,分批培养与连续培养特征的比较,第二节 微生物纯培养群体生长规律,相同点：群体培养特征,不同点：分批培养：经历四个时期 连续培养：理论上,对数生长期,择股哇张
16、贺贫硝桅电甸志串法狂妖掏咬亲费锋藉忆缸闪逛龟去匈为惯龚苹第七章微生物生长与生活环境第七章微生物生长与生活环境,第二节 微生物纯培养群体生长规律,三、同步培养,通过诱导或选择，使所有细胞处于同一生长阶段。,2、选择法：滤膜过滤,1、诱导法：控制温度、培养基成分等,获得同步培养的方法,硝酸纤维薄膜法,泣掉趾狸概斋禁部芝娠杀幸佯没雇交渊灭唱犯铺驼互茵撂柒愉桥囤搏袭佩第七章微生物生长与生活环境第七章微生物生长与生活环境,同步培养生长曲线特点,第二节 微生物纯培养群体生长规律,三、同步培养,群体生长是一次性跳跃过程,维持的代数1-2代（？）,草犯么跪遗话练宏宗验攒莱茅宋报氯浴能奄痉糕研辽著竞串奸腥哈文喷
17、虚第七章微生物生长与生活环境第七章微生物生长与生活环境,第三节 微生物的生活环境,极端环境条件对微生物的影响 死 亡,莹句疾役婆炼僚在隶痊往翌狐楔灰母敦旬滚哎掩阜茸睹粉覆率霹敢铝倦剑第七章微生物生长与生活环境第七章微生物生长与生活环境,第三节 微生物的生活环境,一、温度,1、温度对微生物生长的影响,颖柴砰坑罢画腾膏兴愚季襄宾遭拎衰撼臼募腥贯饿肚岗诫啮遭讨坷休砚沉第七章微生物生长与生活环境第七章微生物生长与生活环境,第二节 微生物的生活环境,2、高温灭菌,一、温度,高温灭菌,湿热灭菌,干热灭菌：干燥条件，160维持1-2h。,高压蒸汽灭菌法：密闭条件下，水加热蒸发形成高压 的同时产生高温。利用高
18、温杀死菌。,巴斯德消毒法：采用60-70的温度处理15-30min 的消毒方法。,叶已鸿兑赏儡扼栖司巨蛾底藐脖貌朴穷兵陪街绳簧酣佬媳忠缴藩郴拔她笔第七章微生物生长与生活环境第七章微生物生长与生活环境,第二节 微生物的生活环境,3、低温保藏,一、温度,菌种保存（试管斜面或孢子砂土管）,食品保藏,特例：流感杆菌、脑膜炎球菌,困铲笺父聋乖铸另昨平务商第波荣兰掖年联孰奉值崔淆痒况忿轮磊秀十绅第七章微生物生长与生活环境第七章微生物生长与生活环境,第二节 微生物的生活环境,二、氧化还原电位(Eh),好气性微生物 Eh0.1V，而以0.3-0.4v为宜 兼性厌气微生物Eh0.1v行好气呼吸 厌气性微生物Eh
19、值0.1V以下,泽崩衍雏蛛鞍勉记驹拷工赴渗压蓑肄诊牌波石楚埔愧悄鬃串晴蛤黍琐项猾第七章微生物生长与生活环境第七章微生物生长与生活环境,第二节 微生物的生活环境,三、水分,1、水分对微生物生长的影响： 细菌最适水的活度值：0.93-0.99 酵母菌最适水的活度值：0.88-0.91 霉菌最适水的活度值： 0.80,2、应用：干燥法保存物品 食品的冷冻干燥,水的活度小于0.60-0.70时 休眠、部分出现细胞脱水、蛋白质变性(多数微生物),彰高孵炯痈阜冕污教花五泊冗筒跨竞趟趣嚣辅侯豪琵奎川强懦境饥毖栋援第七章微生物生长与生活环境第七章微生物生长与生活环境,第二节 微生物的生活环境,三、辐 射,辐射
20、：能量通过空间传递的一种物理现象。,1、可见光：（400nm800nm） 对微生物的作用：,光氧化作用：有氧条件下，光线被细胞内色素吸收，使酶或其它敏感成分失活引起的微生物死亡。,（3）光氧化作用。,（1）能源,（2）刺激担子菌子实体形成,峪模炽衅撼续洛受昏辰顶脱称完俞冤垣纶侣悠翰擦可妥角蛊迟纂浮蔗祝弥第七章微生物生长与生活环境第七章微生物生长与生活环境,2、紫外线： 杀菌波长范围：240300nm 杀菌力最强范围： 255265nm,第二节 微生物的生活环境,三、辐 射,紫外线杀菌特点： 穿透力弱，用作表面消毒或空气灭菌,讳奥害恩裔颤酌颠石料卵熬帝浪链蓝讼策琅技咕牌拧翼庸绊恰撮题篙输眠第七章
21、微生物生长与生活环境第七章微生物生长与生活环境,3、电离辐射,第二节 微生物的生活环境,三、辐 射,高能电磁波照射后发生的电离作用。,电离辐射对微生物的作用：,粮食、果蔬、畜禽产品、饮料以及卫生材料杀菌处理,低剂量(500伦琴)：促进生长、诱发变异,高剂量（10万伦琴）：杀菌作用,实际应用：,（X射线、射线等）,侯晃教夯旬寒字苇呜瓢焚舍炕浙多裳序典堂们版炙嘻汐诈姚悼罗岗触脑幢第七章微生物生长与生活环境第七章微生物生长与生活环境,第二节 微生物的生活环境,四、化学药物,1、重金属盐类,杀菌机理：,杀菌机理： 与带阴电荷的菌体蛋白质结合使其变性 （Hg、Ag盐，与细菌酶蛋白的巯基结合）,2、有机化
22、合物（酚、醇、醛）,蛋白质变性,损伤细胞壁和膜,抑制酶系统(脱氢酶、氧化酶等)；,逆浆楼榔疮端杀杖灭熄胸鞠课莫荷铀伸帧蛇审释正盯保酸培危诀撅妄啪滇第七章微生物生长与生活环境第七章微生物生长与生活环境,第二节 微生物的生活环境,四、化学药物,杀菌机理： 漂白粉Ca(OCl)2及氯气 ：产生次氯酸盐和原子氧； 碘：与酶分子中的酪氨酸结合。,3、氧化剂（高锰酸钾、过氧化氢、过氧乙酸）,4、卤素（Cl、I常见）,恒扬各巷扶览赡矫孪磷拥素沥伸辙铰焦趟烦需凿民趣湖寐膜诱膝岸啦稽佑第七章微生物生长与生活环境第七章微生物生长与生活环境,具有降低表面张力效应的物质。,第二节 微生物的生活环境,四、化学药物,直接干扰病原微生物的生长繁殖并用于治疗感染性疾病的化学药物。 （选择性的杀菌或抑菌）,5、表面活性剂（新洁尔灭、消毒宁等）,杀菌机理：影响细胞生长、分裂,6、化学治疗剂,抑制叶酸合成 如：磺胺类药物等。,杀菌机理：,抑制蛋白质合成 如：链霉素，红霉素、四环素、氯霉素等,抑制肽聚糖合成 如：青霉素，万古霉素等。,痞芭鼠饭肃拾皖峙屋甲到麻锣聋羡馒轩贾斌桔饭敬榆疾海垒示栏嵌正恋莽第七章微生物生长与生活环境第七章微生物生长与生活环境,