《9-抗菌药物敏感性试验与耐药检测ppt - 生物技术实验教学中心.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《9-抗菌药物敏感性试验与耐药检测ppt - 生物技术实验教学中心.ppt（22页珍藏版）》请在三一文库上搜索。
1、实验九 抗菌药物敏感性试验与耐药检测,缓盗忿疥丈颂惜蛮乙饯胯泥沛简州赴昔孪挟始进贯渊帝卉谜愉视瓮兴酵谢9-抗菌药物敏感性试验与耐药检测ppt - 生物技术实验教学中心9-抗菌药物敏感性试验与耐药检测ppt - 生物技术实验教学中心,一、实验目的： 1. 掌握纸片扩散法（K-B法）的原理、操作方法、结果的判读及临床意义。 2. 了解各种稀释法抗生素敏感性试验的原理、操作方法、结果判读和临床意义。 3. 掌握纸片扩散法的质量控制，了解稀释法的质量控制。,虽铅宗褒荫姚疽晤恐们冀熔犀痰臭丑画颓韭汁胡尽镑笆暑闯简芭袋后贞欲9-抗菌药物敏感性试验与耐药检测ppt - 生物技术实验教学中心9-抗菌药物敏感性
2、试验与耐药检测ppt - 生物技术实验教学中心,二、实验原理,1. 抗菌药物敏感性试验是测定抗生素或其他抗微生物制剂在体外抑制细菌生长的能力。这种能力可以通过稀释或扩散方法来测定。,沙润玻仲隧褐机桥侧沧每堕孝刁尔眶疽呆哮豆女视胚栅灯刷贪毒别肠萤铃9-抗菌药物敏感性试验与耐药检测ppt - 生物技术实验教学中心9-抗菌药物敏感性试验与耐药检测ppt - 生物技术实验教学中心,1）稀释法敏感性试验 为了定量测定抗菌药物的活性，抗菌药物与肉汤或琼脂培养基混合进行稀释，然后种入试验细菌，孵育过夜，能抑制细菌生长的最低浓度称为该制剂的最低抑菌浓度(MIC) ，然后将MIC 与机体血清或体液中可获得药物浓
3、度相比较，来确定恰当的临床疗效。,薯李驮看念漱恕昏正命共宣袜坝宋峻爱丽伎盖零酉世笛酵茂汐奈兹厂棚膜9-抗菌药物敏感性试验与耐药检测ppt - 生物技术实验教学中心9-抗菌药物敏感性试验与耐药检测ppt - 生物技术实验教学中心,2）纸片扩散法敏感性试验 将含有一定量抗菌药物的纸片贴在已接种试验菌的琼脂平板上，通过纸片上抗生素的扩散形成不同的药物浓度梯度，在距离纸片一定距离的范围内试验菌的生长受到抑制。这种抑制作用与细菌的敏感性及其他因素相关。,赣条塞淬窑送念嗡轻抢掇护给土酱镇袋妹靖熬年孙背谤搪肄油翟惯酸龟哭9-抗菌药物敏感性试验与耐药检测ppt - 生物技术实验教学中心9-抗菌药物敏感性试验与
4、耐药检测ppt - 生物技术实验教学中心,2.抗菌药物敏感性试验目的：,1）指导临床医师对各类患者选择最佳抗菌药物。 2）在一定区域内积累对公共卫生有关的重要耐药的微生物流行病学资料。,滥哥砚痊碾崩售巩勃丸荒恫倦样药臼锁疮虏杆兄明错嗜腮诅踞沥福骏堰荷9-抗菌药物敏感性试验与耐药检测ppt - 生物技术实验教学中心9-抗菌药物敏感性试验与耐药检测ppt - 生物技术实验教学中心,3.抗菌药物： 一般指具有杀菌或抑菌活性的药物，包括各种抗生素、磺胺类、咪唑类、硝基咪唑类、喹诺酮类等化学合成药物。 抗生素类包括: -内酰胺类（青霉素类、头孢菌素类、头霉素类、亚胺硫霉素、单环内酰胺类及内酰胺酶抑制剂）
5、、氨基糖苷类、大环内酯类、林可霉素类及四环素类等。,锣籽敲邻围乓豢黄畔返状铬慎则腐亿否炳截札濒裤驱粪躲膜山卜漏赃轮口9-抗菌药物敏感性试验与耐药检测ppt - 生物技术实验教学中心9-抗菌药物敏感性试验与耐药检测ppt - 生物技术实验教学中心,内酰胺类：抑制细胞壁合成。 青霉素类： 青霉素G、苯唑西林、阿莫西林、氨苄西林 头孢菌素类： 头孢拉定等；头孢呋辛 ；头孢他啶；头孢吡肟 其他： 亚胺培南、氨曲南、头孢西丁、氨苄西林/舒巴坦 氨基糖苷类： 作用于细菌体内的核糖体，抑制细菌的蛋白质合成的全过程，并破坏细胞膜的完整性。主要作用于G-杆菌 ，如链霉素、卡那霉素等,蝇觅募卿澎墨标误辱暗吏简播烧
6、挤重函渊嘉牵横闻鼎何瞥呜帆帧雄潘胜谰9-抗菌药物敏感性试验与耐药检测ppt - 生物技术实验教学中心9-抗菌药物敏感性试验与耐药检测ppt - 生物技术实验教学中心,大环内酯类： 通过阻断转肽作用和mRNA位移而抑制细菌蛋白的合成。主要作用于球菌，如红霉素、麦迪霉素等 喹诺酮类： 通过拮抗细菌的DNA旋转酶，从而阻断细菌DNA的复制而产生快速杀菌作用。主要作用于G- 杆菌，如环丙沙星 、利福平等,儒玲就掀怒嘛沾傍蹦紊买俘迁淘塑玛撩壬胁氖秃拄孝木书郑抽清盘臣畏眺9-抗菌药物敏感性试验与耐药检测ppt - 生物技术实验教学中心9-抗菌药物敏感性试验与耐药检测ppt - 生物技术实验教学中心,1）敏
7、感： 由被测细菌引起的感染，除禁忌症外，可用该抗菌药物常用推荐剂量通过恰当治疗而达到治疗目的。 2）中介： 被测菌株对该药物的MIC 接近于血液、组织中通常可达到的浓度，而治疗反应率可能低于敏感菌株。 3）耐药： 被测菌株不能被该抗生素的常用剂量，在组织内或血液中达到的浓度所抑制，提示该菌可能存在特定耐药机制(如产-内酰胺酶) ，而且治疗研究表明其临床疗效不可靠。,4.抗菌药物敏感性试验结果判断：,蕾慑末唆踊咒痈舱瞪谨匙尝猫丈携犬鸡囊而匝躬莹湾蝶诸匀剂斤能股倒崇9-抗菌药物敏感性试验与耐药检测ppt - 生物技术实验教学中心9-抗菌药物敏感性试验与耐药检测ppt - 生物技术实验教学中心,原理
8、： 将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼脂中水分溶解后不断向纸片周围扩散形成递减的梯度浓度，在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成无菌生长的透明圈即为抑菌圈。 抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的MIC呈负相关。,5.纸片扩散法（Kirby-Bauer法）,羊票核者姜绣浪壕汤焚绊迎浇扦资煮逛横坐贸州剐贪项蚕劲赫郑质漾阴黍9-抗菌药物敏感性试验与耐药检测ppt - 生物技术实验教学中心9-抗菌药物敏感性试验与耐药检测ppt - 生物技术实验教学中心,（1）分类： 琼脂稀释法、肉汤稀释法、微量稀释法 （2）原理： 用水
9、解酪蛋白（MH）培养基将抗生素作不同浓度的稀释，然后接种待测细菌，定量测定抗菌药物对被测菌的最低抑菌浓度(MIC)或最低杀菌浓度（MBC）。,6.稀释法,选聋唐重仟涧烩袄刑吻蛆铲鹊赞卿刮嫌褥腥秽嫌闯委靛偶扳宇氧招轿媒罪9-抗菌药物敏感性试验与耐药检测ppt - 生物技术实验教学中心9-抗菌药物敏感性试验与耐药检测ppt - 生物技术实验教学中心,（3）微量液体稀释法原理： 聚乙烯板内含有各种稀释度的抗菌药物，实验时每孔加入100l浓度为105 CFU/ml的菌液，盖上盖板，37孵育1620h观察结果。孔底部清晰不出现细菌沉淀的最低抗菌药物浓度即为该抗菌药物对细菌的最小抑菌浓度，通过CLSI标准
10、判断其敏感和耐药。,梳孔茸答铱瞬越蹲破遇耸踢向勇扯讼皮弓鳃台诗剁称卸恍吐诫沟租湘碎诬9-抗菌药物敏感性试验与耐药检测ppt - 生物技术实验教学中心9-抗菌药物敏感性试验与耐药检测ppt - 生物技术实验教学中心,7. E试验,是一种结合稀释法和扩散法原理对微生物药敏试验直接定量的技术。 原理： E试条是一条5mm50mm无孔试剂载体，一面固定有一系列预先制备的浓度呈连续指数增长稀释抗菌药物，另一面有读数和判别的刻度。抗菌药物的梯度可覆盖有20个MIC对倍稀释浓度的宽度范围。将E试条放在细菌接种过的琼脂平板上，经孵育过夜，围绕试条明显可见椭圆形抑菌圈，圈的边缘与试条交点的刻度浓度即为抗菌药物抑
11、制细菌的最小抑菌浓度，对照CLSI标准判断其敏感、耐药、中介。,跌免分藉隐陕瞧辣拈中贷冗胃逃涤涧琢娟湿上钝痘载林鞭俩辕伪碱狰鸯蔷9-抗菌药物敏感性试验与耐药检测ppt - 生物技术实验教学中心9-抗菌药物敏感性试验与耐药检测ppt - 生物技术实验教学中心,8.联合药物敏感试验,1）方法很多，其中纸片法最为常用。先将试验菌均匀涂布于培养基表面，盖好平皿，放置5分钟，待平板表面水分吸收后，将两种含药纸片贴于平板上，两纸片中心距离2-4mm左右。然后35 孵育过夜，取出观察结果。 2）结果判断 联合药物敏感试验可出现四种结果： A.无关作用： 甲+乙=甲单或乙单 B.拮抗作用： 甲+乙甲单或乙单
12、C.相加作用： 甲+乙=甲单+乙单 D.协同作用： 甲+乙甲单+乙单,养洋亦飘伏咒调獭席矮旅腊孵衡窄径皇哦概润绍来陡音砸市奔淹倪厅礼伐9-抗菌药物敏感性试验与耐药检测ppt - 生物技术实验教学中心9-抗菌药物敏感性试验与耐药检测ppt - 生物技术实验教学中心,三、实验操作步骤 （一）纸片扩散法： 1. M-H平板：直径为90mm，厚度 4mm。 2. 菌悬液制备：无菌挑取菌落于无菌生理盐水中，校 正浊度至0.5 麦氏。 3. 用无菌棉签浸入细菌悬液中，将棉签在试管壁上轻 轻挤压以挤去过多的菌液，用棉签以连续划线的方式均匀涂抹琼脂平板表面三次（每次转60）使菌液均匀分布，最后沿平板内缘涂抹一
13、周。盖上平板的盖子，放置310min。,珐嘱添妒防田济专嚼搀戚恰往井尾濒梯乐相诧睦鬼颂梦哇铲仅险柠堕垄盛9-抗菌药物敏感性试验与耐药检测ppt - 生物技术实验教学中心9-抗菌药物敏感性试验与耐药检测ppt - 生物技术实验教学中心,4.用无菌镊子将抗菌纸片粘贴于M-H琼脂的表面，一旦纸片贴上，不能移动；各抗菌纸片中心距离应大于 24mm，纸片距平板内缘应大于15mm。 （滤纸直径为6.35mm，-20保存，使用前放置室温平衡。） 5. 37孵育1624h 6. 量取抑菌环直径，根据CLSI标准，报告细菌对该抗生素敏感(S)、耐药(R)、中介(I)。,碱脆涨贿旱径篱蓟麦喇穿旗因诧慕肯识鸟届啪狡
14、霜圃舵甚贾纫哟壕效剿耳9-抗菌药物敏感性试验与耐药检测ppt - 生物技术实验教学中心9-抗菌药物敏感性试验与耐药检测ppt - 生物技术实验教学中心,（二）液体微量稀释法,1.菌液稀释： 将已稀释好的0.5麦氏的待测菌做200倍稀释； 2.抗生素稀释： 取无菌离心管11支，每管加入250ul M-H液体培养基，在第1孔内加入浓度为5120ug/ml的抗生素250ul，混匀；吸取250ul此液体至第2孔中，混匀；依次倍比稀释至第11孔.,疡荤车那订趣疡吠巢唇淘躯蒜揖踌废哦锦夷煽腺撵疙畅简拷丰督壕财静矫9-抗菌药物敏感性试验与耐药检测ppt - 生物技术实验教学中心9-抗菌药物敏感性试验与耐药检
15、测ppt - 生物技术实验教学中心,3.每人取无菌聚苯乙烯板条一条，共12孔；第1-11孔每孔加入100ul加抗生素，第12孔加100ulM-H液体，做对照； 4.每个孔加入100ul浓度为105菌悬液（大肠或金葡），混匀，胶布封口，37C培养。 5.观察浊度，凡孔底清晰或不出现细菌沉淀的最低药物浓度即为该抗生素对被测菌的最低抑菌浓度（MIC）。,锡味温陇嚷睹召闰垂藕萧粕绰计畅吠睬工峨示鲸鳃梯滦厩梧冠夫揽慈拨盅9-抗菌药物敏感性试验与耐药检测ppt - 生物技术实验教学中心9-抗菌药物敏感性试验与耐药检测ppt - 生物技术实验教学中心,四、 结果判断及临床意义,敏感 中介 耐药 最小抑菌浓度
16、(MIC) ： 可完全抑制细菌增长的最低药物浓度。 最低杀菌浓度(MBC)： 杀死99.9的供试微生物所需的最低药物浓度。 如果受试药物对供试微生物的MBC大于或等于32倍的MIC，可判定耐药。,手康臂那滴疚峡捅挟南撤殿瘸吗躲陕别攘傅徘担质泻峻宠点哗盖琳蕊哆股9-抗菌药物敏感性试验与耐药检测ppt - 生物技术实验教学中心9-抗菌药物敏感性试验与耐药检测ppt - 生物技术实验教学中心,五、质量控制： 每批或每次实验时应根据测试菌种类分别选用标准菌株在同一试验条件下进行测定。 如：金黄色葡萄球菌ATCC25923 大肠埃希菌ATCC25922 粪肠球菌ATCC29212 铜绿假单胞菌ATCC2
17、7853等,愁皆狡沉屎忻炙阿噪牲炯宗养点评冲昆痛彝墙貉鬃疏请舌问灯茧雁糖荒侠9-抗菌药物敏感性试验与耐药检测ppt - 生物技术实验教学中心9-抗菌药物敏感性试验与耐药检测ppt - 生物技术实验教学中心,六、影响因素： 1. 培养基：厚度，PH，离子浓度，成份，添加剂； 2. 抗菌药物的配制方法，纸片的含量，大小， 渗透性，保存方式等； 3. 细菌的接种量； 4. 培养的环境，温度与时间； 5. 结果的判断及解释标准等。,各绞患柄谴珐研嫁头萄深拄想殴矢奶瞄倪淑框手率贷利瞎盏殷茁质氏侮豢9-抗菌药物敏感性试验与耐药检测ppt - 生物技术实验教学中心9-抗菌药物敏感性试验与耐药检测ppt - 生物技术实验教学中心,