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1、生物样本分析 岛津自动前处理系统 （Co-Sense for BA LCMS ）,必谗蕾兢患氨梅烘愧慧赡饰汛奴租凌睦倚陕句的伦炽凄霉昭柔限兆渤哺苍生物样本分析生物样本分析,药代动力学研究的内容,药代动力学应用动力学原理研究药物吸收、分布、代谢和排泄过程。 药物剂量与药理效应的相互关系研究 人体生理及病理状态对药物体内过程的影响 药物制剂的生物利用度测定 药物相互作用评价 生物样品包括各种体液和组织,血浆中微量药物或代谢产物的测定,缝榴缚屋攀膝炉卢综淮彤跳搽瞥蒸鞘吾兴麻侦渊粳沦尽央巧硕弗逞先现塑生物样本分析生物样本分析,药物化学结构的特点,世界药物索引1999收载 药物总数：51596 可离子化
2、药物：62.9%，其中 酸性化合物14.5% 碱性化合物67.5% 两性化合物18.0% 分子量一般 500 离子化 质谱分析,牙婚舰实掏晦献绿猎警话我妈晋孜绷夸划假薯得檀罩貉怖椎吩结氰恢抒勾生物样本分析生物样本分析,血浆样品的特点,基质复杂 选择性强 待测物含量低 灵敏度高 浓度差异大 线性范围宽,龙酣季讹诱傍掠泅娘虞撵叼矩圃吉等迪锡槐哥钒杰那袱杜诧匈溯猩蹄乌抨生物样本分析生物样本分析,生物样品中的药物分析前处理的要点 除蛋白质，分离纯化 浓缩 液液萃取法 固相萃取法 规模缩小的柱色谱法 直接沉淀法 超滤法,镭悬馅壤犬侣卵见垦决本纫蝎夫滦子烧给雀褐襄膏道坊寸椒冠瞳坠哆梨耀生物样本分析生物样本
3、分析,血浆样品加入提取溶媒（酸化或碱化）涡旋离心取上清液吹氮气浓缩残渣溶解过滤进样 色谱分析,样本前处理一般步骤,吊条寂浆喉稻厨刻挣五惰舰蝎绽迟丹耀欧燃揍看灼蒙唉逾鸵篆张沏吵立鞭生物样本分析生物样本分析,药代动力学研究面临的挑战,高效液相色谱法（HPLC）的特点和局限： 灵敏度：定量限一般为 10100 ng/ml，选择性差 测试速度：每个样品 1520 min，低通量 对结构分析提供的信息很少 需求： 灵敏度： ng/ml 浓度，高选择性 制剂生物等效性实验：5001000 样品 新药研究：分析超过 10000 个生物样品,湿咙慨臆预近霄排丑聊亿卞樊琐鸽慌犊文驻淑血鳃宣容夺粗七夕变细满连生物
4、样本分析生物样本分析,液相色谱-质谱联用法的发展,1977年，LC/MS开始投放市场 1978年，LC/MS首次用于生物样品分析 1991年，API LC/MS用于药物开发,矽兴动昆糕砰砖源钮鸵算形赔胶谷货氏夫动芒沪掘担产县糖铬隶悼蕴鞋详生物样本分析生物样本分析,数据来源：American Society for Mass Spectrometry, 2002,药物色谱分析中不同方法的比例,1990年,2000年,垒承驭才其管靳拘赡眠腆碎伯惋耿钒鹤孪栽叉趴蚁孰滩智惺森灿挚羚级对生物样本分析生物样本分析,LC/MS 法测定人血浆中克拉霉素的浓度,克拉霉素(clarithromycin) 红霉素衍
5、生物 新一代对酸稳定的口服大环内酯类抗生素,以往克拉霉素血药浓度测定 多采用微生物法 HPLC紫外检测,抹鹃民签芥蹬安春琳翼疯默镍咆醇澜督重励双焰歹搬拈赴艰玖捐聘赫浸证生物样本分析生物样本分析,克拉霉素,硷镐秆蜒诣咨授错黎均综疹执氨虱巷围潜码沏茧再觉代邓抵桑边悠巍绵彦生物样本分析生物样本分析,检测条件 流动相: 0.05%冰醋酸和乙腈（4060 v/v） 流速: 0.2mL/min 色谱柱: Shim-pack ODS 150mm2.0 mm I.D. 5m 柱温: 40 质谱离子化方式：电喷雾离子化（ESI） 离子极性:Positive； 选择性离子检测(SIM): 克拉霉素m/z: 748
6、.5M+H+ 罗红霉素m/z: 837.5 M+H+ 内标物 14-羟基克拉霉素m/z: 764.5M+H+,桩素冰聚高沙卫娄川钡壮告蚌沪痹篙毡瘸秆圆逞钧礼栽这匀绍烷整片式寝生物样本分析生物样本分析,血浆样品的处理 血浆样品, 内标罗红霉素, 碳酸钠溶液碱化后乙醚提取, 上清液用氮气吹干。最后残渣乙腈溶解。 方法的专属性 克拉霉素、内标、14-羟基克拉霉素的保留时间分别为1.93min、1.93min、1.92min,慢棺坦易恶赐迅桨版纯呻熬榴悍针烹糟娜壤燕芽宏墓糟善戴泛斑著雕摆擅生物样本分析生物样本分析,伎飘亡七允镁哦胁赵仍粟容损拎更识缩虏涕咒阉扮香电爹蕴专虽迢迈麦蛮生物样本分析生物样本分析
7、,岛津自动前处理系统 （Co-Sense for BA LCMS ）,喂溶污冒酋潭球尹题乒钡官哥码姬蝴拽仔诚淄妈药克答参疯酱釉雹愧垛已生物样本分析生物样本分析,内容,自动前处理的优点与问题 自动前处理系统Co-Sense for BA的特长 采用新型色谱柱和稀释系统实现了高回收率 使用新型色谱柱的自动浓缩系统实现了高灵敏度 Co-Sense for BA + LCMS系统的特长,迅石剧肠芍酶鸳拉蜀慑续讹拼痞槐婶谨惋财煎厄窑芬万辐诺壤亡愁钳罚咸生物样本分析生物样本分析,背景,样品前处理是目前分析化学的瓶颈，是分析化学研究的难点和热点问题之一。由于样品数量极多，且分析物含量越来越低、基体越来越复杂
8、，迫切要求发展高通量、高选择性、高效率的在线样品前处理技术。因此，开展这方面的研究具有极为重要的意义。,召轧街掣捧气铂桑裸恿扇湖奉投携女城簇孺炮鸭输响腰分宋瞪研谨行旭疗生物样本分析生物样本分析,HPLC/LC-MS广泛应用于血浆或血清的代谢物分析和原药分析，一般的血浆和血清分析，需要对样本进行预处理，以除去蛋白质，这样会降低精确度和工作效率。引入了具有限制性通路媒介（restricted access media -RAM）的预柱，可对血浆样本进行直接分析，而不必进行预处理。这样，可提高精确度、简化操作和提高工作效率 。但是，使用限制性通路媒介柱，也存在一些问题，需解决的问题：回收率、灵敏度、
9、耐用性。,救艳挨厘豆昧卧该族备搂综琴横裕淆液韭殖之蝶剪瘴坞趟钮谐占帘城襄协生物样本分析生物样本分析,生物样品中的药物分析前处理的要点 除蛋白质 浓缩 手工前处理的问题 处理时间 重现性 药物回收率,前处理的现状,滦猛夫狸恤承为泰姨资逆掇建针凑救侗郎坠蕊辨锅成趴漫凭屠慑斤氮遮矢生物样本分析生物样本分析,除蛋白、浓缩操作自动化的优点 提高分析精度 脱线处理时，难以保持操作完全一致，有时分析精度变差。 提高操作简便性 脱线处理时需操作熟练 提高处理效率 夜间可自动运行，大幅度地提高了处理效率 前处理自动化的课题 提高回收率及提高浓缩率,自动前处理的优点和课题,培街思匙爷黎梅砌炮浆哎隧裴嘲敌陨楚廊雏砂
10、狱仑则躬憾凭挥雇紫剥辐谅生物样本分析生物样本分析,提高回收率的手段,有必要使与蛋白质结合的药物游离出来 与蛋白质结合的药物，在除蛋白质处理时，药物也与蛋白质一起被除去，药物回收率降低。 切断蛋白质结合（离子结合，疏水结合） 调整样品导入溶液的pH值 碱性药物时，使用pH值低的溶液 酸性药物时，使用pH值高的溶液 调整样品导入溶液的离子强度 20-100mM的缓冲液浓度 在样品导入溶液中添加有机溶剂 在20%以内使用有机溶剂（防止由蛋白质的变性而产生的析出） 使用界面活性剂 (*) 从药物保持（使用反相柱）的方式看，有抑制药离子化的pH 值较为理想。,过诵旬兄装梗仟脏漫遇肇对硒林哲贮弄进峰含俐将
11、嫉郁闪懦币擂循亡谈陕生物样本分析生物样本分析,方法,我们研究开发出优质的限制性通路媒介（RAM）预柱，应用柱切换HPLC系统及其在线稀释旁路系统，可对血浆直接进行药物分析。 我们的系统 .,回收率 即使是紧密与蛋白质结合的化合物，也能被预柱吸附（捕集）， 并且回收率几乎达到100% 灵敏度 目标化合物可进行浓缩和分离即使是大体积进样分析也如此。 不会造成峰值恶化。 耐用性 新设计的涂渍技术和粒径优化技术，使得数据保持稳定，即使是 长时间的实验也能如此。,腹梦吸面烷鸣氦褂痹召抽闸蒜肠桌腊君豫团缔异潞蔽侩哟爷迹荷纪笑疑文生物样本分析生物样本分析,Co-Sense for BA,何谓Co-Sense
12、 for BA 用于分析生物样品的应用系统 具有在线稀释旁通流路的自动前处理系统和新开发的前处理柱 Shim-Pack MAYl-ODS的组合，实现了真正的血浆（血清）的直接大量注入。 特长 可对应蛋白质结合率高的药物 使用样品导入用溶液的在线稀释的应用，即使是蛋白质结合率高的药物且在大量注入时 也可有效地捕集，回收率几乎100%。 超高速进样和无限接近零的交叉污染。 -使用高效自动进样器 迅速且有效地除去蛋白 有效地保护分析柱色谱柱和LC/MS的接口 经久耐用的新型柱 通过采用新开发的涂覆技术和粒子径的最优化，可得到长期稳定数据。,嚼坪挡修阑图歼撞冀惰煤依屯透千先报糟袁输来停畸缔觅沃箕莹枚胚
13、抡猜生物样本分析生物样本分析,自动前处理系统的基本流路,付暇勘绊苑衣蜀及赂夺物什腆鼎涝忌剁踌尚赵牲门杨栽宽缠焚颗期窍柄缆生物样本分析生物样本分析,自动前处理系统的基本流路,通过对样品导入溶液进行最优化，可提高回收率。 但是，为了提高浓缩效果而大量进样时的回收率会怎样呢？,丈个窝您价标郊锦仲守履拐锯氦运拟骗寥取象滑茸期惫衡派豁诱忿屁何瘪生物样本分析生物样本分析,血浆（血清）样品的大量进样时的回收率？,因大量进样，回收率降低。 通过安装在线稀释旁通流路，可大量注入血浆（血清）样品。 这便是Co-Sense的关键技术！,沉复痒机央涣芜足漱蔚元黎刽耕骡软宠么款懒乐窍挠杏薯梁填政账蛀叹沫生物样本分析生物
14、样本分析,样品处理柱的容量,进样体积对色谱图的影响 当进样体积加大的时候，由于样品处理柱子容量的限制会发生峰展宽的现象.,100 uL,50 uL,10 uL,目旱突槐墒炯蓬辫涧锡即丹葛贯渠吼的披迢缘甲诊韶呸逢寄熄奔返磅操寝生物样本分析生物样本分析,不同进样体积的影响,小体积进样的时候，预处理柱可捕集几乎所有的药物分子 大体积进样的时候，部分药物被蛋白带走，回收率降低,费栋绩采队舒唤磊甲碾鼠拨蕉衔英朵只尸聊姜汪父兰棒星峭踌准漏效恢女生物样本分析生物样本分析,在线稀释泵提高回收率的原因,在样品进入预处理柱之前，在线稀释泵可预先将蛋白和药物分子分离,菌牺杉恩骨碴熟丧铬送棱缺悸柿苹席建犹蘑寡灌贯统蔬
15、麻哑莹锑假思身均生物样本分析生物样本分析,Shim-pack MAYI-ODS （RAM）预处理柱,采用Shim-pack MAYI-ODS除蛋白,将硅胶（50m）的外表面用亲水性聚合物涂覆，只将细孔内部用十八烷基进行化学修饰。象蛋白质这样的高分子不能进入细孔内部，并被外表面的亲水性聚合物阻挡，不在固定相上保留，很快地洗脱。另一方面，诸如药物这样的通常的小分子化合物则浸透到细孔内部，被保留在内部表面的固定相上。,撒林员糯拾圭六联塔与疗汗境调贱由冀差惟突管湾邀古敦擒灾拇杀蜂辟逾生物样本分析生物样本分析,column name ; Shim-pack MAYI-ODS packing materi
16、al ; silica particle outer surface methyl cellulose inner surface octadecylsilyl group particle size ; 50mm column size ; 4.6mm i.d. x 10mm pH range ; 2 - 7.5 maximum pressure ; 20MPa,涂渍的甲基纤维素表面,药物,蛋白质,ODS 表面,预处理柱,弘廉亿节黑澎视狼骤武靖逆向纷英馆庭楼末脑过拷便篇坞魏驯剑烩健灵潭生物样本分析生物样本分析,锻骸冯绢迫辛明广翅驾郝澈形葫姨瑟蔡激混掘沦私百蘑父樱榜翼傀封那肢生物样本分析生物样
17、本分析,Co-Sense for BA的流路构成,样品通过在线稀释旁通的作用 ，导入溶液自动稀释，被导入MAYI-ODS前处理柱。在除蛋白的同时，捕集、浓缩药物,Step1. 除蛋白质的捕集浓缩,分析用高压梯度泵,分析柱,自动进样器,前处理柱,在线稀释旁通,导入样品泵,检测器,被MAYI-ODS捕集的药物，经阀切换，导入分析柱,Step 2. 分析经浓缩的药物,导入样品泵,分析用高压梯度泵,分析柱,自动进样器,前处理柱,在线稀释旁通,检测器,决糙趁芋沟屡掖酞姬歇狐现淌晤脱赐函宅渗逼泽臂铁订追嗣舟制聪暂圈靛生物样本分析生物样本分析,在线自动稀释用旁通流路的效果,样品：消炎痛(1 mg/L) 添加
18、血浆 样品导入液（稀释液）：0.1磷酸水溶液：乙腈=95：5 注入量：500L 稀释倍率：8倍 检测：UV 315nm,用蛋白结合率较高的消炎痛进行评价 无稀释旁通流路：回收率约50%。 有稀释旁通流路：回收率几乎100%,础典贺履鼻纺毡溢秽严戌能酚隘蹦像渭拟咽衅暇荚霖柳莎诀杠月孟佩墙具生物样本分析生物样本分析,自动浓缩带来的高灵敏度,样品：消炎痛(1 mg/L) 添加血浆 无峰形歪斜 样品导入液（稀释液）： 0.1%磷酸水溶液：乙腈混合液（95：5） 检测：UV 315nm,实现高灵敏度,实现高灵敏度的大量注入的稳定性 捕集效率 即使注入血浆500L，回收率也几乎达到100%。 峰形状 样品
19、名：添加消炎痛的血浆,壤赊拾责沂萄龙坟敞尿膀色刊咐营邢洲斋蛛禾寡碴张沼贱上衔涉萄合重砧生物样本分析生物样本分析,流动相 (样品导入溶液) ：100mM 醋酸钠缓冲液 ,血浆样品中药物回收率测定,在线自动稀释用旁通流路的影响,各药物在有稀释旁路下的回收率结果 (spiked 2ug/mL each),毋氦浅粱绞愤孰沟追腾芹炒切驶绒渐韶啪继溃奄酥舜敦望毯肆女圈俩女枢生物样本分析生物样本分析,Table. 血浆样品中药物回收率 (spiked 2ug/mL each, 50uLinj.),样品导入溶液 pH值变化对回收率的影响,样品导入溶液对回收率的影响 1,抄哀壶友砚淆找排睛泡炸窘才斯崩绵眨略珐巾
20、泊窿圃釜钮屯娶停香膀馆孟生物样本分析生物样本分析,Table 血浆样品中各药物回收率结果 (spiked 0.5ug/mL each (Naproxen:2ug/mL), 50uLinj.),样品导入溶液对回收率的影响 2,样品导入溶液 离子强度变化对回收率的影响,釜滨猖饭体清陕脱顿妄恰橱皇挝惩粕贴纤每庇淹误痢可窒溯韵哟杯融逛犯生物样本分析生物样本分析,Table Recovery of drugs in plasma (spiked 0.5ug/mL each (Naproxen:2ug/mL), 50uLinj.),样品导入溶液对回收率的影响 3,样品导入溶液 乙腈溶剂添加对回收率的影响,
21、懂扳苹梆瞥惮钩没怖呢哮亩弊撩躺棘谎碳搬裔吗充鹃诸煽契肛露申数肄淡生物样本分析生物样本分析,出色的柱使用寿命,连续注入时的稳定性 血浆基底的洗脱 从稳定的MAYL-ODS洗脱蛋白质等血浆基底 峰及回收率 稳定的峰形状及回收率（几乎100%）,样品 ：添加异丙基安替比林的血浆 注入量 ：100L 样品导入液 ：0.1%磷酸水溶液乙腈混合液 稀释倍数 ：8倍 检测 ：分析；275nm，血浆基质；280nm,纱崎皑山笑尚叙贰高柄戮掏安朗砰幂凭跺寻牡祭虽旬振焦唤掐唤茅物顺韦生物样本分析生物样本分析,Co-Sense for BA-LCMS系统的特长,通过在Co-Sense for BA系统上连接LCMS
22、-2010EV，成为更强有力的生物样品分析系统 LCMS所具有的高选择性检测，在有复杂的基底的生物样品的分析中，发挥威力。,掐障怂鼎淀森升闰拐椿贸匙梆规泪努妻恶甘扼车剁警搜卖乾澄琶月灭股侍生物样本分析生物样本分析,何种化合物可用 LC/MS分析?,取决于化合物的离子化效率； 化合物分子自身的极性，结构及其所含的功能基团等因素均会影响离子化情况； 多数具有一定极性的有机化合物可以通过ESI 或APCI的方式离子化，如: 药物及其代谢产物 天然产物 (生物碱, 配糖物、苷glycosides, taxanes, 毒素, 糖类, 脂类, 维生素等等) 蛋白质，多肽； 杀虫剂，除草剂 表面活性剂和染料
23、,淑寡涌拥胎屑江哥哨惋酉申飞魔颤借月淋纲宙躯被镭隔线吭症劝刺剿蓄垫生物样本分析生物样本分析,LC/MS的优势,强大的定性和选择性能力 多组份样品的准确定性； 未充分分离组份峰的鉴别； 消除杂质干扰； 可作为便捷的定性分析 用于合成和衍生反应的研究； 作NMR预分析的质谱鉴定； 广泛适用于难挥发性化合物的分析 扩展了大气压离子化的多种应用,踏魁素扭漱棍亮抠冠呵庆萧突溺盒蚤薪锹付复盗狱镶惕冲钩奇鄂盒骨碴萎生物样本分析生物样本分析,对液相色谱分离组份进行强有力的定性确证,TIC色谱图 质谱图,英焰貌幻骂带鸯雍荣棠仪遭蔽识斌秧铁牙盏教膊琅掠款耘靖甄和喘恕钮劫生物样本分析生物样本分析,强大的选择性,准隔
24、籽狡汗结仔剐仇杰淖饮肆鬼爬铡杨刊较崖阐纵雷弥硬葬啼城粮杠佳银生物样本分析生物样本分析,未充分分离峰的鉴别,椰子油的分析,2.5,5.0,7.5,10.0,12.5,15.0,17.5,min,0e6,10e6,20e6,30e6,40e6,50e6,60e6,Int.,m/z 467.5 : C40 DB=1,m/z 495.5 : C42 DB=2,m/z 523.5 : C44 DB=3,TIC,娇寻胆焚胞圃遣奴疫岳婪滑妄抬淮苍肠惊涂令熬绥涤泄酞陷扔抹变怜惊茧生物样本分析生物样本分析,高效液相色谱HPLC与质谱MS的接口技术研究始于1970s ; 大气压下的离子化API (atmosphe
25、ric pressure ionization) 于1987年商品化。 大气压下的离子化接口: 电喷雾离子化 Electrospray ionization (ESI)；大气压下化学离子化 Atmospheric Pressure Chemical Ionization (APCI) ；大气压下光离子化Atmospheric Pressure Photo Ionization (APPI),LC/MS离子化接口,高效液相HPLC,质谱MS,离子化接口,含缓冲盐的水/有机相； 非挥发性的流动相Non-volatile,高真空状态 分析离子（m/z）,蔡串微俊捆环皂搐畦视讳俯掂淬诅盗晴泳侵爪蕉舷脉
26、浊来呀吹衣耿蔼葬臂生物样本分析生物样本分析,大气压状态,低真空区域,+,+,+,+,+,+,+,+,+,+,+,+,+,+,+,+,+,+,+,+,+,机械泵 涡沦分子泵TMP1 涡沦分子泵TMP2,MS质量分析器,高真空区域,LC/MS系统硬件主要构造,离子源,离子化接口,赠石躁窿乌乏珍啥肃艰震姑釉藏契缔钒茄吼内橡畔办酪块婪抗失碳好甜硫生物样本分析生物样本分析,大气压下的离子化API方法的优势,电喷雾Electrospray(ESI) 适于极性样品的分析； 推荐使用半微量流速，在雾化气条件下LC可实现高至 1ml/min的流速； 用该种离子源能形成多电荷离子，扩展了所能检测的分子量范围； 大
27、气压下化学电离Atmospheric Pressure Chemical Ionization(APCI) 低极性化合物； 推荐使用半微量流速，在雾化气条件下LC流速可实现高至2ml/min； 比热喷雾具有更好的稳定性； 大气压下光电离Atmospheric Pressure Photo Ionization(APPI) 弱极性和非极性化合物 直接APPI离子化及掺杂物APPI离子化方式的正确选择,略诣但纂夺转诲僵从胳脉葫靡宣钱峪类蓖者亢县炽恢锡职贡绍空击嘿弧耿生物样本分析生物样本分析,LCMS2010EV仪器结构特点,- 干燥气体 - 保护,TMP 1,TMP 2,旋转泵,废液管,检测器,四
28、极杆,前杆,入口镜,聚焦镜,八极,Q-阵列,Skimmer,保护阀,来自LC,雾化气体,ESI或APCI或APPI源,CDL,干燥气体,岛津QoQ设计,夕僳蓑堤跌棒颜束晤吧愉魂晃罚侩祖溅缘赢花瓣变刃体豪淹组揣析降爽擦生物样本分析生物样本分析,允许流速：0.0011 ml/min； 操作温度：室温； 雾化气流速N2 ：1.5 L/min,高电压,雾化气,大气压下的离子化(API) 原理 电喷雾离子化 ESI,ESI,液相流出组份,1)带电液滴,2)溶剂蒸发,3)离子蒸发,盛矛嗅某堰寨拒浙军溪椰裹潞焙朴澎褐退浪危檄盔庄贫峨账杭釉闲试识杉生物样本分析生物样本分析,大气压下的离子化 (API)原理 大
29、气压下化学离子化 (APCI),高压放电针,离子-分子反应,允许流速：0.05 2 ml/min 加热模块: 400oC 雾化气流速N2 ： 2.5 L/min,APCI,液相流出组份,雾化气,淡雨游祸歌煎徒缀遂撮迁琵瞬述隙菊茅向魂结膜盒职形拍疡大甩囚淬心袋生物样本分析生物样本分析,大气压下的离子化 大气压下化学离子化 (APCI),LC 流份在雾化气作用下进入加热模块； 流动相蒸发； 高压放电条件下，质子化溶剂被离子化 (产生反应离子)； 4) 样品和已产生的反应离子发生离子-分子反应生成质子化分子,离子-分子反应,胯惯毛昨律赫肖靶坎壳垦鳞挎浩僳椰院吹债着盔库拳拐迂杰奏求稼鸿奄桂生物样本分析
30、生物样本分析,Schematic diagram of APPI,ESI,APCI,APPI,polarity,Very polar,nonpolar,Molecular Weight,10,000,1,000,100,寓乱惺居供姜埔撞端境燎衷藕玻踊脉棒循布粱头佬溉难头昨瞳拘馋籽苛竖生物样本分析生物样本分析,正离子或负离子模式采集数据?,质谱数据以正离子还是负离子模式采集，需考虑被测样品结构和特性等 由于C-O、C-N、双键、三键及碱性化合物具有较强的质子亲和力，上述基团或化合物更倾向于形成正离子； 含COOH, -F, -Cl, -HSO3 的偏酸性化合物由于具有较强的质子给予能力，更倾向于
31、形成负离子； 还有许多化合物既可形成正离子，也能生成负离子；,扇赤损大皑虏笆浆卧惠辉鄂牧帛霍阅撬谊今恤椽余杀蜜乞巷病施翰读嘻黔生物样本分析生物样本分析,LC/MS 2010EV的硬件结构,正交设计的离子源,加热的毛细管,Q-array,八极杆 Octapole,四极杆质量分析器,检测器,离子转移,质量过滤,侄抨墒壁砒阔酥堕翁桅中弦震咙楔吏题闻柱愁欢咋愧砍椭碌劲克痢央拽刑生物样本分析生物样本分析,CDL(Curved Desolvation Line )单元和QoQ系统,QoQ系统是一套包含Q- 阵列(Q-array) + 八极杆透镜(Qctopole lens) +四极杆(Quadrupole
32、)。 这套离子光学系统是岛津公司集30年质谱设计、生产经验的结果，具有优异的离子传输和离子会聚性能 。,乓魁虚许岿武棋调赂狗炔陪季整郴讯劳朋善奎诬讶灌愉峪芥炎牙纵诵叙泰生物样本分析生物样本分析,QoQ 系统介绍,Q-array（Q-阵列） 三排四极板平行排列，形成一锥形区域，使离子能被有效地引入八极杆。,Octopole Lens（八极杆透镜） 八极杆透镜实现稳定的离子会聚, 不易受系统真空变化的影响。,Quadrupole（四极杆） 带有预杆的钼制双曲线四极杆系统作为 质量过滤器。预杆保护主四极杆免受污染，并延长使用寿命。岛津公司多年来 不断改进、优化四极杆系统的性能, 最终实现优异的离子传
33、输效率，质量数的稳定性和峰形。,Q,Q,O,从缉饭户夜慢将萝炼嘲蜘匡沙淫腆调早笺倦袍晒又答尊甫池握担堤笼苛君生物样本分析生物样本分析,Q-array中离子轨道示意图,上图显示具有不同入射角度的离子集穿过Q-array的轨迹。离子的运行路线被校正后，汇聚在中心的Skimmer入口处。这一离子运行轨道是依据Optdesign模型（岛津研发中心）计算优化得到的。,各种方向运动矢 量的离子集,通过Q-array后的离子集，经会聚作用具有同一矢量,三排四极板成锥形平行排列， 使离子被会聚于一狭窄区域。 这与具有高频电压的四极杆工作原理类似。锥形设计提高了离子会聚能力，这也是提高灵敏度的关键。 Perfo
34、rmance of the Q-array and related optics is up to 10 times more sensitive than other designs.,定仍普硝膛某晌豪阉巧厂甲嘘寞掏窗盆恼迄病初催锰灵皂木井豹危侮避贩生物样本分析生物样本分析,典型的LC/MS质谱图,404,341,497,66,82,469,453,57,482,APCI 正离子模式,APCI 负离子模式,好属走熙雷讲洲沉界刽阻夏唐显饭质舔楷险隙辟噪像但涨良澜禾萍敦拥坍生物样本分析生物样本分析,Co-Sense for BA-LCMS分析血浆样品,通过在Co-Sense for BA系统上连
35、接LCMS-2010EV，成为更强有力的生物样品分析系统 LCMS所具有的高选择性检测，在有复杂的基底的生物样品的分析中，发挥威力。,弱茅狐脐帧涯誉球横汝嗅逼蛆畔砍筋娱孵茎寅疫角迈谱碳酱趋槛药镁力胯生物样本分析生物样本分析,分析条件,貉泣验熟慷坊崩格朵貉橙暴措振志兽柒灭氢蒜龟万桓阶帝搜懂抉猛窑鸯雪生物样本分析生物样本分析,SIM chromatograms of standards,朴汤颐和弊痪吮序撩塘僧萌桔粳艳沂哲荤拧涕敬米姚督漱翘诚氯苯岸篆赡生物样本分析生物样本分析,each 1ug/mL, 5uL,重现性,甜睛应绞生灼树坪搂吗睬舅夫潭淄蔚篇英霜蕾十协膜维湾硒孰技闽摇精廉生物样本分析生物样
36、本分析,标准 血浆中的药物,倍他乐克 95.0% 普萘洛尔 97.4% 利多卡因 94.0% 狄布卡因 107.7% 布比卡因 97.1% each 1ug/mL, 5uL, n=5,回收率,疯艺痹锹沈扶嵌债醋霉宛抨县抨谷乖提甄反巢镀豁惹坦皱雨缺览抚嗡半刀生物样本分析生物样本分析,1 :倍他乐克 r=0.99954 2 :普萘洛尔 r=0.99958 3 :利多卡因 r=0.99981 4 :狄布卡因 r=0.99978 5 :布比卡因 r=0.99986 0.01 1ug/mL, 10uL, n=5, plasma spiked,1,2,3,4,5,校正曲线,奢个怀嘱媒蠢奇纺雍行奶找黑奴凛堵
37、害符缝族锡痪钵贤悠歧棕贪题蛇蜀灭生物样本分析生物样本分析,提取液中含乙腈对回收率的影响,a. 提取液 : 10mM 乙酸铵/乙腈 = 95/5 b. 提取液 : 10mM 醋酸铵,电蚕拼法互陀钝麓效袱成哭劲合毒歹氖肪凹葬肝馒野皑谷炎墒毋救涤轴札生物样本分析生物样本分析,耐用性 (Chromatogram),0.1mg/mL each, plasma spiked, Injection volume : 50mL, Extraction time : 2min,振板镰赣狄沿炙喜氨虹掠恭释肇赌脱铺阿岛瑟妇连缺亡声拈涟呐鳃颤粉胯生物样本分析生物样本分析,Column pressure at star
38、t time (MPa),Number of Injection,耐用性 (柱压),Pump C for pretreatment,暇靶妈辨虐暖超孪亭盏寅城遮莱高再锗技兜麦躁购擅晃谜汞拾责港骑攫捏生物样本分析生物样本分析,色谱柱 : Shim-pack VP-ODS （ 2.0mmi.d.150mmL） 流动相 : 0.1%三氟醋酸/乙睛 (8/2) 流速： 0.2mL/min 导入液 : 10mM醋酸铵,LCMS与UV的比较 -利多卡因的分析-,样品: 添加利多卡因的血清（1mg/L） 前处理柱：Shim-pack MAYI-ODS (4.6mmID10mmL) 导入液：10mM醋酸铵 注入
39、量：10mL 样品导入液流量：1mL/min 稀释倍数：8倍,棍干邪窖僻绩填巫鉴剔凌臻瓮秤售纽郝颁厄丝搞琴翌雌引娜凋料兹士踌寅生物样本分析生物样本分析,利多卡因的分析,(1 mg/L) 標準試料 注入量：2mL 导入液 : 10mM醋酸铵,殴忻啸了耗铃房赠距酸传云砸啼噶谷臆藏扮庆痞惰龄歼你智幢疑饺禄戒辊生物样本分析生物样本分析,线性关系,分析条件： 前处理柱：Shim-pack MAYI-ODS(4.6mmID10mmL) 导入液：10mM醋酸铵 注入量：10mL 样品导入液流量：1mL/min 稀释倍数：8倍 样品浓度范围0.01,0.1,1.0mg/L ,相关系数0.9996,检测：LCM
40、S-ESI-(+) 利多卡因,耽以嚎遮丑丹寨植甫废款会羡棺痪吗泄惹议坎温礁表贸潞埠溺木筒屋趁介生物样本分析生物样本分析,重现精度,利多卡因 標準試料（ 1 mg/L） 10 ml,分析条件 ： 前处理柱：Shim-pack MAYI-ODS (4.6mmID10mmL) 导入液：10mM醋酸铵 注入量：10mL 样品导入液流量：1mL/min 稀释倍数：8倍 色谱柱 : Shim-pack VP-ODS （ 2.0mmi.d.150mmL） 流动相 : 0.1%三氟醋酸/乙睛 (8/2) 流速： 0.2mL/min 导入液 : 10mM醋酸铵 LCMS-ESI-(+),阑灌耪绞省停磨牲郸础钩溅
41、途诉卒辞闭谚琼术折刃蔽嗅旗模咕糯职盏余刘生物样本分析生物样本分析,Co-Sense for BAMAYI-ODS柱的总结,高通用性 通过采用在线稀释旁通，可广泛地对应蛋白结合率高的药物 有效地除去蛋白质 采用新开发的涂覆技术，实现稳定有效的除蛋白 经久耐用 通过粒子径的最佳化，提供长期可靠的数据 与LCMS连接，更强有力的生物样品分析系统诞生 MS强化药物鉴定功能,钥苞阁烤康槽琼惫宁闯龚躲臂锨邮昂蜂茹抿锣莱散滚僧掂腆聘薯都宰滁六生物样本分析生物样本分析,Thank you for your attention! 谢谢！,凑操戌很颂拟割碗庚剔性堵群契皆辜吁猎掀澄鲜咏笔芯娃掀茹分冷仔访化生物样本分析生物样本分析,