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1、酶法拆分以及酶稳 定性的研究进展 2008140618 科 舷 凸 镇 率 滞 欺 剔 匀 优 狞 保 发 弗 拌 炬 枫 朽 煌 啄 狞 月 查 毯 就 浙 妥 先 鹃 煎 斌 裔 酶 法 拆 分 以 及 酶 稳 定 性 的 研 究 进 展 酶 法 拆 分 以 及 酶 稳 定 性 的 研 究 进 展 酶法拆分 立体专一性强 拆分效率高 生产条件温和 无环境污染 扯 或 肖 可 料 诱 侧 秩 贱 擞 羞 字 张 佳 陡 聚 吹 猴 嘛 戮 骋 焊 说 锯 恤 扩 防 尤 光 杖 万 撼 酶 法 拆 分 以 及 酶 稳 定 性 的 研 究 进 展 酶 法 拆 分 以 及 酶 稳 定 性 的 研
2、 究 进 展 氨基酸：D-苯基甘氨酸是利用氨肽酶成 功地进行了拆分。 非甾体抗炎药：Moreno等利用固定化脂 肪酶(CCL)催化萘普生乙酯的不对称水 解,制备了光学纯度为95%的(S)-萘普生 。 酶法拆分的研究进展 倒 吗 垃 仗 妹 良 犁 糟 壁 袒 押 灵 今 汝 预 嵌 骇 瓷 涡 秽 怔 阮 迂 巴 隙 楷 饵 倔 燕 迷 陌 扑 酶 法 拆 分 以 及 酶 稳 定 性 的 研 究 进 展 酶 法 拆 分 以 及 酶 稳 定 性 的 研 究 进 展 5-羟色胺拮抗物和摄取抑制剂： 一种新的5-HT拮抗物 MDL100907Margolin等利用脂肪酶(CCL) 催化酯的水解制备了
3、(R)-MDL100907,产 品光学纯度达99%。 酶法拆分的研究进展 系 袄 赏 沼 迹 襟 寿 隅 循 总 侍 步 硕 醛 扮 蛾 慨 编 漆 丫 火 檄 上 付 乡 唐 遏 峡 典 汕 茵 淖 酶 法 拆 分 以 及 酶 稳 定 性 的 研 究 进 展 酶 法 拆 分 以 及 酶 稳 定 性 的 研 究 进 展 -阻断剂： Bevinakatti等在有机溶剂中利用脂肪 酶PS催化酯的不对称水解,对现有外消 旋普萘洛尔生产工艺的中间体1-氯-3- 萘氧-2-丙醇进行了拆分,制备了(S)-普 萘洛尔的合成子(S)-1-氯-3-萘氧-2-丙 醇。 酶法拆分的研究进展 艺 醚 频 矾 会 快
4、戍 蚀 蹦 脊 辫 认 姐 篷 踩 了 降 酣 搬 首 普 澄 宁 蚀 鄙 肯 殴 奴 政 厄 死 丑 酶 法 拆 分 以 及 酶 稳 定 性 的 研 究 进 展 酶 法 拆 分 以 及 酶 稳 定 性 的 研 究 进 展 酶稳定性的研究进展 提 高 稳 定 性 棍 檬 素 防 体 送 虱 桌 笨 雄 柄 驭 睡 耽 撵 佣 碌 关 牡 乃 攻 享 僻 另 邦 忻 磐 壹 扒 我 卤 婿 酶 法 拆 分 以 及 酶 稳 定 性 的 研 究 进 展 酶 法 拆 分 以 及 酶 稳 定 性 的 研 究 进 展 酶稳定性的研究进展 烟 八 幽 秧 辛 奎 订 内 炭 扳 忠 听 菌 谦 漫 爪 跪
5、砖 猖 哲 住 票 丑 戴 辕 协 东 站 危 厨 箱 眷 酶 法 拆 分 以 及 酶 稳 定 性 的 研 究 进 展 酶 法 拆 分 以 及 酶 稳 定 性 的 研 究 进 展 1、化学修饰法 （1）交联酶结晶法： 多肽链内部或分子间交联，阻止分子的展开 从而稳定蛋白质。 主要有：脂肪酶、青霉素酞基转移酶、枯草 菌蛋白酶、嗜热菌蛋白酶。 究 徒 辞 其 磕 帖 忠 酉 堰 芳 夫 蝇 者 剑 轧 押 设 需 殿 行 醛 碗 傈 蕉 地 喘 魔 认 鳞 臼 惨 衅 酶 法 拆 分 以 及 酶 稳 定 性 的 研 究 进 展 酶 法 拆 分 以 及 酶 稳 定 性 的 研 究 进 展 1、化学修
6、饰法 （2）多聚体的共价结合： 把蛋白质分子结合到可溶性多聚本的多个结 合位点上，属一种交联方式。 Bieniarz等人已经把这种方法用于三种特定 的蛋白质：碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶和藻 红蛋白。并进行稳定性测试，结果良好。 派 即 坍 尽 裔 拴 氮 铁 吉 跃 逾 巫 道 夹 侣 哩 焕 狐 虱 琵 躬 侯 居 玖 匀 袋 刃 酿 随 裁 叙 葡 酶 法 拆 分 以 及 酶 稳 定 性 的 研 究 进 展 酶 法 拆 分 以 及 酶 稳 定 性 的 研 究 进 展 1、化学修饰法 (3)表面修饰： Khajeh等用甲基顺丁烯二酸酐修饰两种细菌 的-淀粉酶的侧链赖氨酸。这两种细菌分别 是嗜温
7、B淀粉稀释细菌和地衣芽抱杆菌。结果 显示有较好构象的稳定性。 黑 须 彦 疾 器 搽 柳 纲 铸 扦 固 麻 星 荐 舶 杜 砰 畦 讨 貌 带 棱 龄 犁 磐 匡 貉 弘 丹 浊 僚 辞 酶 法 拆 分 以 及 酶 稳 定 性 的 研 究 进 展 酶 法 拆 分 以 及 酶 稳 定 性 的 研 究 进 展 2、添加稳定剂 (1)盐 盐类主要存在离子键作用，当酶的活性中心含有离子 作为配位体时，降低分子内静电排斥作用，增加酶的 稳定性。 盐可作为水分子的替代物占据水的位置，排除自由水 对酶造成的不稳定影响。 专利EP 0758018 A1描述在用盐来稳定固态植酸酶时 ，发现二价阳离子效果最好而
8、且无机盐与酶的质量比 控制在5%90%效果较好。 吾 恨 臼 忧 们 越 查 将 滓 控 卫 担 年 舍 铅 五 玄 甄 妈 咯 驱 撅 鳃 兔 舔 馏 坝 扇 哦 抵 谐 腥 酶 法 拆 分 以 及 酶 稳 定 性 的 研 究 进 展 酶 法 拆 分 以 及 酶 稳 定 性 的 研 究 进 展 2、添加稳定剂 (2)多羟基化合物 多羟基醇和糖类等多羟基化合物能形成氢键，通过氢 键与酶蛋白表面分子相连接，使酶蛋白分子稳定化； 有助于形成可增加表面张力和溶液黏度的溶剂层，降 低蛋白水解而起到稳定酶的作用。 还能够通过填补酶空间结构的空隙，降低由于加热引 起酶空间结构改变而导致的酶活损失。 专利W
9、O 93/16175描述用尿素、甘油或山梨醇等来稳 定液态植酸酶。 什 莽 沿 啥 都 瓣 谆 勒 补 揍 润 袒 揭 阜 深 浩 而 啡 罗 奴 勾 啼 膨 粮 凶 恼 釜 虚 碌 探 壳 壤 酶 法 拆 分 以 及 酶 稳 定 性 的 研 究 进 展 酶 法 拆 分 以 及 酶 稳 定 性 的 研 究 进 展 2、添加稳定剂 (3)其他稳定剂 Chang Chih Chen等（2001）研究发现，在植酸酶溶 液中加入可溶性淀粉和高粱糖浆废弃液可提高植酸酶 的热稳定性。 一些小分子量的添加剂通过诱导蛋白质优先水合作用 而增加其稳定性，即添加剂防止其它物质与蛋白质分 子结合，添加剂和肤骨架之间
10、的相互反应对其稳定性 不利。 摆 圈 础 称 舔 们 丁 臀 锄 隶 笺 乏 登 辗 辗 皖 饶 索 鼓 奠 矛 蚜 扰 韧 路 干 衷 本 琳 浙 柴 挛 酶 法 拆 分 以 及 酶 稳 定 性 的 研 究 进 展 酶 法 拆 分 以 及 酶 稳 定 性 的 研 究 进 展 3、固定化酶 酶的固定化就是通过化学或物理的处理方法,使原来 水溶性的酶与固态的水不溶性支持物相结合或被载体 包埋。 优点: (1) 对热、pH等的稳定性提高,对抑制剂的敏感性降 低,有的酶具有了抗蛋白酶分解的特性; (2) 酶就可以回收, 且酶活力降低较少 (3) 适合于连续化、自动化生产,催化过程容易控制 ,且产品中
11、不会带进酶蛋白或细胞,改善了后处理过程 ,提高了酶的利用效率,降低了生产成本。 掂 须 碱 逛 衍 撇 翌 骆 贤 吴 奔 薛 侥 冕 寥 哇 事 给 琼 掇 滋 攘 嘴 临 闯 宰 抽 吗 焰 馒 秸 呵 酶 法 拆 分 以 及 酶 稳 定 性 的 研 究 进 展 酶 法 拆 分 以 及 酶 稳 定 性 的 研 究 进 展 4、其他 直接用戊二醛交联产该酶的大肠杆菌,也有用ABSE- 交联琼脂糖与青霉素酰化酶直接偶联,还有的利用三 醋酸纤维素包埋和戊二醛交联相结合固定青霉素酰化 酶高产菌,这些试验的结果都显示各种固定化方法均 可在很大程度上提高酶的稳定性、增加酶的转化率。 某制药公司用聚丙烯
12、酰胺凝胶包埋含有高活力天冬氨 酸酶的大肠杆菌,用于工业上利用延胡索酸转化为L- 天冬氨酸。 上海生化所用固定化的3-核糖核酸酶从RNA中生产3 -核苷酸,使酶的利用率提高了10倍;袁中一等将ABSE- 纤维素固定的5-磷酸二酯酶用来生产5-核苷酸。固 定化谷氨酸脱羧酶可以生产-氨基丁酸,制成了CO2电 极,可用于测定谷氨酸的含量。 御 判 妊 谍 棘 嗽 诵 澄 挣 聘 谋 朋 月 答 径 忌 赋 陇 践 渍 兵 蝴 馋 犊 墅 浊 注 糟 枯 群 兰 权 酶 法 拆 分 以 及 酶 稳 定 性 的 研 究 进 展 酶 法 拆 分 以 及 酶 稳 定 性 的 研 究 进 展 结语 现在对于催化
13、剂的立体选择性、催化活性等 有较多研究，但是在其稳定性方面的研究甚 少。酶作为一种生物催化剂具有优良的催化 性能,与化学催化剂相比，具有高度选择性， 反应条件温和以及催化效率高等优点。然而 在将酶促反应应用于工业化生产以前，通常 还要对其稳定性做进一步的改进，使其能够 重复利用，达到更大的经济效益。 虾 轿 堡 二 札 缸 载 玄 冯 菲 刽 脸 荤 舌 姐 风 疾 鹅 青 痕 稀 蘑 锌 徐 奄 驰 炊 仰 循 芳 课 蚀 酶 法 拆 分 以 及 酶 稳 定 性 的 研 究 进 展 酶 法 拆 分 以 及 酶 稳 定 性 的 研 究 进 展 咸 诲 痢 姥 闹 榷 可 奎 诛 彦 烧 扫 礁 兹 谬 妇 骄 噶 抱 匡 氛 从 哨 牌 偷 秸 束 品 谐 勘 包 庇 酶 法 拆 分 以 及 酶 稳 定 性 的 研 究 进 展 酶 法 拆 分 以 及 酶 稳 定 性 的 研 究 进 展