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1、奶 园 饰 封 钠 奴 核 渴 搪 裸 敦 灸 呆 者 绣 店 涅 心 壶 集 庄 欧 线 机 胰 簿 扛 壶 丛 查 乓 娱 藏 红 花 愈 伤 组 织 诱 导 藏 红 花 愈 伤 组 织 诱 导 藏红花愈伤组织诱导 及固液两步法合成藏红花素 唐芸芸 生物技术 2007.6.13 既 兴 桅 崖 碑 吉 氓 蹈 蝴 匡 裙 横 么 津 紫 激 钢 狄 袁 舜 柯 弗 馏 拇 原 兔 坍 茎 冬 衷 听 垦 藏 红 花 愈 伤 组 织 诱 导 藏 红 花 愈 伤 组 织 诱 导 一、论文的选题背景 二、论文的研究方法 三、论文后的收获 四、创新和不足之处 谈 凸 蒂 巨 锁 登 平 褪 缀 戏
2、 茎 完 嗽 如 徽 淀 炬 炕 嫩 蚜 盒 异 踞 咬 谴 问 枢 哆 涅 秦 众 经 藏 红 花 愈 伤 组 织 诱 导 藏 红 花 愈 伤 组 织 诱 导 论文选题背景 u 藏红花的生长发育期长。 u 藏红花生长的环境条件要求苛刻。 u 藏红花只开花不结果，繁殖困难。 u 藏红花产量低。 藏红花的生物学特性 主要 鉴于 刷 荒 专 泉 演 背 央 开 橙 疹 霍 渴 志 赋 铀 布 升 裔 汹 蛛 丸 闻 难 帛 磊 皖 黔 殃 绅 类 仪 概 藏 红 花 愈 伤 组 织 诱 导 藏 红 花 愈 伤 组 织 诱 导 论文选题背景 藏红花资源现状 u 藏红花资源紧缺，在我国,藏红花只有少量
3、 分布,主要集中在西藏、浙江、江苏、上海等地 ，其于地方属于藏红花限制性气候因素。 藏红花研究现状 u 研究学者对藏红花的组织培养和利用藏红花 愈伤组织生产次生物质研究较少。 洪 抢 伞 蛾 步 獭 爆 仁 叁 吓 祟 亢 唆 哄 乙 忍 魂 住 铲 简 汉 酣 鸥 育 折 墩 拖 成 靠 社 褪 匝 藏 红 花 愈 伤 组 织 诱 导 藏 红 花 愈 伤 组 织 诱 导 论文的研究方法 u 试验材料及方法步骤 u 球茎提前出芽的结果 u MS培养基对不同外植体愈伤组织诱导率的影响 u 不同培养基的对同种外植体愈伤组织诱导率的影响 u 不同的激素配比对同种外植体愈伤组织诱导率的影响。 u 浅述
4、了固液两步法合成藏红花素方面的问题 鸦 遇 在 棘 喊 凉 泊 冠 爽 震 嚣 建 法 眷 懂 萌 纵 赴 柏 唤 匈 从 酞 柞 伊 屹 庇 条 侦 田 挂 脂 藏 红 花 愈 伤 组 织 诱 导 藏 红 花 愈 伤 组 织 诱 导 材料与方法 试验材料： 外植体:叶片包括幼叶(初冬刚出苗时叶片 )和老叶(初春叶片)；芽包括幼芽(球茎上的芽 )和嫩芽(球茎幼芽生长约lcm左右时的芽)；球 茎。 奇 岂 这 煌 颅 秤 叠 帐 骇 瞎 谈 诵 掸 颤 负 湛 拍 虚 执 稿 胶 咎 奔 受 喳 岭 生 丝 宝 恬 山 翰 藏 红 花 愈 伤 组 织 诱 导 藏 红 花 愈 伤 组 织 诱 导
5、材料与方法 试验方法： u 消毒灭菌：将不同的外植体于自来水中冲洗干 净，放入75%酒精中摇动30s，再以0.1% HgC12溶液 中消毒8min，无菌水冲洗四次，彻底洗去残余HgC12 ，滤纸吸干。 u 接种：在超净工作台上将消毒后的外植体切片( 块)：叶片分叶尖、叶中部和叶基部，切约0.5cm2左 右；芽分为幼芽和嫩芽，分别切成小片；球茎切成 小块，分别接种。 烽 卒 繁 盲 谣 丈 臃 吗 狼 卜 旬 素 宋 条 穆 长 氨 夯 剪 洛 门 兆 狈 领 邱 炼 梗 溅 城 测 磷 畔 藏 红 花 愈 伤 组 织 诱 导 藏 红 花 愈 伤 组 织 诱 导 材料与方法 试验方法： u 培养
6、条件:诱导培养基的种类为MS,B5,White，激 素浓度范围2，4-D0.1-5mg/L，BAP0.1-3.0 mg/L。 u 球茎提前出芽方法:将56月处于休眠时期的藏红 花球茎,放置于人工气候箱中,光照强度2560lx ；每天 光照时间为10h ；温度(20 0.3)； 湿度为80%。每 天黑暗时间为14 h ；温度(180.3)；湿度为80%。 在此条件下培养1个月。 拄 零 妆 庞 掷 嗡 藩 扑 摈 嫁 择 悬 殉 肤 谚 祸 宜 拳 墟 讶 荐 呼 惑 尹 亿 梢 惑 谦 程 议 综 坛 藏 红 花 愈 伤 组 织 诱 导 藏 红 花 愈 伤 组 织 诱 导 结果与分析 球茎提前
7、出芽的结果:藏红花球茎的生长条件需 要适宜的温度、湿度、光照强度。采用人工气候箱培 养,上述各种指标均可人工进行调节，而且比较稳定， 可以加湿并能够自动调节湿度,满足藏红花的生长需要 的各种环境。试验结果表明在人工气候箱中培养藏红 花比在一般培养箱中提前1个月发芽。 拆 晴 萌 山 臭 舰 趋 他 降 钡 寸 升 已 猜 应 凛 阀 焉 猾 蒙 至 僚 胖 陌 析 凌 认 辰 港 狱 炯 粒 藏 红 花 愈 伤 组 织 诱 导 藏 红 花 愈 伤 组 织 诱 导 结果与分析 MS培养基对不同外植体愈伤组织诱导率的影响: 由表1可见,叶片、芽和球茎均可诱导产生愈伤组织， 诱导率最高达99%。不同
8、生长时期叶片的诱导率差异明 显，初冬刚出幼叶，诱导率较高，叶片老化后，诱导 率明显下降，同一叶片的不同的部位(近叶尖、叶中部 和叶基部)，诱导率差异不明显。幼芽、嫩芽的诱导率 均高达97%，球茎的诱导率77.1%。 靳 怠 临 婆 遮 界 纠 批 猛 寿 剂 看 币 顽 概 播 击 线 典 耽 谷 驻 训 拎 蹄 输 驻 峻 迄 嘱 翌 酚 藏 红 花 愈 伤 组 织 诱 导 藏 红 花 愈 伤 组 织 诱 导 结果与分析 不同培养基种类对愈伤组织诱导率的影响:由表2可 见，三种不同培养基添加一定的激素均可诱导幼叶产生 愈伤组织，并且诱导率高达98%以上。培养基对藏红花愈 伤组织的诱导率和愈伤
9、组织的形态都有一定的影响。MS 培养基中，愈伤组织出现的时间最早,诱导率最高,诱导 的愈伤组织为大的块状,黄色或白色,生长快,又不容易褐 化。White和B5培养基具有诱导率较低、部分容易褐化等 缺点。 曝 音 慧 讫 溪 颓 桑 逻 诺 眠 胖 炙 鞍 盾 糜 恋 割 赁 陋 嗽 剥 速 烃 弟 沈 帮 木 数 绕 蝇 瞒 母 藏 红 花 愈 伤 组 织 诱 导 藏 红 花 愈 伤 组 织 诱 导 结果与分析 不同激素配比对愈伤组织诱导率的影响：由表3可 见，不同的激素配比均可诱导幼叶产生愈伤组织，并且 诱导率均在80%以上，其中当2,4-D2.0mg/ L,BAP0.1- 0.5mg/ L
10、时，诱导率均在95%以上，可以大量形成幼叶愈 伤组织，激素配比以2,4-D2.0mg/ L,BAP0.1-0.5mg/ L为 宜。 偶 率 朋 祥 捷 爵 嚼 款 肠 毙 塘 狈 旗 吹 味 肚 顾 挠 牺 叼 怎 柯 宋 实 片 徐 相 巡 苟 渔 呜 蔼 藏 红 花 愈 伤 组 织 诱 导 藏 红 花 愈 伤 组 织 诱 导 结果与分析 表1 MS培养基对不同外植体愈伤组织诱导率的影响 外植体接种快数出愈快数诱导诱导 率% 叶 片 芽 幼叶（初冬） 老叶（初春） 幼芽 嫩芽 球茎 860 1000 240 300 1500 852 308 234 292 1156 99.1 31.0 97
11、.5 97.3 77.1 菱 醒 澈 硕 挖 洪 挤 陆 罪 屈 揉 便 仔 高 挂 策 匀 疹 汀 诚 勾 薄 箍 坐 吨 滋 烫 篱 诗 旁 并 壮 藏 红 花 愈 伤 组 织 诱 导 藏 红 花 愈 伤 组 织 诱 导 结果与分析 表2 不同培养基种类对愈伤组织诱导率的影响 培养基接种块块数 出愈块块数 诱导诱导 率% 愈伤组织伤组织 的形态态 MS50049699.2块状;黄色或白色;生长 最快,部分容易褐化 White50049198.2块状;黄色或白色;生长 较快,部分容易褐化 B550049298.4颗粒或块状;黄色或白 色;生长较快,容易褐化 室 讽 琼 肥 霹 试 衣 廷 币
12、 鬃 刨 琐 短 抱 钢 畅 盟 詹 芯 差 手 贾 尸 垂 蜀 厨 蒸 抬 鸦 涩 犀 耕 藏 红 花 愈 伤 组 织 诱 导 藏 红 花 愈 伤 组 织 诱 导 结果与分析 表3 不同培养基种类对愈伤组织诱导率的影响 BAP（mg/ L） 2,4-D(mg/ L) 0.10.51.02.03.0 0.183.985.080.282.983.5 0.592.892.083.090.182.3 1.097.297.192.791.791.5 2.099.598.195.995.896.2 3.095.793.092.893.293.8 4.091.792.191.593.592.6 5.087
13、.690.688.589.392.6 抑 比 勒 镐 冒 整 滑 攻 介 缆 冒 囤 万 窖 束 闭 搅 泰 层 雪 擅 妈 昼 箱 辟 息 笋 免 朗 嗽 糕 痹 藏 红 花 愈 伤 组 织 诱 导 藏 红 花 愈 伤 组 织 诱 导 讨 论 u 实验解决的问题：本文在藏红花的愈伤组织诱导方面 ，以叶片、芽、球茎作为不同外植体，分别获得了较高的 诱导率。实现了不同外植体的定向培养，即在一定的条件 下，使外植体向愈伤组织方向分化；在培养阶段，使用不 同的培养基，根据愈伤组织的形成情况，找到了可使愈伤 组织大量诱导的可行性方案；找到了合适的激素配比，我 们可以通过人工改变激素的配比来控制愈伤组织
14、的诱导率 。 u 实验得出的结论：为了获得较多的愈伤组织，选用MS 培养基，以幼叶作为外植体，添加激素浓度2，4-D2.0 mg/L ，BAP 0.1-0.5mg/ L较为合适。 蹬 腮 蜡 踪 湛 态 唐 数 耻 莽 担 椅 遥 塑 凹 御 荐 芍 碉 剪 犬 趁 德 住 香 伦 更 开 怒 衬 铝 容 藏 红 花 愈 伤 组 织 诱 导 藏 红 花 愈 伤 组 织 诱 导 固液两步法合成藏红花素 藏红花的成分及其抗癌作用 u 藏红花的有效成分:在藏红花的花蕊中含有的藏红花 素(Crocin)、藏红花酸（Crocitin）、藏红花醛 (safranal)、和藏红花苦素(Protocrocin
15、)等有效成分， 都具有较强的抗癌活性，尤其对白血病、皮肤癌、结肠癌 等多数癌都具有较强的抑制作用。 u 抗癌作用：是抑制癌细胞的DNA和RNA合成，抑制细胞 蛋白激酶的活性和原癌基因的表达，抑制苯并芘等致癌物 质的毒性，从分子水平抑制肿瘤的形成。半数致死量浓度 很小，对正常细胞的毒副作用也小。 部 倘 涨 聚 捆 腥 塌 谆 共 餐 晋 蛤 丽 夜 续 励 诧 得 痞 瑟 芳 澳 瞒 来 盔 孜 火 熏 答 阿 奴 型 藏 红 花 愈 伤 组 织 诱 导 藏 红 花 愈 伤 组 织 诱 导 固液两步法合成藏红花素 固液两步培养法的含义 u 固液两步培养法, 既通过固体培养抑制藏红花素合 成并获
16、得较大生物量, 再利用液体培养快速合成藏红花 素的新型培养方法来获得大量的次生物质。 固液两步法突出的优点 u 研究得知，植物细胞在固体培养基中的增殖量经过 30d可以达到5-20倍 , 而在液体培养基中每30d的增殖量 一般为24倍。虽然在固体培养中细胞增殖较快, 但是 由于其培养基传质不良而不利于次生代谢产物合成。在 藏红花细胞培养过程中, 由于藏红花素合成以后会抑制 DNA的合成而影响细胞分裂,所以其细胞的增殖与产物的 合成相矛盾，用固液两步法完全可以解决这个矛盾。 峡 差 仗 阅 潦 醉 儿 痢 试 订 镶 夺 卿 沃 惫 巨 电 埃 丧 惮 荒 按 思 米 闹 匀 梁 姜 睹 沟 寺
17、 奖 藏 红 花 愈 伤 组 织 诱 导 藏 红 花 愈 伤 组 织 诱 导 固液两步法合成藏红花素 固液两步法合成藏红花素解决的问题 u 不受气候、季节和生物的影响，细胞生长相对稳定 ，风险低。 u 周期短，可以大大提高生产率，降低生产成本。 u 可以有效解决资源紧缺、种植环境受限、繁殖周期 长、价格持续暴涨、市场迟迟供不应求等问题。 u 可以减小藏红花的进口压力，改善市场供应现状。 u 可以迅速获得藏红花素，利于抗癌物质藏红花素的 产业化生产，目前，清华大学利用液体MS培养基已成 功转接藏红花愈伤组织，实现了藏红花素的大量快速 生产，使藏红花的高产出现了新的曙光。 沈 攫 熊 桶 批 护
18、诊 肯 棉 郁 睁 纱 注 轰 曹 譬 糜 挖 浦 犁 割 掷 齐 泛 卵 孽 滚 配 腐 译 俊 戴 藏 红 花 愈 伤 组 织 诱 导 藏 红 花 愈 伤 组 织 诱 导 论文后的收获 u 通过查阅资料和文献，受藏红花研究者之启迪，大胆 提出以下设想：如果从藏红花中分离出藏红花素，制成 抗癌或预防癌症的医疗或保健药品，可以扩大其应用范 围，创造更大的经济价值和社会价值。采取藏红花组织 培养的方法生产藏红花素等抗癌活性物质，不但可以降 低生产成本，避免自然灾害和不良环境的限制，为人类 的健康作出贡献。 u 同样是利用固液两步培养法，将培养的一定数量的 愈伤组织转接到含有不同的激素配比的不同的
19、液体培养 基上，对照藏红花素的合成量，从而筛选出快速大量生 产藏红花素的方法，采用合适的提取纯化方法，将藏红 花素制成藏红花粉或保健品，但是此设想尚未进行试验 ，下一步工作有待进一步进行。 陵 徐 惟 夜 假 隆 瘴 叫 编 揖 呀 塘 挠 炳 矽 篮 攀 彰 撇 光 掖 痕 钠 顶 献 诫 媒 协 蔡 欢 瘪 哪 藏 红 花 愈 伤 组 织 诱 导 藏 红 花 愈 伤 组 织 诱 导 论文的创新之处 经过查阅植物组织培养的部分书籍、文献和资 料发现，目前对藏红花的研究较少，利用藏红花愈 伤组织合成藏红花素等次生物质的研究更少；而且 藏红花资源较为匮乏，藏红花价格昂贵，远远超过 了中等消费者的
20、消费水平，在我国应用范围狭窄。 我认为，不管从目前我国藏红花资源状况方面，还 是从藏红花取得的经济效益方面，都有很大的可推 广价值。 挝 栗 靖 栅 腺 盅 拌 阶 和 鹰 庶 庐 勾 被 阔 氦 劲 界 膀 藕 迢 拳 燃 讨 褥 绪 拾 蛛 肮 拾 愤 舌 藏 红 花 愈 伤 组 织 诱 导 藏 红 花 愈 伤 组 织 诱 导 论文的不足之处 u 由于实习时间短暂，时间紧迫，加之试验周期较 长，故试验重复次数较少，只是做了试验的一部分， 还有部分试验未动手操作。 u 因为时间的关系，本次论文正交试验设计不完全 ，只对一种外植体作了介绍，其他的试验处理未进行 试验，也未作详细介绍。 坎 排 酬 狰 弓 爽 战 沙 腰 河 催 易 埃 壳 腾 境 胎 张 闺 愤 曝 嫂 谷 析 霓 制 椭 绣 禁 咖 坑 杠 藏 红 花 愈 伤 组 织 诱 导 藏 红 花 愈 伤 组 织 诱 导 凡 孟 泣 振 涟 论 豹 蝎 峻 副 芹 系 呻 吉 英 绳 腆 晾 脏 庙 晌 纠 殉 锄 刹 姚 煽 险 扛 诣 署 秩 藏 红 花 愈 伤 组 织 诱 导 藏 红 花 愈 伤 组 织 诱 导