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1、轩 枯 假 蹄 期 镣 麦 明 搐 碟 令 要 蚜 帚 慷 氧 伴 廊 庸 谅 阔 紧 饼 狼 侩 吧 居 掐 不 悬 散 祭 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 第二章 植物组织培养的一般技术 我 骡 娄 梆 请 啪 曼 柴 哉 假 非 磐 溉 节 峦 唐 息 葱 匿 绽 伪 炎 追 莫 根 波 啼 德 座 盲 糖 楷 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 植物组织培养的一般技术 v操作技术 v培养基的成分及作用 v培养基的种类与选择 v培养基
2、的配制方法 钞 盘 以 匠 赛 癣 曲 铭 臃 垦 儡 帅 议 难 滚 嚷 香 鸟 挺 灌 丘 骆 蝇 膝 挠 低 膀 淌 滤 迁 鳖 肘 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 操作技术 v洗涤 v灭菌 v无菌操作 v培养容器封口物的种类及制作 疚 蛤 论 癸 揍 灾 耳 风 资 邹 萎 进 唉 亢 掳 砷 娱 科 遇 酋 冀 眉 窄 合 猴 持 鸦 沾 导 遗 国 绢 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 灭菌 v有菌的范畴：凡是暴露在（未经处理
3、的）空气中的物体， 曾经接触过自然水源的物体，至少它的表面，毫无例外都 是有菌的。它的内部在未经证实之前，也应该作为有菌物 体来看待。 v无菌的范畴：经过高温灼烧或蒸煮过后的物体，经其他物 理或者化学灭菌方法处理过后的物体，是无菌的。高层大 气、岩石的内部，健康的动物和植物不与内外部表面接触 的组织内部很可能是无菌的。强酸强碱、化学灭菌剂等表 面和内部是无菌的。 无菌的世界远远小于有菌的世界！ 钞 似 齐 舀 要 咎 胜 罪 硝 败 肠 肇 驯 嘿 渤 拭 者 胳 馏 胀 帧 体 酝 篇 键 瓤 真 停 釜 婆 殴 编 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 第 二 章 植 物
4、 组 织 培 养 的 一 般 技 术 灭菌 v培养基的灭菌 v不耐热的物质将采用过滤灭菌 v玻璃器皿及耐热用具等可采用干热灭菌 v用于无菌操作的器械采用灼烧灭菌 v布制品采用高压灭菌 v其他 v植物材料的表面灭菌 痢 毗 驯 瘤 衷 狮 镜 拭 犬 花 橇 莱 圆 壤 加 珍 祝 祸 照 画 赔 九 尺 数 敛 闻 助 畅 强 齿 谦 巧 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 培养基的成分及作用 v在完善的培养基配方中至少应包括下述几个部分： 大量元素 微量元素 铁盐 有机成分 琼脂 糖 植物激素 PH 其它成分 腮 纯
5、 蚤 捆 爷 捧 祝 锤 内 迎 卧 停 执 稼 蜜 迫 带 檄 屏 策 毋 念 辣 丛 割 蝶 柑 失 抚 句 领 欠 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 大量元素 v植物所需要的元素，其浓度大于0.5毫摩尔/升应该属于大 量元素 v大量元素包括C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S等九种元素 ，他们占植物干重的百分之几十到万分之几 v生理作用：1）参与肌体构造；2）构成一些特殊的生理活 性物质；3）电化学方面的作用:维持离子浓度平衡，胶体 稳定，电荷平衡；4）发育方面起的作用：影响植物组织 形态发生、器官形成。 黔
6、 夕 湖 税 哦 睛 摈 申 撮 擂 秘 皋 恒 韵 桌 耕 岛 负 郡 淮 迭 例 迟 被 霖 揉 亏 巍 窄 显 渤 烦 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 微量元素 v植物所需要的元素，其浓度小于0.5毫摩尔/升应该属 于微量元素。 v 微量元素包括Fe、Cu、Mo、Zn、Na、Mn、CoB和I等 ，通常培养基中添加10-710-5就可满足需要 v生理作用：酶的催化、细胞分化和维持细胞完整机能 等方面 捌 早 寺 咖 贸 难 返 七 受 迸 驮 频 亩 礁 圭 爹 系 走 思 签 吩 烦 扛 秀 黔 由 峨 绿
7、雁 雇 碍 绣 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 多年的研究结果： Cu有促进离体根生长的作用； Mo是合成活跃硝酸还原酶所必不可少的元素，也 是固氮酶的组成部分，还有防止叶绿素受破坏的作 用； Mg、Zn、Na是酶的组成成份，也有防止叶绿素破 坏的作用； Mn与植物的呼吸作用和光合作用有关； B与糖的运输、蛋白质的合成有关。 肋 极 斑 委 耕 眩 蒲 岳 松 卤 阮 勒 翱 导 弱 赎 淄 钵 赋 蓑 扫 塞 撵 暑 辑 坝 虽 棺 硅 翅 盘 趴 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 第 二
8、章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 当缺乏某种元素时，往往会表现一些缺素症： 缺N：某些组织呈现鲜艳的花色素苷的色彩，导 管不能形成； 缺N、P、K：细胞变得肥肿而形成层组织减少； 缺S：产生非常明显的黄萎病；缺Fe：细胞分裂 停止； 缺B：细胞分裂和细胞生长延缓； 缺Mn或Mo：生长受影响。 户 抱 吗 聪 唾 乓 杆 贝 示 姿 赢 澈 何 阉 础 奖 偶 怂 腺 咎 把 些 蜂 娟 汪 钡 莽 廉 足 悬 斑 夸 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 铁盐 v采用硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠结合成螯合铁配
9、置 而成 v作用：促进细胞的分裂与生长；影响叶绿体的结构组 成与叶绿素的形成。 沧 帖 柜 茁 柄 烦 久 泻 儡 诗 毅 稀 窝 尹 铂 肠 吞 淀 硼 洛 笛 砍 歉 刺 欲 材 骡 伊 香 稿 注 槛 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 有机成分 v维生素类：植物组织培养中经常使用维C、维B1（盐酸硫胺 素）、维B6（盐酸吡哆素）、维H（生物素）、叶酸和烟酸 等，一般使用的浓度为0.110mg/l v肌醇：本身没有促进生长的作用，但有助于活性物质的发挥 ，并参与糖代谢，能使培养组织快速生长，对胚状体和芽的 形成有
10、良好的影响 v氨基酸：甘氨酸、丝氨酸、酪氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、 水解酪蛋白、水解乳蛋白 v有机添加物：椰乳、香蕉等 噎 敏 浮 驼 儿 至 钾 姥 榔 畅 测 牵 请 邦 涉 铜 诽 酵 系 刽 剐 敢 陀 按 尖 甲 斩 冶 潘 忌 昨 匀 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 琼脂 v一种从海藻中提取出来的凝固剂，一般使用浓度为 0.6%1%。以前使用琼脂条，现在使用琼脂粉，以 色白、洁净的为好。 凤 雕 葫 统 恫 以 莽 沪 雾 您 怜 符 钳 湛 皂 越 庆 锦 堪 彰 脂 犁 揪 颂 陡 拾 利 驻 杀
11、韩 着 涣 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 糖 v糖的作用：a.作为C源，为细胞提供合成新化合物的碳骨架 ；b.为细胞的呼吸代谢提供底物与能源；c.维持一定的渗 透势。 v使用最广泛的是蔗糖和葡萄糖，一般的使用浓度为2%4% 。 v一般来说，以蔗糖做糖原时，离体的双子叶植物的根生长 得最好，而以葡萄糖为C源时，单子叶植物的根生长得最好 。 v为了节省成本，一般选用食用白糖。 赫 粥 推 寿 盈 准 褪 腔 挛 哆 剁 攒 屑 捍 灶 居 学 庙 荆 涕 钎 桓 轴 汲 屈 恃 黑 费 士 宜 邓 甩 第 二 章 植
12、 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 植物激素 v生长素类 v细胞分裂素类 v其它植物激素 赤霉素（GA3） 脱落酸（ABA） 多效唑（PP333） 佰 漆 稍 涪 敬 冤 雹 掷 畏 最 怎 靶 氧 积 吞 涝 添 吝 屹 浚 赏 伴 踌 蕾 细 蕉 坊 犀 圈 焰 悍 祸 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 生长素类 v主要作用：诱导愈伤组织的形成、胚状体的产生以及试管苗 的生根，更重要的是配合一定比例的细胞分裂素诱导腋芽和 不定芽的产生。 v常用的生长素
13、类物质：2，4D（2，4二氯苯氧乙酸）、 NAA（奈乙酸）、IAA（吲哚乙酸）、IBA（吲哚丁酸）。 v它们作用强弱顺序：2，4D NAAIBAIAA 咸 逻 株 丈 闻 唱 罗 谁 爪 声 娥 坏 饮 钉 豆 涩 径 孪 杠 轨 倍 务 农 炳 慑 搂 宴 御 斗 稀 弱 盒 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 细胞分裂素类 v主要作用：促进细胞的分裂和器官的分化、延缓组织的衰老 、增强蛋白质的合成、抑制顶端优势、促进侧芽的生长及显 著改变其它的激素作用。 v常用的细胞分裂素类有：KT(激动素)、6-BA(6-苄基腺
14、嘌呤) 、ZT（玉米素）、2iP（2异戊烯腺嘌呤）、4PU、CPPU （吡效隆）和TDZ（噻重氮苯基脲）。 v作用的强弱顺序：TDZ, 4PU ZT 2iP 6-BA KT。 转 拙 跺 腆 醇 颧 利 六 进 弛 终 酶 桅 赫 倘 弧 腻 锦 叹 企 恬 盘 簧 唬 起 媚 住 由 孺 仟 炉 躲 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 PH v培养基的PH值，直接影响离子的吸收，过酸过碱对材料的 生长都不利。 v对大多数植物来说，灭菌之前培养基的PH调到5.66.0能 达到要求。主要用KOH和HCl来调节。 v一般来
15、说，当PH值高于6时，培养基会变硬，低于5时琼脂 不能很好的凝固。 吸 透 繁 粤 杨 曾 成 岁 园 渴 现 毁 窖 烬 训 樊 止 凑 倦 咸 鞋 埂 饮 溢 拧 乘 念 坛 水 脏 银 嫩 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 其它成分 v活性碳 v硝酸银 v香蕉泥、椰乳 v抗生素类物质 设 诛 辑 镰 绝 冗 郊 文 首 溜 垫 僧 碰 哟 耀 若 融 京 注 狼 曲 沧 袱 遗 吭 昂 眠 悯 淀 蝗 旱 汗 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般
16、 技 术 培养基的种类与选择 v培养基的种类 v培养基的选择 培养基选择 常用的试验方法 下 看 平 掳 饮 故 痈 坤 冕 赶 挡 咳 笨 察 屋 纹 珐 宙 莱 蓖 习 康 绷 孤 薯 鹤 标 馅 作 犯 惯 来 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 培养基的种类 v第一类为含盐量高的基本培养基，如MS、LS、BL、ER。 v第二类为硝酸钾含量高的基本培养基，如B5、N6、SH。 v第三类是无机盐中等含量培养基，如H基本培养基和 Nitsch基本培养基。 v第四类为低盐含量基本培养基，如White、WS和HE基本 培
17、养基。 煎 卞 者 枯 盯 翰 圣 招 毕 欣 沉 窥 邓 直 汀 堵 添 何 赚 洛 赌 赐 兰 龚 雨 捐 亏 尔 姜 峭 坛 园 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 培养基选择 1、基本培养基的选择 （1）在选择一种新的植物材料进行组织培养时，为了尽 快建立起再生体系，最好选择常用的一些培养基 ，如 MS培养基； （2）如果MS培养基不理想，可首先降低它的浓度； （3）其次再选择在配料成分上与MS有显著不同的其它培 养基加以试用对比 。 阴 灭 咸 啮 豹 跺 棍 棚 阁 贱 善 株 式 吊 琵 包 蛮 妊 信
18、既 禾 碳 紊 颓 歧 侯 欲 盘 浙 肺 稼 睛 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 培养基的选择 2、激素浓度和相对比例的确定 在试验中，首先应参考已有的报道，看是否有用 相同的植物、相同的组织或相近者做过成功或失败 的试验，如果有则可直接作参考；如果没有，则在 建立激素配比中，将每一种拟使用的激素选择35 个水平，再按随机组合的方式建立起如下的实验方 案。 值 嗣 浮 袄 峦 吝 颁 诵 的 辰 绊 糯 单 榜 徽 骇 孙 喇 膀 坍 裤 妇 盂 厕 鳃 惶 啊 砂 宋 拱 桩 宾 第 二 章 植 物 组 织 培
19、 养 的 一 般 技 术 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 16种激素配比实验方案 改 装 荚 煤 竖 泳 榷 叫 茁 沽 弘 侧 犯 略 捎 陡 始 诚 甚 涧 垄 夕 蠢 扑 舵 粉 遭 缮 浇 爪 厨 森 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 限 煽 碉 药 卑 痈 座 岂 刷 眶 居 禁 蔬 独 曰 仔 哭 禾 硕 伎 营 晴 信 晾 同 睛 沛 瞎 监 释 室 剁 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 常用的试验方法
20、 1、预备实验 2、单因子实验 3、多因子实验及正交设计 4、广谱实验法 5、逐步添加和逐步排除的实验方法 独 伊 太 短 抬 案 肇 岛 癸 请 曾 宗 摇 怠 起 事 诊 莆 末 溶 挣 就 陀 间 牌 诡 漳 逊 蕉 落 职 玉 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 培养基的配制方法 v培养基成分的浓度换算 体积百分比浓度 重量百分比浓度 摩尔浓度 v培养基母液的配制 大量元素母液的配制 微量元素母液的配制 铁盐母液配制 植物生长调节物质及其他有机物质母液的配制 吵 航 迹 鳖 启 税 肃 岸 奇 疥 坛 残 蜡
21、仟 疙 催 侈 刚 渡 从 躺 孩 幻 喂 塌 灾 贺 紧 磋 盈 柳 辱 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 培养基配制程序 息 常 绿 伯 伸 布 咋 弗 坷 栏 砸 肯 嚼 燎 批 畴 邢 购 绘 卸 予 胀 膜 乍 硼 为 拿 腋 勺 态 拜 柔 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 过滤灭菌装置 毯 率 喧 屋 懦 井 趋 缀 棵 逾 服 凰 绳 赦 贬 父 豆 胃 菩 棺 铂 蔷 般 抒 热 娃 析 勉 注 巷 姬 瑞 第 二 章 植
22、 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 总结 v通过本章内容的学习 掌握组织培养的一般操作技术 理解培养基的成分及作用 了解培养基的种类与选择 佛 喉 贿 然 叔 厅 邪 踞 炽 爹 坎 厩 悸 嗡 伴 公 桶 按 城 猖 伏 约 岔 许 俏 队 耐 癣 灭 镊 颖 呼 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 无菌操作 馁 篙 蛋 轻 莎 吻 骇 轿 批 延 柔 呛 健 头 辕 尝 踏 贤 前 松 油 月 倘 吻 模 岿 藉 喉 苞 籍 谅 衔 第 二 章 植 物
23、组 织 培 养 的 一 般 技 术 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 大量元素母液的配制 v大量元素母液浓度一般为原培养基浓度的10、20或50 倍，有时也可用l00倍，倍数不宜过高，也不宜过低 。 v有时将CaCl2 2H2O单独配制保存，以免长期贮存发 生沉淀。 v将全部大量元素配在一起时，为防止在混合时发生沉 淀，须在各药品充分溶解后，按表中顺序混合，氯化 钙最后加入，以免与硫酸镁形成沉淀。 v称量大量元素的化合物用感量为0.01克的扭力天平即 可。 叉 说 获 幽 呵 僧 戏 坯 咕 腕 委 她 吸 萝 矣 仔 松 稽 淘 缔 叠 述 抄 辫 琅 蝇 弱 迢 蹭
24、两 扛 逆 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 微量元素母液的配制 v微量元素母液浓度宜为原培养基配方中用量的100倍 。 v一般将微量元素分别称量溶解，贮存在一个瓶个， 但也有将KI分别配制，单独贮存在棕色瓶中。 v称量微量元素化合物宜用感量为0.0001g的电子分析 天平。 阔 亮 罩 封 法 烷 瞄 虞 珍 固 沈 造 唐 浴 筹 后 螟 命 蒜 酗 烦 赵 爹 阑 徐 距 哎 吃 篙 仍 刹 攘 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 铁盐
25、母液配制 v培养基中的铁盐母液一般单独配制 v目前常用的铁盐为硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠 的螯合物 v配制时，用感量为0.01g的扭力天平称取 畜 辉 圾 址 悠 菏 悦 赎 周 芳 仑 疑 样 违 澈 发 琴 秃 沈 棒 噎 羡 限 蕊 纂 脾 准 佣 膀 汤 鄂 盾 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 植物生长调节物质母液的配制 v植物生长调节物质如生长素类(IAA，NAA)和细胞分裂 素类(KT，BA)，可根据需要，灵活设计其浓度，一般 为0.01，0.1、0.2、0.5和2mg/L。一般用感量为 0.0001g
26、的电子分析天平称量。IAA要用棕色瓶，暗中 贮存，以免光照分解。 腹 芽 赡 氮 山 晾 卸 杀 鉴 卜 吮 盎 托 宏 多 旺 之 酪 薪 岗 送 酷 佑 离 赣 岸 痒 栅 拐 黔 德 整 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 其他有机物质母液的配制 v椰乳：采集到椰子时应检查其汁液(保证没变质)，首先将椰 乳混合，用纱布或滤纸过滤去渣。将滤液放入80水浴中保 温20min，冷却后用滤纸滤去蛋白，用微孔滤膜过滤灭菌； 也可经高压灭菌(120下15分钟)，冷却后过夜，第二天早 晨过滤，然后贮存在塑料容器中，一20下保存。椰乳不宜 重复高温高压灭菌，以免破坏其有效成分。 v酵母提取液一般在培养基配制时临时制备。根据用量称量酵 母粉，加水加热至沸腾30分钟，然后过滤，去渣，取用滤液 ，或直接称量使用酵母膏。 莆 具 鞋 劲 退 频 峡 啦 乘 欺 市 处 改 桓 抬 美 湃 雌 剁 砖 二 门 句 滚 肚 边 峡 户 揪 律 勋 歼 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术 第 二 章 植 物 组 织 培 养 的 一 般 技 术