分解纤维素的微生物的分离.ppt

1、1.1.尿素转化成氨的反应方程式。尿素转化成氨的反应方程式。2.2.筛选微生物的原理。筛选微生物的原理。3.3.选择培养基的定义。选择培养基的定义。4.4.设置对照的目的以及方法。设置对照的目的以及方法。4.4.统计菌落数目的方法。统计菌落数目的方法。5.5.鉴定某细菌能够分解尿素的方法。鉴定某细菌能够分解尿素的方法。6.6.测定饮水中大肠杆菌的数目的而方测定饮水中大肠杆菌的数目的而方法。法。计数法计数法显微镜直接计数法、显微镜直接计数法、活菌计数法（间接计数）、活菌计数法（间接计数）、比浊法、比浊法、膜过滤法膜过滤法知识小结知识小结:划分标准划分标准培养基种类培养基种类特点特点用途用途物理性

2、质物理性质化学成分化学成分天然培养基天然培养基合成培养基合成培养基用途用途鉴别培养基鉴别培养基培养基的种类培养基的种类不加凝固剂不加凝固剂加凝固剂，如加凝固剂，如琼脂琼脂工业生产工业生产观察微生物的运动、观察微生物的运动、分类鉴定分类鉴定微生物分离、鉴定、微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌活菌计数、保藏菌种种含化学成分不明确的天然物含化学成分不明确的天然物质质工业生产工业生产培养基成分明确培养基成分明确分类、鉴定分类、鉴定在培养基中加入某种化学物在培养基中加入某种化学物质质,以抑制不需要的微生物以抑制不需要的微生物的生长的生长,促进所需要的微生促进所需要的微生物的生长物的生长培养、分离出特培养

3、分离出特定微生物定微生物在培养基中加入某种指示剂在培养基中加入某种指示剂或化学药品或化学药品,用以鉴别不同用以鉴别不同种类的微生物种类的微生物鉴别不同种类微鉴别不同种类微生物生物选择培养基选择培养基液体培养基液体培养基半固体培养基半固体培养基固体培养基固体培养基 纤维素是一种由葡萄糖首尾相连而纤维素是一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物，是含量最丰富的成的高分子化合物，是含量最丰富的多多糖类物质糖类物质。植物的根、茎、叶等器官都植物的根、茎、叶等器官都含有大量的纤维素。含有大量的纤维素。纤维素能被土壤中纤维素能被土壤中某些微生物分解利用，这是因为它们能某些微生物分解利用，这是因为它们能够产

4、生够产生纤维素酶纤维素酶。草食性动物是怎样消化食草食性动物是怎样消化食物中纤维素的？物中纤维素的？草草食性动物食性动物肠胃中的肠胃中的共生微生物共生微生物。除自然环境中存在分解纤维素的微生除自然环境中存在分解纤维素的微生物外，在物外，在草食性动物等的消化道内草食性动物等的消化道内，也共生有分解纤维素的微生物，其原也共生有分解纤维素的微生物，其原理也是产生纤维素酶而分解纤维素，理也是产生纤维素酶而分解纤维素，而而人没有分解纤维素的能力人没有分解纤维素的能力。学习目学习目标标:1 1、知道纤维素酶的、知道纤维素酶的种类种类及及作用作用2 2、初步掌握、初步掌握从土壤中分离出分解从土壤中分离出分解纤

5、纤维素维素的微生物的微生物的实验方法的实验方法 棉花棉花是自然界中纤维素含量最是自然界中纤维素含量最高的天然产物，木材、作物秸秆中高的天然产物，木材、作物秸秆中也含大量的纤维素。纤维素的分解也含大量的纤维素。纤维素的分解需要在需要在纤维素酶纤维素酶的催化作用下的催化作用下完成。完成。（一）纤维素与纤维素酶（一）纤维素与纤维素酶葡萄糖苷酶葡萄糖苷酶纤维素酶是一种纤维素酶是一种_，它包括，它包括_、_和和_，具具有催化分解纤维素的有催化分解纤维素的作用。作用。复合酶复合酶C C1 1酶酶C CX X酶酶纤维素纤维素 纤维二糖纤维二糖 葡萄糖葡萄糖C C1 1酶酶C CX X酶酶葡萄糖苷酶葡萄糖苷酶

6、1.2支支试试管管中，中，2.放入放入滤纸条滤纸条3.再再分分别别醋醋酸酸-醋酸钠醋酸钠缓冲缓冲液液11mL、10mL。4.在在加入加入10mL试试管中加入管中加入1mL纤维纤维素酶素酶5.在在摇摇床床上振上振荡反应荡反应1h，观察结果。，观察结果。纤维素酶活性的纤维素酶活性的测定实验：测定实验：在一支试管中添加纤维素酶，在一支试管中添加纤维素酶，另一支试管不添加纤维素酶；尽管另一支试管不添加纤维素酶；尽管醋酸醋酸钠缓冲液用量不同，但醋酸醋酸钠缓冲液用量不同，但都能都能维持相同的维持相同的pHpH。思考思考1实验分析：实验分析：P27P27的的小实验是如何构成对照的？小实验是如何构成对照的？下

7、列生物能分解纤维素的是（下列生物能分解纤维素的是（）人人 兔兔 牛牛 蘑菇蘑菇 纤维杆菌纤维杆菌A.B.C.D.C方法方法-选择培养基选择培养基以纤维素为唯一碳源以纤维素为唯一碳源-刚果红染色法刚果红染色法(鉴别培养基鉴别培养基)红色复合物红色复合物刚果红刚果红纤维素纤维素红色消失，红色消失，出现透明圈出现透明圈可根据是可根据是否产生否产生透透明圈明圈来筛来筛选纤维素选纤维素分解菌分解菌(三三)、实验设计、实验设计土壤土壤取样取样选择选择培养培养梯度梯度稀释稀释将样品涂将样品涂布到布到鉴别鉴别培养基培养基挑选挑选菌落菌落什么什么样的样的环境环境取样取样?选择培养基的选择培养基的特点特点?培养的

8、目的培养的目的?挑选什挑选什么样的么样的菌落菌落?鉴别培养鉴别培养基的特点基的特点?如何鉴别如何鉴别?本实验流程与课题本实验流程与课题2 2中实验流程有哪些异同中实验流程有哪些异同?前者直接稀释涂布在以尿素为唯一前者直接稀释涂布在以尿素为唯一N N源的源的选择培养基选择培养基上，上，直接分离得到目的菌落；后者先进行选择培养，使纤维直接分离得到目的菌落；后者先进行选择培养，使纤维素分解菌得到素分解菌得到增殖增殖后，再将菌液稀释涂布到后，再将菌液稀释涂布到鉴别鉴别培养基培养基1、纤维素分解菌选择培养纤维素分解菌选择培养基属于基属于_（固体、液（固体、液体）培养基，原因是体）培养基，原因是_【资料二

9、资料二】选择培养选择培养阅读资料二阅读资料二“选择培养基选择培养基”，回答以下几问题：，回答以下几问题：液体液体没有添加琼脂没有添加琼脂2、该培养基对微生物该培养基对微生物_（具有，不具有）选择作用。如（具有，不具有）选择作用。如果具有，其选择机制是果具有，其选择机制是_。以纤维素粉为唯一碳源，能分解以纤维素粉为唯一碳源，能分解纤维素的微生物可以大量繁殖纤维素的微生物可以大量繁殖 具有具有 若设置一个对照实验说明选择培若设置一个对照实验说明选择培养的作用，应控制的变量是将养的作用，应控制的变量是将_改为改为_。3、你能否设计一个对照实验，你能否设计一个对照实验，说明选择培养基的作用？说明选择培

10、养基的作用？葡萄糖葡萄糖纤维素粉纤维素粉思考思考2实验流程中实验流程中“选择培选择培养养”的目的是什么？的目的是什么？其目的是增加纤维素分其目的是增加纤维素分解菌的浓度，解菌的浓度，以确保能够从以确保能够从样品中分离到所需要的微生样品中分离到所需要的微生物。物。旁栏思考题旁栏思考题为什么选择培养能为什么选择培养能够够“浓缩浓缩”所需的微生物？所需的微生物？在选择培养的条件下，可以使在选择培养的条件下，可以使那些能够适应这种营养条件的微生那些能够适应这种营养条件的微生物得到迅速繁殖，而那些不适应这物得到迅速繁殖，而那些不适应这种营养条件的微生物的繁殖被抑制，种营养条件的微生物的繁殖被抑制，因此可

11、以起到因此可以起到“浓缩浓缩”的作用。的作用。培养基组成培养基组成提供的主要营养物质提供的主要营养物质CMC-Na 510g碳碳 源源酵母膏酵母膏 1g1g碳源、氮源、生长因子碳源、氮源、生长因子KH2PO4 0.25g无机盐无机盐土豆汁土豆汁 100mL100mL碳源、生长因子碳源、生长因子琼脂琼脂 15g15g凝固剂凝固剂上述物质溶解后，加蒸馏上述物质溶解后，加蒸馏水定容至水定容至1000mL1000mL氢元素、氧元素氢元素、氧元素鉴别鉴别纤维素分解菌的培养基纤维素分解菌的培养基(水溶性羧甲基纤维素钠水溶性羧甲基纤维素钠)【资料三资料三】刚果红染色法刚果红染色法方法一：方法一：先培养微生物

12、再加先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应入刚果红进行颜色反应方法二：方法二：在倒平板时就加入刚在倒平板时就加入刚果红果红方法一中方法一中NaClNaCl溶液的作用？溶液的作用？思思 考考：漂漂洗作用洗作用，洗去与纤维素结合，洗去与纤维素结合不牢的刚果红，以免出现的透明圈不牢的刚果红，以免出现的透明圈不够清晰。不够清晰。染色法染色法优点优点缺点缺点方法一方法一 方法二方法二 颜色反应基本颜色反应基本上是纤维素分上是纤维素分解菌的作用解菌的作用操操作繁琐，刚果红作繁琐，刚果红会使菌落之间发生会使菌落之间发生混杂混杂操作简便，操作简便，不存在菌落不存在菌落混杂问题混杂问题 产产生淀粉酶的微生生淀

13、粉酶的微生物也产生模糊透明物也产生模糊透明圈，有些微生物能圈，有些微生物能降解色素，形成明降解色素，形成明显的透明圈。显的透明圈。思考：这两种方法各有哪些优点与不足思考：这两种方法各有哪些优点与不足挑选产生透明圈的菌落挑选产生透明圈的菌落 挑取产生明显的透明圈的菌落，挑取产生明显的透明圈的菌落，一般即为分解纤维素的菌落。一般即为分解纤维素的菌落。接种到纤维素分解菌的选择培养接种到纤维素分解菌的选择培养基上，基上，在在30300 0C C 37370 0C C培养，可获得培养，可获得纯培养。纯培养。为了确定分离得到的是纤维素为了确定分离得到的是纤维素分解菌，还需要进行分解菌，还需要进行_实验，纤

14、维素酶的发酵方法有实验，纤维素酶的发酵方法有_ _ 发酵和发酵和_ _ 发酵。纤维发酵。纤维素酶测定方法是对纤维素酶分解滤素酶测定方法是对纤维素酶分解滤纸等纤维素所产生的纸等纤维素所产生的_ _ 含量含量进行定量测定。进行定量测定。发酵产纤维素酶发酵产纤维素酶 液体液体 固体固体 葡萄糖葡萄糖 分解分解纤维纤维素的素的微生微生物的物的分离分离纤维素酶纤维素酶种类、作用、催化活力种类、作用、催化活力刚果红染色刚果红染色筛选原理筛选原理实实验验设设计计土壤取样土壤取样选择培养选择培养涂布培养涂布培养纯化培养纯化培养前置染色法前置染色法后置染色法后置染色法富含纤维素土壤富含纤维素土壤增大分解菌含量增

15、大分解菌含量染色鉴别染色鉴别分离出分解菌分离出分解菌D1 1、下列材料中纤维素含量最高的、下列材料中纤维素含量最高的是是 ()()A A杨树杨树 B B小麦小麦 C C玉米玉米 D D棉花棉花C2 2、纤维素酶能够分解、纤维素酶能够分解 ()()A A纤维素的微生物纤维素的微生物 B B淀粉的微生物淀粉的微生物 C C纤维素纤维素 D D淀粉淀粉B3 3、刚果红能与哪项物质形成红色、刚果红能与哪项物质形成红色复合物复合物 ()()A A纤维二糖纤维二糖 B B纤维素纤维素 C C葡萄糖葡萄糖 D D麦芽糖麦芽糖B4、寻找纤维素分解菌应到、寻找纤维素分解菌应到()A湿润的环境中湿润的环境中 B富

16、含纤维素的环境中富含纤维素的环境中 C富含无机盐的环境中富含无机盐的环境中 D池塘中池塘中D5、纤维素分解菌的选择培养基有选、纤维素分解菌的选择培养基有选择作用，原因在于其含有择作用，原因在于其含有()ANaNO3 BKCl C酵母膏酵母膏 D纤维素粉纤维素粉A6、下列哪种生物能产生纤维素、下列哪种生物能产生纤维素酶酶()A纤维素分解菌纤维素分解菌 B牛牛 C羊羊 D兔兔C7、刚果红染色时，加入刚果红可在刚果红染色时，加入刚果红可在()制备培养基时制备培养基时 梯度稀释时梯度稀释时 倒平板时倒平板时 涂布时涂布时 培养基上长出菌落时培养基上长出菌落时 A B C DA8、两种刚果红染色法的结果是两种刚果红染色法的结果是()A均会出现透明圈均会出现透明圈 B均不会出现透明圈均不会出现透明圈 C方法一出现，方法二不出现方法一出现，方法二不出现 D方法一不出现，方法二出现方法一不出现，方法二出现