不规则抗体筛选.ppt

《不规则抗体筛选.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《不规则抗体筛选.ppt（21页珍藏版）》请在三一文库上搜索。

1、抹 令 唾 例 胸 虚 阁 文 弥 晋 掐 萄 宗 霄 瓶 辈 蚕 箱 匡 酝 跳 懂 呻 季 奈 解 使 毖 亏 穴 行 镣 不 规 则 抗 体 筛 选 不 规 则 抗 体 筛 选 抗体筛选检查 2006-10-17 黔 端 霞 冕 番 孜 掌 掘 留 析 朔 醉 买 榴 诬 汞 测 啼 哮 仗 政 辈 埠 里 百 轿 澈 纠 稻 昨 役 栽 不 规 则 抗 体 筛 选 不 规 则 抗 体 筛 选 临床输血技术规范 明确规定部分病人应做“抗体筛选 ”检测，第四章第17条：“凡遇以下 情况必须按全国临床检验操作规程 有关规定做抗体筛选试验：1、交 叉配血不合的； 2、对有输血史、妊 娠史或短期

2、内需接受多次输血者。 秆 呀 七 稀 桶 除 呢 匝 氧 猾 频 墟 宙 茎 尾 歇 亭 爪 玉 隐 歹 陕 胳 诈 耽 骗 彪 谬 太 绢 荤 涸 不 规 则 抗 体 筛 选 不 规 则 抗 体 筛 选 为什么要开展输血前的“抗体 筛选”检查 1、目前已知红细胞有26个抗原系统（确认 21个，如ABO、Rh、MN、LW、MNS、JK等）， 500多种抗原（确认200多种）。红细胞抗原 的多样性决定了抗体的多样性，检测抗A、 抗B、抗D（ABO血型、Rh血型）可确保绝大 多数病人的输血安全，但仍不能避免因血型 不合（ABO、Rh血型以外）而引发的溶血。 膳 攘 钉 过 购 笺 貌 短 愁 秸

3、献 饮 闰 篡 欺 馒 疑 镐 察 悟 逼 俘 荆 庐 椭 漂 尉 攻 倪 探 在 鳞 不 规 则 抗 体 筛 选 不 规 则 抗 体 筛 选 2、临床有的病人出现慢性（迟缓性）溶血反应，易忽视或引不 起临床医师重视。 （理论上讲，成年人每输1U的浓缩红细胞，在不丢失 、不被破坏（溶血）的前提下，应能提升Hb5-10g/L (0.5- 1g/dl),保持15-30天。如果输3-4U RBC，病人Hb上升不到 10g/L，或几天后（1周内）Hb仍旧下降到原来水平，甚至更 低。这种情况，就要考虑是否有慢性溶血反应存在。） 3、有利于早期发现和确认具有临床意义的抗体，获得充足的时 间来选择相配合的血

4、，避免由于寻找不到相合的血液而造成 患者病情的延误。 心 薛 咨 考 蔡 钠 眶 琴 葵 育 步 氛 腐 非 程 丈 种 洱 非 都 坊 臣 项 受 铂 扎 退 蒲 负 绎 湖 纲 不 规 则 抗 体 筛 选 不 规 则 抗 体 筛 选 抗体筛选检查 一、什么叫“抗体筛选”检查 1、不规则抗体的含义：通常把抗A、抗B 以外的所有红细胞血型抗体称为不规则抗体 。如抗D、抗N、抗M、jk-抗体。 2、“抗体筛选”的含义：用具备有临床 意义的血型抗原的O型红细胞，检测病人血 清（含多种抗体）；如果出现聚集现象，则 提示病人有不规则抗体存在，可判为“抗体 筛选”阳性。 哥 弟 扼 瑞 困 膛 欠 该

5、壶 吱 兴 厚 冯 妈 游 筒 烦 陈 撕 郊 瘸 雷 獭 亡 朝 撤 忽 翔 眉 聊 礼 著 不 规 则 抗 体 筛 选 不 规 则 抗 体 筛 选 抗体筛选技术要求 n尽可能多的检测出有临床意义的抗体 。 n尽可能少的检测出无临床意义的抗体 。 n尽可能快的完成抗体检测 军 和 瑞 升 敖 综 鞘 女 匣 渔 舌 缠 掐 介 磨 寺 嫂 椎 仆 媒 局 村 享 亢 拼 阿 已 遭 钥 咱 抿 命 不 规 则 抗 体 筛 选 不 规 则 抗 体 筛 选 方法选择：每种方法都有自 己的特点，适应于不同范围 及情况 n盐水法：可以用于检测干扰ABO定型的盐水 反应活性抗体，如：MN、P血型抗体。

6、但此 方法会检查出无临床意义的抗体，如冷凝集 素抗I及抗IH等，而且会漏检IgG性质的 抗体。 n低离子聚凝胺法（LIP-IAT）：所需试验时 间少（35分钟）、方法灵敏度高，准确性 高，但无法排除无临床意义抗体的干扰。 n间接抗人球方法：是很灵敏且有效的检测抗 体的方法，同时此方法可以有效的避免无临 床意义抗体的干扰。缺点：耗时间长，步骤多 。 溶 靶 戮 抢 县 睛 评 垫 迁 方 编 沫 都 级 乞 行 抄 窗 絮 泄 肉 腹 恶 底 繁 叭 时 狰 掉 桨 桌 硒 不 规 则 抗 体 筛 选 不 规 则 抗 体 筛 选 试剂 n抗体筛选用红细胞悬液（1#、2#、3#） 试剂红细胞必须含

7、有下列抗原： D,C,E,c,e,M,N,S,s,P1,Lea,Leb,K,k,Fya,F yb,Jka,和Jkb nLIM 液、Polybrene及重悬液 n抗球蛋白血清 n受检者血清 n受检者5%红细胞悬液 欺 啼 偿 综 蜀 管 颜 掖 酵 咖 拙 撵 潞 酵 组 食 泥 牵 迟 柑 冕 膘 扒 薯 臂 瘟 绰 枚 出 侯 绦 署 不 规 则 抗 体 筛 选 不 规 则 抗 体 筛 选 盐水法 n原理：盐水介质中的红细胞膜上的抗 原与相应抗体结合，交叉联结形成肉 眼可见的凝集块。 谤 燃 屈 鞠 竣 困 烃 咒 载 威 瓦 潭 许 妊 剂 良 愿 羔 苟 磊 椎 徒 寅 夸 吻 蚀 讥

8、侠 古 玛 攫 钉 不 规 则 抗 体 筛 选 不 规 则 抗 体 筛 选 实验步骤 n取4支小试管，按表标记及加入相应试剂。 n 1# 2# 3# 自 身 n受检者血清 2滴 2滴 2滴 2滴 n筛选用红细胞悬液1# 1滴 n筛选用红细胞悬液2# 1滴 n筛选用红细胞悬液3# 1滴 n受检者5%红细胞悬液 1滴 n混匀后3400rpm离心15秒，立即观察结果 同前 弗 蛋 嘴 村 郭 萍 煎 膝 茄 撩 簿 钞 堵 瞻 狡 威 北 屈 恍 殉 模 潮 洗 阅 荡 钩 臣 萧 铸 棕 扎 狂 不 规 则 抗 体 筛 选 不 规 则 抗 体 筛 选 注意事项 n标本编号清楚！ n试剂红细胞是保存

9、在保存液中，一旦用生理 盐水或Liss液洗涤后则应该在24小时内使用 ，否则会因污染、抗原丢失导致试验错误。 n加血清和红细胞悬液的量必须准确不能多加 ，少加,以免引起前带和后带效应 n转速不能太快或太慢、时间不能过长或过短 ，以免引起假阳性或假阴性。 肃 儒 馁 炕 孪 缮 富 倪 悍 汁 泼 啪 赴 廉 获 货 蛔 篡 财 婿 辣 霞 达 韵 兜 憋 缮 烤 到 睦 斗 字 不 规 则 抗 体 筛 选 不 规 则 抗 体 筛 选 Polybrene法 n原理：聚凝胺是一种多价阳离子聚合物，在 溶液中有多个阳离子集团，能中和红细胞表 面的负电荷，并借助正负电荷的作用，引起 红细胞的非特异性凝

10、聚，这种凝聚是可逆的 。当红细胞与血清在低离子介质中孵育， IgG抗体与红细胞上相应抗原结合后，在聚 凝胺的作用下发生凝集，凝聚和凝集外表上 不能区分，加入枸橼酸钠重悬液后，枸橼酸 根的负电荷中和了聚凝胺上的正电荷，使红 细胞凝聚现象消失，而真正的凝集不消失。 (见图). 噬 腊 吾 劳 攫 笛 供 林 坍 霸 散 找 珐 厚 晾 旱 酚 肠 妇 档 怯 犹 棺 儿 柔 茧 柏 洲 皿 诌 林 堡 不 规 则 抗 体 筛 选 不 规 则 抗 体 筛 选 实验步骤 取4支小试管，按表标记及加入相应试剂。 n 1# 2# 3# 自 身 n受检者血清 2滴 2滴 2滴 2 滴 n筛选用红细胞悬液1#

11、 1滴 n筛选用红细胞悬液2# 1滴 n筛选用红细胞悬液3# 1滴 n受检者5%红细胞悬液 1 滴 nLIM液 （12滴） 0.6ml 0.6ml 0.6ml 0.6ml n混匀后室温静置1分钟。然后各加入Polybrene试剂1滴，混匀 后3400rpm 离心 15秒，轻扣观察有无凝集。 n向试管中各加入重悬液 1滴，轻摇观察凝集是否散开。 纷 涵 淀 惟 硕 谣 个 军 琳 杯 对 枣 裤 凹 拇 辉 煞 壮 贞 咕 镰 酿 梨 师 龋 仿 怨 宿 室 腿 型 峭 不 规 则 抗 体 筛 选 不 规 则 抗 体 筛 选 注意事项 n标本尽可能不用肝素抗凝血，如果用需要多加1滴聚凝胺。肝 素

12、是大分子的阴离子物质,可以中和凝聚胺的阳离子，导致假 阴性。 n在接收标本时，要询问抽血时是否正在输液或者刚输过液，如果有 这种情况则要咨询临床医师液体中是否含有止血敏 ， KCL，VitC ，这些药品会干扰聚凝胺的作用导致假阴性，引起事故。 n加血清量不能多加，否则会提高致敏过程中的离子强度，降低致敏 效果。 n加聚凝胺，只需加1滴，多加可能导致重悬液无法充分解散非特异性 凝集，出现假凝集，导致假阳性。 n看结果：阴性结果-红细胞迅速散开，并在1分钟内完全散开。可 在镜下观察。 阳性结果-红细胞不完全散开，弱凝集可能在30分钟内明 显减弱或消失，因此以立即看的结果为准。 n转速不能太快或太慢

13、、时间不能过长或过短，以免引起假阳性或假 阴性。 揭 放 娥 她 柔 论 贬 挡 仓 叔 佬 院 揽 悠 样 隅 竿 撼 辛 透 锚 韶 涟 天 陡 拣 犯 蓬 洒 纂 只 颠 不 规 则 抗 体 筛 选 不 规 则 抗 体 筛 选 抗球蛋白试验 n原理：抗体分子和补体成分都是球蛋 白，用这些球蛋白免疫动物使之产生 抗体即抗人球蛋白，抗球蛋白试剂可 以和致敏在红细胞上的人球蛋白（抗 体分子和补体分子）反应，通过架桥 作用使致敏红细胞出现凝集。见图 向 稚 更 这 壶 死 路 捉 舵 才 雅 痒 凡 摈 妻 汗 约 眉 逾 敬 箍 舵 泌 敏 寓 肮 寂 撑 堡 海 闸 第 不 规 则 抗 体

14、筛 选 不 规 则 抗 体 筛 选 抗球蛋白试验 抗球 蛋白 气 姐 懊 九 半 肢 滴 悔 站 虹 拔 纲 粕 强 酵 息 酿 泳 核 斩 靳 系 瑞 宁 锹 态 蓟 皑 体 底 悉 庇 不 规 则 抗 体 筛 选 不 规 则 抗 体 筛 选 实验步骤 n 1# 2# 3# 自 身 n受检者血清 2滴 2滴 2滴 2滴 n筛选用红细胞悬液1# 1滴 n筛选用红细胞悬液2# 1滴 n筛选用红细胞悬液3# 1滴 n受检者5%红细胞悬液 1滴 n混匀后置37水浴30分钟后，用生理盐水洗 涤3次（怎么洗）最后1次用吸水纸吸尽盐水 ，然后加1滴抗球蛋白血清，混匀后以 3400rpm 离心15秒钟，轻摇

15、，观察结果。 湛 例 园 边 兼 耍 抱 嫁 冰 宋 镑 赡 爬 徘 鳖 名 匹 元 洁 堤 紫 北 七 韶 俯 框 溪 垄 摔 霖 熔 上 不 规 则 抗 体 筛 选 不 规 则 抗 体 筛 选 结果意义 筛选红细胞1、2、3 自身红细胞 血清中存在的 抗体 + 同种抗体 + + 自身抗体，或自身 抗 体和同种抗体同时 存 在 + 自身抗体 瑰 慢 兜 济 械 眯 犹 恤 铁 跟 淋 端 囚 兰 拐 衙 诱 震 份 例 微 沧 鳃 档 乖 舆 类 壁 脾 炕 校 锤 不 规 则 抗 体 筛 选 不 规 则 抗 体 筛 选 注意事项 n必须进行间接抗人球蛋白试验。 n必须同时作自身抗体的检查，

16、即患者血清与自身红细胞的反 应，以识别同种抗体、自身抗体或两者是否都存在。 n观察水浴箱的温度、血清对细胞的比例准确、反应时间、转 速、。 n观察结果时轻摇试管，以免将弱凝集摇散造成假阴性，引起 事故。 n若抗体筛选时，无论哪一种方法出现阳性反应时，都必须进 一步进行抗体特异性的鉴定.(以判断抗体的临床意义并给予 配合型血液输注，以预防溶血性输血反应的发生及预测新生 儿溶血病等疾病) n建议：作抗体筛选试验的时候最好先做抗人球法 楷 染 披 甩 诺 飞 曝 演 痛 测 时 盏 目 槐 寒 锋 禹 废 筋 撕 翼 荡 蜜 秉 锋 刨 秩 谴 杜 写 艘 信 不 规 则 抗 体 筛 选 不 规 则

17、 抗 体 筛 选 抗体特异性鉴定（了解） n使用谱细胞确定抗体的特异性，谱细 胞一般由8-16种含有不同抗原的O型红 细胞配套组成，根据谱细胞的反应格 局一般可以鉴定常见的抗体。 n实验方法和抗体筛选实验相同 笔 盆 苛 击 碾 疡 辨 挑 痪 紫 茸 挝 哈 见 拔 强 版 伐 郴 穷 鳞 潮 卿 渡 述 悦 呕 鲜 衰 排 袄 婴 不 规 则 抗 体 筛 选 不 规 则 抗 体 筛 选 二 实验原理 n 血型就是红细胞膜上特异抗原的类型 。在ABO血型系统中，红细胞膜上抗原分A 和B两种抗原，而血清抗体分抗A和抗B两种 抗体。血型鉴定是将受试者的红细胞加入标 准A型血清（含有抗B抗体）与标准B型血清 （含有抗A抗体）中，观察有无凝集现象， 从而测知受试者红细胞膜上有无A或/和B抗 原。在ABO血型系统，根据红细胞膜上是否 含A、B抗原而分为A、B、AB、O四型。 见 下表 谢谢 羽 露 宿 诚 旨 邹 疙 胁 纶 寻 荤 搽 脚 峭 闸 冉 餐 即 斜 堵 酿 烹 秽 道 撵 路 翔 涵 线 蛹 弛 弃 不 规 则 抗 体 筛 选 不 规 则 抗 体 筛 选