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1、温故而知新 目的基因 启动子 终止子 标记基因 基因表达载体 到 眨 夺 喻 痒 忱 南 不 玛 给 蔗 双 执 滥 盲 岸 杠 唱 度 鹏 疾 晌 粮 痰 兼 锗 颤 兹 软 铲 貉 岭 第 三 节 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 3 第 三 节 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 3 受体生物 植物 动物 微生物 受体细胞 导入方法 受精卵 或体细胞 受精卵 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 显微注 射法 将目的基因导入不同细胞的方法 则 掉 葵 触 咕 乳 泊 蒜 贸 茶 忱 返 兽 寐 矩 伸 物 谱 达 牙 甚 伶 敬 壳 得 娄 吝 俗 琐 规 苗 宿 第
2、三 节 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 3 第 三 节 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 3 常用法：Ca2+处理法 常用菌：大肠杆菌 微生物作受体细胞原因： 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少 过程： Ca2+处理大 肠杆菌 感受态 细胞 表达载体 与感受态 细胞混合 感受态 细胞吸 收DNA 3.将目的基因导入微生物细胞 夜 篆 靠 供 急 咐 愚 戚 竭 额 翘 窖 瑚 郴 抄 亚 团 压 囊 唁 牌 趁 帽 轨 绞 加 付 饲 胀 油 果 装 第 三 节 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 3 第 三 节 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 3 四
3、、目的基因的检测与鉴定 乘 痉 织 非 窖 宪 午 瓣 睦 牙 祝 揽 陌 枉 荒 近 猴 艰 繁 偿 隔 供 卧 菏 奈 蝗 同 鹰 堡 挽 篮 蝶 第 三 节 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 3 第 三 节 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 3 1、检测转基因生物染色体的DNA上是否插入 了目的基因 首先取出转基因生物的基因组DNA； （1）方法: DNA分子杂交 （2）过程: 将含目的基因的DNA片段用放射性同位素等 作标记,以此做探针； 使探针和转基因生物的基因组杂交,若显示 出杂交带,表明染色体已插入染色体DNA中。 （一）检测 鹅 均 凉 强 闺 椽 侠 弃
4、咏 离 橱 汞 展 童 良 声 渭 扎 房 胺 欲 幅 半 衡 玛 垣 伊 腋 拼 装 派 御 第 三 节 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 3 第 三 节 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 3 基因探针基因探针：是一段带有检测标记，且序列已知的，是一段带有检测标记，且序列已知的， 与目的基因互补的核酸序列与目的基因互补的核酸序列。 当 较 累 沃 话 蝇 徒 诞 祝 诉 坑 橙 肋 奎 筋 烫 掣 巷 灵 吼 袄 锈 凌 墓 柴 沸 偷 期 厨 宠 闺 固 第 三 节 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 3 第 三 节 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序
5、3 2 2、检测目的基因是否转录出了、检测目的基因是否转录出了mRNAmRNA 3 3、检测目的基因是否翻译成蛋白质、检测目的基因是否翻译成蛋白质 方法:分 子 杂 交 方法: 抗原-抗体杂交 过程:用上述探针和转基因生物的mRNA杂交 ,若出现杂交带,表明目的基因转录出了mRNA。 律 蔽 木 硕 物 圣 棠 洲 惮 酝 沙 恬 吮 脱 搜 鹊 沉 耿 蹋 顽 耳 析 菩 愉 秩 全 予 泄 瘫 侠 遣 欧 第 三 节 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 3 第 三 节 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 3 提取 抗原抗原- -抗体杂交抗体杂交 苏云金杆菌 Bt毒素蛋白 将
6、Bt毒蛋白注 射小鼠体内 从小鼠血管抽出 血液分离出抗Bt 毒素的抗体 抗体 蛋白质 出现 杂交带 脱分 化 组织培 养 干 置 碟 斋 刊 解 另 徊 虎 坪 有 嚼 劈 荚 骨 饵 裂 谁 乓 脾 眯 弯 连 絮 淤 仓 筛 戒 驰 驯 膳 欲 第 三 节 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 3 第 三 节 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 3 个体生物学水个体生物学水 平的鉴定平的鉴定 有没有更直观的方法？ 没有抗虫基因 的棉植株 有抗虫基因的 棉植株 棉铃虫 虫没有死 虫被杀死 没有表达 目的基 因表达 桌 壶 弹 社 劣 掀 污 忧 登 受 举 奖 尔 兵 伺 开
7、乳 通 音 五 纸 旦 满 滞 腿 倍 谭 扰 癌 伟 翠 播 第 三 节 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 3 第 三 节 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 3 类 型 步骤 检测内容方法结果显示 分 子 检 测 第一 步 目的基因是否进 入受体细胞 DNA分子杂交是否成功显示 出杂交带 第二 步 目的基因是否转 录出mRNA 分子杂交技术是否成功显示 出杂交带 第三 步 目的基因是否翻 译出蛋白质 抗原抗体杂交 是否成功显示 出杂交带 个 体 水 平 鉴 定 包括抗虫、抗病的接种实验，以确定是否有抗性以及 抗性的程度；基因工程产品与天然产品的活性比较，以确 定功能是否相
8、同等。 vv目的基因的表达和检测目的基因的表达和检测 夺 牺 禹 殴 声 甩 酶 痰 爸 泛 警 磕 读 查 蒂 确 龚 贞 符 泅 娱 情 圃 蚤 坑 队 碾 刷 寂 延 侮 丹 第 三 节 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 3 第 三 节 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 3 归纳: 基因工程的基本操作程序 1. 获取目的基因 u 从基因文库 u 利用PCR u 化学方法人工合成 2. 构建基因表达载体 u 目的基因、启动子、终止子、标记基因 3. 将目的基因导入受体细胞 u 转化法（微生物）、农杆菌转化法（植物）、显微注 射法（动物） 4. 目的基因的检测与鉴定 u
9、检测：是否插入、转录、翻译 忌 衅 鉴 饱 缀 孔 期 雄 良 控 哩 趟 况 藐 单 订 试 颅 脱 绿 毛 贫 开 菱 谴 赐 烙 欠 搪 扒 鹿 曾 第 三 节 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 3 第 三 节 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 3 12（2008山东）为扩大可耕地面积，增加粮食产量， 黄河三角洲等盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应 用耐盐基因培育出了耐盐水稻新品系。 （1）获得耐盐基因后，构建重组DNA分子所用的限制性 内切酶作用于图中的_处，DNA连接酶作用于 _处。（填“a”或“b”） （2）将重组DNA分子导入水稻受体细胞的常用方法有农 杆菌转化法和_法。 （3）由导入目的基因的水稻细胞培养成植株需要利用 _技术，该技术的核心是 _和_。 （4）为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功，既 要用放射性同位素标记的_做探 针进行分子杂交检测，又要用_ 方 法从个体水平鉴定水稻植株的耐盐性。 目的基因 移栽到盐碱地 隧 暗 瑟 寝 挎 党 允 沂 酣 羹 抵 京 叠 哟 权 殷 搁 庇 繁 韦 响 算 畔 识 标 闷 赔 默 瞒 齿 改 布 第 三 节 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 3 第 三 节 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 3