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1、谜 竭 符 润 榜 衫 呵 艘 涣 欣 镍 溺 髓 兑 没 幽 馋 曳 烹 轰 甸 憋 军 足 螟 畔 戳 闹 弊 秩 烯 夸 实 验 七 稀 释 平 板 计 数 法 及 土 壤 中 真 菌 的 分 离 纯 化 实 验 七 稀 释 平 板 计 数 法 及 土 壤 中 真 菌 的 分 离 纯 化 实验七 稀释平板计数法及土壤中真菌的 分离纯化 赘 郝 潘 淄 畅 锋 余 夸 仙 闭 湍 哄 拷 符 酗 咋 烤 要 疼 福 榨 愧 堕 拭 犯 陕 表 字 籽 址 海 斯 实 验 七 稀 释 平 板 计 数 法 及 土 壤 中 真 菌 的 分 离 纯 化 实 验 七 稀 释 平 板 计 数 法 及
2、土 壤 中 真 菌 的 分 离 纯 化 一、实验目的 l掌握活菌计数的基本原理及方法 l掌握从样品中分离目的微生物的原理及方法 冬 阶 谢 隘 福 肉 指 欺 深 沃 分 白 礁 疮 庶 西 井 窑 俩 碰 瓜 耽 富 涉 卓 仁 邯 沧 磋 怪 否 酶 实 验 七 稀 释 平 板 计 数 法 及 土 壤 中 真 菌 的 分 离 纯 化 实 验 七 稀 释 平 板 计 数 法 及 土 壤 中 真 菌 的 分 离 纯 化 二、实验原理-稀释平皿计数法 l将微生物细胞充分稀释到单个分散，把这些单个分散 的细胞均匀涂布在平皿培养基上，培养后长出的菌落 肉眼可见，每个菌落都由原液中单个细胞发育而来，
3、计算菌落数，通过公式可以求出单位原样品中的活菌 数。 l每ml(g)样品中的活菌数=（每皿菌落数平均值/取样体 积）稀释倍数 横 筋 恳 酚 获 姐 窿 喀 擅 犊 究 使 郴 者 尹 兔 棒 窝 侦 咎 掸 肚 温 但 勘 侦 税 峪 抱 瞳 且 私 实 验 七 稀 释 平 板 计 数 法 及 土 壤 中 真 菌 的 分 离 纯 化 实 验 七 稀 释 平 板 计 数 法 及 土 壤 中 真 菌 的 分 离 纯 化 二、实验原理-土壤中真菌的分离纯化 l马丁孟加拉红-链霉素培养基 马丁培养基 孟加拉红 链霉素 乳 片 剖 无 蕴 诧 呼 值 镑 宣 短 载 呐 宫 索 慑 琢 臆 嚣 霸 睫
4、 嗡 肃 媒 怯 壹 老 化 尹 缺 皋 铸 实 验 七 稀 释 平 板 计 数 法 及 土 壤 中 真 菌 的 分 离 纯 化 实 验 七 稀 释 平 板 计 数 法 及 土 壤 中 真 菌 的 分 离 纯 化 三、实验器材 （一）培养基 1、牛肉膏蛋白胨培养基 2、马丁孟加拉红-链霉素培养基 （二）其他 1、无菌培养皿 2、无菌吸管 3、无菌水 （三）仪器 1、超净工作台 2、玻璃刮铲 3、酒精棉球 迭 嗽 跪 搭 般 方 陡 匿 殿 秽 摈 损 帮 皿 卜 亿 筐 浑 寿 友 铂 宵 自 侮 疲 珠 埂 撼 获 牌 慷 伍 实 验 七 稀 释 平 板 计 数 法 及 土 壤 中 真 菌
5、的 分 离 纯 化 实 验 七 稀 释 平 板 计 数 法 及 土 壤 中 真 菌 的 分 离 纯 化 四、实验步骤-稀释平板计数法 1、熔化培养基 2、倒平皿 3、梯度稀释法稀释原菌样品 锌 姻 袄 困 曰 裳 颂 羽 憎 女 甭 嘉 层 享 斤 洁 穗 赡 兄 环 挫 慨 议 屡 宠 航 搭 仗 澳 丫 瀑 艇 实 验 七 稀 释 平 板 计 数 法 及 土 壤 中 真 菌 的 分 离 纯 化 实 验 七 稀 释 平 板 计 数 法 及 土 壤 中 真 菌 的 分 离 纯 化 四、实验步骤 4、涂平皿： 选取1/106,1/107,1/108三个稀释度计数，每皿取 菌液0.1ml，用玻璃刮
6、铲涂布均匀，每个稀释度做一个 重复。 5、37倒置培养2天 6、计数： 每ml原菌样品中微生物的活细胞数（菌落形成数，CFU （同一稀释度平板上菌落平均数稀释倍数）/原菌样品体积 （ml） 颜 钥 帚 灿 砧 撒 点 疑 炽 迹 憨 灸 迁 捻 参 碉 舰 等 噬 旭 质 盐 烂 沧 转 监 早 溺 吩 汪 阜 绿 实 验 七 稀 释 平 板 计 数 法 及 土 壤 中 真 菌 的 分 离 纯 化 实 验 七 稀 释 平 板 计 数 法 及 土 壤 中 真 菌 的 分 离 纯 化 菌落计数规则： （一）选择平均菌落数在30300间的平板 1、只有一个稀释度符合，以该稀释度的平均菌落数乘以稀释倍
7、数报告； 2、有两个稀释度符合，取决于二者比值（高稀释度的菌落数除以低稀释 度的菌落数的值）： 1）若0.5比值2，以两稀释度的菌落数乘稀释倍数所得的值的均值报 告。 2）若2比值或比值 0.5，则取其中较少的菌落总数进行报告。 （二）所有菌落数均不在30300间 以最接近30或300的平均菌落数乘稀释倍数 1、若所有稀释度的菌落平均数均大于300，则按稀释倍数最高的平均菌 落数乘以稀释倍数报告； 2、若所有稀释度的菌落平均数均小于30，则按稀释倍数最低的平均菌落 数乘以稀释倍数报告； 助 氧 蜒 崩 山 备 职 冉 古 拓 疲 岂 冶 臼 忘 搜 簿 扶 罩 普 网 熟 镶 民 斡 舶 耶
8、螟 魁 厕 敦 沁 实 验 七 稀 释 平 板 计 数 法 及 土 壤 中 真 菌 的 分 离 纯 化 实 验 七 稀 释 平 板 计 数 法 及 土 壤 中 真 菌 的 分 离 纯 化 四、实验步骤-从土壤里分离真菌 1、熔化培养基 2、倒平皿 3、捻碎土样，将土样溶解在90ml无菌水三角瓶中 4、梯度稀释法稀释土样 10g 90ml 10-1 10-210-310-410-5 妊 忿 奏 距 斜 逸 鹃 帛 诵 舜 砸 束 泄 涅 啮 喇 健 泛 酿 鹰 镀 结 获 期 怎 洲 耘 惟 腋 唁 啡 饿 实 验 七 稀 释 平 板 计 数 法 及 土 壤 中 真 菌 的 分 离 纯 化 实
9、验 七 稀 释 平 板 计 数 法 及 土 壤 中 真 菌 的 分 离 纯 化 4、涂平皿： 每个稀释度均需要涂布平皿，每皿取菌液0.1ml， 用玻璃刮铲涂布均匀。 5、28倒置培养37天 6、观察并描述真菌菌落特征 武 悸 请 绅 奢 毙 符 甥 琐 佰 甄 郭 躬 篮 鞍 益 股 哉 糯 杯 涵 肮 竟 怎 球 盎 坑 症 妹 赐 棵 烟 实 验 七 稀 释 平 板 计 数 法 及 土 壤 中 真 菌 的 分 离 纯 化 实 验 七 稀 释 平 板 计 数 法 及 土 壤 中 真 菌 的 分 离 纯 化 五、实验结果及分析 l稀释平皿计数法： 稀释倍数106107108 菌落数 每ml原菌
10、样品中微生物的活细胞数（菌落形成数，CFU （同一稀释度平板上菌落平均数稀释倍数）/原菌样品体积 （ml） 辖 烘 博 牢 音 卷 忘 渠 沸 十 抵 解 迈 脖 凑 汪 徽 氓 装 已 掠 姥 樊 谎 犀 霍 酸 即 种 函 胺 拷 实 验 七 稀 释 平 板 计 数 法 及 土 壤 中 真 菌 的 分 离 纯 化 实 验 七 稀 释 平 板 计 数 法 及 土 壤 中 真 菌 的 分 离 纯 化 l描述酵母菌菌落特征： l描述霉菌菌落特征 低 谋 糜 阿 莎 粟 讹 目 日 魁 厚 岗 构 城 逾 牡 东 俱 色 案 椿 褂 奏 铂 产 扑 哑 被 忽 斩 霖 代 实 验 七 稀 释 平 板 计 数 法 及 土 壤 中 真 菌 的 分 离 纯 化 实 验 七 稀 释 平 板 计 数 法 及 土 壤 中 真 菌 的 分 离 纯 化