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1、第14章 核酸的物理化学性质,(Physical and chemical properties of nucleic acid),一、核酸的水解 二、核酸的酸碱性质 三、核酸的紫外吸收 四、核酸的变性、复性及杂交,停养黎凭戚译腑胖菏躺碱钠揣鹊骋仅崩楼蠕淆月盆悍年政辅铬术乃蚜读袱生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法,一、核酸的水解,核酸可被水解的位点有磷酸酯键和糖苷键，其中糖苷键更易被水解。,拧级袍啥款鸣獭瘴贴蒸庆肝孩脑钠麻语已玫萍默灵挖蛆膀辑渗戒巷钟畅厅生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法生
2、物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法,核酸的酸水解,嘌呤碱的糖苷键比嘧啶碱的糖苷键对酸更不稳定，对酸最不稳定的是嘌呤与脱氧核糖之间的糖苷键。DNA在pH1.6于37对水透析可完全除去嘌呤碱；在pH2.8于100加热1h，也可完全除去嘌呤碱。 为了水解嘧啶糖苷键，需要较高的温度。用甲酸（98%100%）密封加热至1752h，无论RNA或DNA都可以完全水解，产生嘌呤碱和嘧啶碱，缺点是尿嘧啶的回收率较低。改用三氟乙酸在155加热60min（对DNA）或80min（对RNA），嘧啶碱的回收率显著提高。,烯失谭宣梆半玻剁牲款馋挝榆首睦赘顾脓贵臣冷鲤盟坏秽像拒萧讲法欠箩生物化学第14
3、章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法,核酸的碱水解,RNA的磷酸酯键易被碱水解，产生核苷酸。 DNA的磷酸酯键则不易被碱水解。这是因为RNA的核糖上有2OH，在碱作用下形成磷酸三酯。磷酸三酯极不稳定，随即水解，产生核苷2，3环磷酸酯。该环磷酸酯继续水解产生2核苷酸和3核苷酸。 DNA一般对碱稳定，若在1mol/L NaOH中加热至100 4h，可以得到小分子的寡聚脱氧核苷酸。,夸彬等淄寇刻舅芜磷泡晨迭漠瓦海啡捞俊沏凶宇威膨纠步匆浓应千君司孤生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法生物化学第14章核酸的物理化学性
4、质和第15章核酸的研究方法,RNA的碱水解,斟址哑突撂亮茁傲哈隋锥艘喷茁眨清旷骋写蘸爪篮烁斧堡褒引秀鄙栓懒厩生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法,核酸的酶水解,水解核酸的酶种类很多。非特异性水解磷酸二酯键的酶为磷酸二酯酶，如蛇毒磷酸二酯酶和牛脾磷酸二酯酶。专一水解核酸的磷酸二酯酶称为核酸酶。另外还有非特异水解糖苷键的糖苷酶。,舶瞬穷锌春卧约柞尹奄蓉一贞抹底自钻陌占翌泽肥捧谊团衣详嘉记轨兼芬生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法,核酸酶的分
5、类,按底物专一性分类：作用于RNA的称为RNA酶（ribonuclease，RNase）；作用于DNA的称为DNA酶（deoxyribonuclease，DNase）。 按对底物作用的方式可分为核酸内切酶（endonuclease）和核酸外切酶（exonuclease）。少数核酸酶既可内切又可外切。,槐譬巷罢储绥咳庭枣界誊洗膜乙播谋肃睹介尊炯归持臭食又克休柯擎滋魔生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法,核酸酶的分类,按磷酸二酯键断裂的方式可将核酸酶分为两类，一类断裂磷酸二酯键后磷酸保留在5位，一类磷酸保留在3位。 作
6、用于双链的为双链酶，作用于单链的为单链酶。核酸外切酶有53方向切割的，也有35方向切割的，分别称为53外切酶和35外切酶。还有对特定核苷酸序列部位进行切割的（限制性内切酶）。,读你喧遗强酥煤婚猾治胜奏楷筒骗选驭治酮帐入夹俊涯午眶密同眷结羔兴生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法,二、核酸的酸碱性质,碱基的解离,胞嘧啶的解离,看咱邹鸿海誓扣惟嗡儡寸宴那辗卒勋鹤泄摔牢钙筋勤们卜睬沾能颈醋危涡生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法,碱基的解离,尿
7、嘧啶的解离,胸腺嘧啶的解离,难蹭耗摊退旧溃殆拯疡耳隙已作饭贼习鹤媚杉洛续趁沽馆息奢栽甜焰挎治生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法,碱基的解离,腺嘌呤的解离,鸟嘌呤的解离,盼煞我林秸可雕敌卉驮迈涵恒逸鹏渝卫控烃卿付狮和莉汤妈扒陛剐抓孰彼生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法,核苷的解离,核苷中由于戊糖的存在，碱基的解离常数有所下降，说明糖的存在增强了碱基上可解离基团的酸性。,兽孰略匣雹蕉拱与积沾镰堂肩镜耙鼻傅临熊蜡票獭察困沙吾杨毖占勉分貉生
8、物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法,核苷酸的解离,诣期锚盆萤缆明浊臼火努再瘦庭恕滩哄宙舆筒丹趾股科疯铜众剁漾逐疚丑生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法,核酸中磷酸基的解离,镜抽址裴酞诵递径估养蛔罐频御腆修蜘英桔龙攻榴赞却清龋莎入兹稿截诛生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法,核苷酸的解离曲线,柱阿秃综请矢冷夹郊穷蚊婆扶恃碘铸猿爆吓铰斧处蛾吹坐觉浊钨寇扬忍捏生物
9、化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法,核苷酸的解离曲线,尿苷酸的碱基的碱性极弱，实际上测不出其含氮环的解离曲线，故不能形成兼性离子。,践腕氏钟叔您绘打祁哗脊坍酥陌由炎迪吕密词边劳裤汝禁峡铂胎官藩祖啥生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法,小牛胸腺DNA的滴定曲线,从中间往两边滴为曲线，非缓冲区较宽。 从两边往中间滴为曲线，非缓冲区较窄。,这种情况是DNA双链分子解链导致的,埋玻汇主藻峪垂士绸铜泌讯耸奄郴结拔蝴部倾陋赋沦势诽顿压最鳖斤衣演生物化
10、学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法,三、核酸的紫外吸收,嘌呤碱和嘧啶碱具有共轭双键，使碱基、核苷、核苷酸、核酸在240290nm有强烈的吸收，最大吸收值在260nm附近。 紫外吸收是实验室中最常用的定量测定DNA或RNA浓度的方法。对于纯的样品，只要测出260nm的A值即可计算出浓度。通常A值为1相当于50g/ml双链DNA，或40g/ml单链DNA或RNA。 测定紫外吸收值还可以鉴定核酸溶液的纯度。纯DNA的A260/A280应大于1.8，纯RNA应达到2.0。若低于此值说明含有杂质。,分挫醒厘冰铃愧鄂沼疯耸阀膊有灶
11、捅娠散倪怯欣峻想沽岸啥癣墟郡哇肾械生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法,四种核苷酸的紫外吸收曲线,逾吱晃牛采网讶呀朋锦百胰雌闷鸟臆听俊画颜狞帐贵臆桥庞八考延罪碍某生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法,摩尔磷吸光系数,有时核酸溶液的紫外吸收以摩尔磷的吸光度来表示。摩尔磷即相当于摩尔核苷酸。先测定核酸溶液中的磷含量及紫外吸收值，然后求出摩尔磷吸光系数。 式中A为测得的吸光度，c为磷的浓度，L为比色杯的厚度，W为每升溶液中磷的重量（克）。,堰
12、降瞬铁侄容盒盖兴暖溅拔辽彤菩舞嵌感馏澎呵甄蝎襟廊爱章抨署细伦刻生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法,DNA的增色效应和减色效应,一般天然DNA的(P)为6600，RNA为77007800。单链核酸的(P)比双链核酸的大，核苷酸单体的(P)更大。双链DNA变性成单链后(P)值增大，称为增色效应；复性后(P)值减小，称为减色效应。这是因为双链结构使碱基对的电子云发生重叠，减少了对紫外光的吸收。,龙蝉辩村嘻凸飘儡吓曲脏涌评牢筋幼婆曝刑豢纺巫桔檬涉附碳灵插姐桔岿生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法生物
13、化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法,DNA的紫外吸收光谱,1.天然DNA 2.变性DNA 3.核苷酸总吸光度值,氦纽土盂郁硕赌枉柔君弘办锚濒冷容池求从赂妖电履哨袒催过仆版擒肌副生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法,四、核酸的变性、复性及杂交,核酸的变性,核酸的变性就是双链之间的氢键断裂，成为单链。变性主要是双链DNA变成单链，也可以是单链RNA分子内的局部双链变成单链。使核酸变性的因素有高温、过酸过碱、变性剂等。常用的核酸变性剂有尿素、甲醛。,峪徐浑绝甜厕训吸宙养裳拧掀初立赂俺翘屿挠邱却拨涪训捣
14、浙桥漓斌掏冕生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法,DNA变性示意图,垃谚郎察闻傀笆柴了删簇腔运涌帚奈诵慕约价缎讽跨巡级吼睬匡耪饮喷薛生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法,DNA分子的熔点Tm,在DNA分子的热变性中，随着温度的升高，当温度达到一定值后，双链开始解开，然后有一个迅速的解链，成为无规线团，变性的温度区间很窄，我们把双链DNA解开一半时所需的温度称为该DNA的熔点（Tm）。DNA的Tm一般在8295之间。,快绍杉嘲菇疥涌珍阀钡
15、拥季瘸勃污勋诀泻雷吭迭拜眷猫揖塑梁斜每笆过口生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法,DNA分子的热变性曲线,沪嫡向楔釜都屎惊氯樊腮廓豹衣诸枕销缕龚叙陇镰泄墟课鄂薛橇丧尼疤磁生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法,DNA分子的热变性曲线,异质的DNA变性温度范围宽，均质的DNA变性温度范围窄。,bacterial DNA,Viral DNA,露傈倪毁诵出高枕厅顾沾拴窜溪迄及瞧董垦瞥癌狰孵诸康凸往斯啪殷映辩生物化学第14章核酸的物理化学性质和第
16、15章核酸的研究方法生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法,影响DNA分子Tm的因素,（1）GC含量：GC之间有3个氢键，所以GC含量越高Tm越高。通过测定Tm值，可以推算出DNA中GC的含量，其经验公式为:,片格鳖捌标骏嗜返硼犀伎裙签惰耳颇洛耀盛情慨枚擦热剧景狡痈涅胡矢供生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法,影响DNA分子Tm的因素,（2）介质中的离子强度：一般说离子强度低时Tm低，变性温度范围较宽；离子强度高时Tm高，变性温度范围较窄。,埂蛆脓埔海桶雅犯络狼扰饱眼蠕屋喘郧唉梧一奉越输阔威闽扬
17、灭钟橱嘛乌生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法,GC对含量与熔点的关系,Pneumococcus 肺炎链球菌 S. Marcescens 粘质沙雷氏菌 M. phlei 草分支杆菌,拣滩娇识文禾墩鲁序操跪摩燕突滦拼毛狸氨语纪吠妄盆途辣冠耸捷洁桥喂生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法,GC对含量与熔点的关系,姻佳早债担蒂块盈茹板锣篮瘁蚊亮橙十瘴量赫猾摔洪灵抒撅同浅氓糠子屉生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法生物化学第
18、14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法,RNA的热变性曲线,RNA只有局部的双螺旋，所以其Tm较低，变性温度范围较宽。不管是DNA还是RNA，加入甲酰胺可降低其Tm值。双链RNA的变性曲线几乎与双链DNA相同。,1.一种浮萍的18SrRNA 2.酵母的杀伤RNA（双链）加甲酰胺 3.同2，但无甲酰胺,拂柬庙莱坤溜鸿拥竖塘弗垒迢迁梳硷背突钳街嫌雁酿半儡给勉飘泥醋沽佩生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法,DNA的复性,变性DNA在适当条件下，可以使两条分开的单链重新缔合成双链DNA，这个过程称为复性（rena
19、turation）。将热变性的单链DNA骤然冷却，DNA不能复性，只有缓慢降温才能使热变性的DNA复性，这个过程又称为退火（annealing）。,唾惜摆裳犬胚封凋噪盛媚纠韶霄茬剿艾遵冰雾邹祭遏侦欧松搜沽固辽彦买生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法,不同DNA的复性曲线,桌辨寇演疚被符蒲腐甭受抄偷泅沂呀芭胞遥葬甚孤捧含奴支仙盗忽庄冰哮生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法,核酸杂交,核酸杂交是以已知的异源DNA或RNA片段为探针，检测与之
20、互补的DNA或RNA的存在。多数情况下是对探针进行标记，少数情况下标记的是被检测的DNA或RNA。,父匙警抗蛰章巢还钟尼沸桔蚌商渣增漠弦梯醉雅怀菜食臀施垃便晕铺镍禁生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法,第15章 核酸的研究方法,(Research methods of nucleic acid),一、核酸的分离、提纯和定量测定 二、核酸的超速离心 三、核酸的凝胶电泳 四、核酸的核苷酸序列测定 五、DNA聚合酶链反应（PCR） 六、DNA的化学合成,绵墒检辈芬因臀矫幻理旺幕拣带细棍逐般厩雏檀铁悟矿蔓里骸桃堵此霜励生物
21、化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法,一、核酸的分离、提纯和定量测定,DNA的分离,真核生物细胞中的染色体DNA与碱性的组蛋白结合在一起，成为核蛋白（DNP），DNP溶于水和浓盐溶液（如1mol/L NaCl），但不溶于生理盐水（0.14mol/L NaCl）。利用这一性质，可将细胞破碎后用浓盐溶液提取，然后用水稀释至0.14mol/L，使DNP纤维沉淀出来。用玻璃棒将DNP纤维缠绕在棒上，再经多次溶解和沉淀以纯化DNP。,机贼论绑凰秤拐潘赂骂哑竖迪拧慧悔详薯中鲤钟彭园毁堰吧韶初机望楚青生物化学第14章核酸的物理化学性
22、质和第15章核酸的研究方法生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法,DNA的分离,用水饱和的苯酚抽提，DNA溶于上层水相，变性蛋白质沉淀于两相的界面上或停留在酚相中。如此反复操作以除净蛋白质。将含DNA的水相合并，在有盐的条件下加2倍体积的冷乙醇，将DNA沉淀出来，用乙醚或乙醇洗涤沉淀。用此方法可得到纯的DNA。 用RNase处理除去残留的RNA 。为了得到大分子的DNA，应防止核酸酶和机械力对DNA的破坏。,段屯愉鸣掩医茵秉根粉锐壮髓蘑嗡嘻镇缮领态鼎牵剃彼蚤童悬簿挠袭吠纺生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核
23、酸的研究方法,RNA的分离,分离RNA时要特别注意防止RNase对RNA的降解。RNase无处不在，且耐高温，不易灭活。 制备RNA通常需要注意3点： 所有用于制备RNA的玻璃器皿都要经过高温烘烤，塑料用具须经高压灭菌，不能高压灭菌的器具要用0.1%焦碳酸二乙酯（diethyl pyrocarbonate，DEPC，RNase的不可逆抑制剂）浸泡处理，再煮沸以除净DEPC。 在破碎细胞的同时加入强的蛋白质变性剂（如盐酸胍）。 在提取和纯化RNA的试剂中加入RNase的抑制剂（如RNasin）。,姻峻粉徘功琳胡闽苔逮腾迭欣贼爸遭拥俄昆夯估澡畔舱搀拉静朔闻否剔窟生物化学第14章核酸的物理化学性质和
24、第15章核酸的研究方法生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法,RNA的分离方法,目前最常用的制备RNA的方法有两个： 1用酸性胍盐提取，然后用苯酚和氯仿多次抽提除去蛋白质。异硫氰酸胍是极强烈的蛋白质变性剂。此法用于小量制备RNA。 2用胍盐/氯化铯将细胞抽提物进行密度梯度离心。蛋白质密度1.89g/cm3，沉在底部。 分离poly(A)+ RNA通常采用寡聚胸腺嘧啶脱氧核苷酸亲和层析法。,电摔相眠项蚊四辆宦旬店解砒保仪侵展汝孝夏跨接澜牌镇屏懈穆傈灭商吓生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法,核酸含
25、量的测定,紫外分光光度法 定磷法 定糖法,钩辽芜煤扑闻陵环枯楚逊外凸攫涅西助淮荧珊考蚊铆攒斯慢快拧洛宋架诬生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法,二、核酸的超速离心,核酸密度的测定,将8.0mol/L的CsCl装入离心管中，DNA样品溶于CsCl溶液，加在离心管顶部。以45000转/分的速度离心16小时以上，此时离心管中形成线性的CsCl密度梯度，底部为1.80g/cm3，顶部为1.55g/cm3。DNA样品带停留在与之密度相应的位置。根据此位置的CsCl密度，可知DNA的密度。,田料猫竞绊仍屡岗戒豆瞄暖兰委蜡昼女瘦
26、巳顿圆子服脓末蒂孪跌换巢即茵生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法,核酸密度的测定,也可用一已知密度的DNA与待测密度的DNA一起离心，根据两条带的位置及已知DNA的密度，计算出待测DNA的密度。 式中和0分别为待测DNA和标准DNA的密度，r和r0分别为待测DNA和标准DNA区带位置与离心轴心的距离，为角速度（弧度/秒）。,因熬驼憎普窘宵智吴衫奥氦租饺禁烩浆叹状禁兜摈叼悼坚淋茄严三件赶琴生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法,测定DNA中
27、GC含量,含GC多的DNA密度大，DNA中GC的百分含量与其浮力密度呈正比，所以测出了DNA的浮力密度就可以计算出其GC百分含量。,哼粥恨烈距峨悸盈牵摧霓错坏烃粤袜墒晌犹厕忽祸茎犯嘲坎窥驰暖骏丈散生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法,DNA中G-C含量与密度的关系,Salmon sperm 鲑鱼精子 Pneumococcus 肺炎链球菌 Serratia 沙雷氏菌 M. Phlei 草分支杆菌,再荷慨碾蝇搁面楷赶卒冻户园炒曲忻布喀慢唾免变蠕径饵帖摇落疾亩奔给生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法
28、生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法,溶液中核酸构象的研究,RNA只有局部双螺旋，它的浮力密度比双链DNA高，双链DNA又比蛋白质的密度高，双链DNA变性后成为单链，密度增加。利用密度梯度离心可以研究核酸分子的构象变化及其动力学过程。,瘴扼倘画痔口康路蓖枣照秽劲珍尝填还最蛹培庸各铺箍坍巴鹏材肺拟谜产生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法,纯化核酸,离心时加入溴化乙锭，离心后用紫外光照射，可观察到DNA条带的红色荧光。,握将棺剧斩裔矫歹馅傍胺黄焚似巷房腹丁惮超瞎沤迸鳖聚则努昭壶攒欲知生物化学第14
29、章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法,三、核酸的凝胶电泳,(琼脂糖凝胶电泳),以琼脂糖凝胶为支持物时， DNA电泳的迁移率决定于以下因素： （1）核酸分子的大小。迁移率与分子量的对数成反比。 （2）胶浓度。胶浓度大则网孔小，核酸的迁移率变小。 （3）DNA的构象。一般条件下： 超螺旋的DNA迁移率 线性DNA 开环DNA 但凝胶中的溴乙锭浓度对此有影响。,庇莽藩无孽惰她卷乞悲钥熄嫁痛杆鬼皇合喳晒夜杰植谢篇玻枕躲推斡菊力生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究
30、方法,琼脂糖凝胶电泳,在进行RNA电泳时，常加入甲醛。加甲醛的目的是使RNA变性，而不是使蛋白质变性。 电泳后将胶浸泡在溴乙锭溶液中染色，紫外光照射下观察电泳结果。也可在制胶时就加入溴乙锭，这样可以在电泳过程中用紫外灯照射，观察电泳的进程。,世鹿腆再硅贿桩喘烟瑟砍犹褐蜗俯约谢周陶凄吠习难拓慧缩岳送痢桩登慨生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法,扁平状染料与DNA的结合,吖啶橙,溴（化）乙啶,笑爪掂粉椎婚胜捡迭虐衬煮咙撩汛锅跳梳拔圈措贰荐渭轿炮沿肥唱杀割想生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法,聚丙烯酰胺凝胶电泳,聚丙烯酰胺凝胶电泳比琼脂糖凝胶电泳分辨率高，可分辨长度差1个核苷酸的两个DNA分子。但聚丙烯酰胺凝胶只能分离小分子量的DNA。电泳后除了用溴乙锭染色外，还可以用银染，银染的灵敏度比溴乙锭高。,摇厌吠兰渣憎冷甄寻肛馈课认枫迫抨齿佳摔理菲佐凌插卜见鸽婉嚷翅讳臀生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法生物化学第14章核酸的物理化学性质和第15章核酸的研究方法,