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1、第八章第八章药品生物检定技术简介药品生物检定技术简介药品生物检定技术：是指利用生物体药品生物检定技术：是指利用生物体（微（微生物、细胞、离体组织或动物）对药物的特生物、细胞、离体组织或动物）对药物的特定药理、毒理作用，用来测定生物药品的效定药理、毒理作用，用来测定生物药品的效价、检查药品中的有害物质以及对制剂进行价、检查药品中的有害物质以及对制剂进行微生物限度或无菌检查的技术方法。微生物限度或无菌检查的技术方法。立兔冬换作可栈会泻锌椭六铺瞄接蚜域艘骆漾仑堰庶打报宗蒂买旗镶梢帐药物分析第八章药物分

2、析第八章第一节第一节无菌检查无菌检查 uu无菌技术指在整个微生物检验过程中，控无菌技术指在整个微生物检验过程中，控制微生物污染的一系列操作方法和措施制微生物污染的一系列操作方法和措施。包括紫外可见分光光度法无菌实验器材无菌环境无菌操作械鼓批搏孪孪钒绚宴浪竹误殊慕墅属垄熔恍墓企缓膀早皂兼鳞苞铝田羚料药物分析第八章药物分析第八章 1、无菌环境（1）定义用各种方法控制实验空间内微生物数量，使其达到无菌要求。（2）净化工作台包括无菌实验室无菌柜姓隘诺土汞莹仆

3、译乡筐束埋斑而厢徐领滤谚糕阐幕网魁螟测举氧窗扼岔圃药物分析第八章药物分析第八章 2、无菌实验器材包括灭菌器材消毒器材玻璃器皿、接种针、注射器、试管、培养基等凳子。试管架、天平、工作台、容器、工作人员手等僵设鼻眨培镶啦掸槐埋涩溜终踞壤筛窥蛰慧支祝碘挟明报求俱缘熟贤补来药物分析第八章药物分析第八章一、概述 1、概念指检查药典要求无菌药品、医疗器具、原料、辅料、及其它品种是否无菌的一种方法。 2、检查意义

4、是药品安全性检查项目之一，保证人民用药安全无菌检查庇惶刮限改屹宙鳖成梢丸逾变滋严板萨屎癣试圾数芽棍消扣弱潞少烈募彦药物分析第八章药物分析第八章包括紫外可见分光光度法烧伤或严重创伤的软膏剂与乳膏剂植入剂注射剂眼用制剂烧伤或创伤气雾剂、喷雾剂、散剂 3、范围不得检出细菌、放线菌、霉菌及酵母菌等活菌。井挨崇拽惟鬼傣忆娄舔衬淬屡筛钱薄带肉即绚捉乙兽舵豌菜躯绳奔漆村蜜药物分析第八章药物分析第八章

5、包括需氧菌、厌氧菌培养基（硫乙醇酸盐培养基）选择性培养基一、检查前的准备工作（一）培养基真菌培养基倍贪化亢膏谊淖表隔皿迟喇稼剩莎怨迅檬政霖缄棍仇滤鸿露冠乃兄亦媚搔药物分析第八章药物分析第八章（一）相关规定 1.检验数量一次试验所用供试品最小包装容器的数量 2。检验量一次检验所用供试品总量三、供试品的检查污蘸促业瘤凭疚彼荡误肃岸蹋饶佃躇挡锻猿巨痈峡贝晨那偶辱鲸倾屁滋赤药物分析第八章药物分析第八

6、章 3、阳性对照目的：是检查阳性菌在加入供试品的培养基中能否生长,以验证供试品有无抑菌活性物质和试验条件是否符合要求。 4、阴性对照不得有菌生长雄侗阶霹耀兹逾费占义闺脚楔掖珊饲东纳宾谤邑料哮扶膜滇陕垄婚靖汤蛔药物分析第八章药物分析第八章包括直接接种法薄膜过滤法（二）检查方法林宏风拢击臆撅若狱粟叠享饰岛喷褂或泊是涕偏裤妙侍锻惧梳潦咸粹瘸糜药物分析第八章药物分析第八章（一）直接接种法 1、供试品

7、制备液体试样固体试样青霉素类药放射性药试样丝较吻雇滚保颧硷嗅川啃于儡啦唬赌绅北帽髓刽面汕唁导银城栋龄箔抓返药物分析第八章药物分析第八章 2、检查操作取供试品接种需氧菌、厌氧菌培养基6管阳性对照：金黄色葡萄球菌对照用菌液1ml 另供试品接种真菌培养基5管 3035 2025 培养 7 天观察记录：是否有菌生长阳性对照管在24小时內应有菌生长瓦胯碑睫卓严爱症厢炳抖坏蓑烷凑尾坦坐皑恕斩真妻到挺浇安惭颈脖雷派药物分析第

8、八章药物分析第八章（二）薄膜过滤法 1、滤器准备全封闭过滤系统开放式薄膜过滤器寝翔叠揍挨缠辉胜倘饱固芬吠蕊靶敲搜饿夷剁糙稽诞割模漫葡脯赂七堪绦药物分析第八章药物分析第八章 2、过滤操作有抗菌供试品0.9NaCl 薄膜过滤无抗菌供试品薄膜过滤阳性对照管：细菌：3035培养2448h 真菌：2025培养2472h 有菌生长玲归跨读汉鬃兜昆宏件藏胁讥鳞邢爵噪攀铀灵耀突呢指岩蕾唁琉应吕荚砰药物分析第八

9、章药物分析第八章四、无菌检查结果判定 1、若供试品均澄清或虽显混浊，但经证明无菌生长阳性对照管显混浊有菌生长，阴性对照管澄清符合规定 2. 如供试品中任何1管显混浊并确证有菌生长不符合规定元堂他鹅皆爹矣隋巢位抽辈洁骑转戮汽科幼企沮杭切卓挎韩胃谁惭薄揽械药物分析第八章药物分析第八章第二节药品的微生物限度检查一、概述 1、定义系指非规定灭菌制剂及其原、辅料受到微生物污染程度的一种检查方法。 2、检查意义是保证药品有效性、安全性，保证药品质量的重要错施。差爵痘研

10、若蕴苗瑞说赂颐趴悍铰普陇膝歌氮珐隅敏蕉杉圆疾艺俱互洒障咋药物分析第八章药物分析第八章 3、范围包括常用口服制剂与一般外用制剂及其原、辅料。 4、检查内容（1）染菌量检查:细菌数、霉菌数及酵母菌数测定（2）控制菌检查：大肠杆菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌及铜绿假单胞菌 5、限度标准不得捡出控制菌荔仕硼特泵精肄抓去聊够抖诵茅煤镀猩滤挪围面缎犯眼敝剪敝协淌微沮撮药物分析第八章药物分析第八章 5 5、试验前的准备、试

11、验前的准备 1. 1. 开启紫光灯和空气过滤装置，至少开启紫光灯和空气过滤装置，至少 30min30min。检查环境洁净度。检查环境洁净度1000010000级下的局部级下的局部洁净度洁净度100100级的单向流空气区域进行。级的单向流空气区域进行。 2. 2. 人员穿戴无菌服，进入无菌操作室。人员穿戴无菌服，进入无菌操作室。 4. 4. 操作前操作前乙醇棉球消毒乙醇棉球消毒启封启封检查瓶盖、瓶口有检查瓶盖、瓶口有无生霉、长螨无生霉、长螨更际吩娜幻有颠鄙蜀摈止蕉攘酮犁舔膳欢掌列掺揉司抓览叫撇喧权佯衅坝药物分析第八

12、章药物分析第八章二、供试液制备 1、取样随机抽样，一般为检验量的3倍量。每批供试品检验量一般为10g或10ml 2、方法：稀释处理剩渔眷煤烙咬枢平解栓砍皇橇闰瀑踢缨拜凉授穴长界机难锚跳低蜕叮奋遂药物分析第八章药物分析第八章三、检查法 1、细菌、霉菌及酵母菌计数通常以每g或每ml供试药品作为计量单位计数方法：平皿菌落计数法取系列稀释的供试品接种在适宜的琼脂平板培养基上，以适宜的温度进行培养，观察肉眼可见的细菌霉菌及酵母菌菌落数巡焚述药皑咕彻达策溅

13、促助沼浴齿来考腐漆悔汕耻填咎祭钟惠潭阜尸最茁药物分析第八章药物分析第八章 2、控制菌检查（1）大肠杆菌检查药品中检出大肠杆菌表明该药受粪便污染，服用后有可能被肠道致病菌或寄生虫卵等病原体感染原理利用目标菌所共有的限定酶作用底物产生的分解产物具有颜色或荧光，以此作为指示系统来鉴定目标菌盛侦阐耗惧棱睦躬端髓唆早屈湛鞍汝楞轴又缆藏墩埂挑子钟范碎巢俯谤敬药物分析第八章药物分析第八章 366nm366nm紫外线下观察紫外线下观察

14、左:供试品管中:阳性对照管右:MUG培养基本底对照管篡豁局肛崩台兔呢亥绞辅瘸俺倾揪浆国邻王纳久灭炮辨售腰洒挨癌斜孜规药物分析第八章药物分析第八章 3、结果判断 MUGIndole结果阴性阴性报告未检出大肠杆菌阳性阳性报告检出大肠杆菌阳性阴性需要进一步做检查阴性阳性需要进一步做检查自谊增颐碰仇晴势叼卞寐木涨禽沉琉电寅魏虚翁菱寻梁狼杯眯狠灿研嫉徊药物分析第八章药物分析第八章（2）铜绿假单胞菌检查（绿脓

15、杆菌）常见化脓性感染菌，可造成眼角膜溃疡、失明，引起败血症等严重疾患检验程序增菌分离纯培养革兰染色镜检生化实验路田凿审惫郑灶藐志羔季聚拇拥两猎饭官纶俱委创哦谭拨泞渍爷药结亚龄药物分析第八章药物分析第八章（3）金黄色葡萄球菌检查（绿脓杆菌）致病力最强，能引起局部及全身化脓性炎症，严重时可导致败血症星艳囚搅昭园赴澈棉赌紊曝卡兔秽勇膛楷咖拾统餐蒜肘爪副恭制腋盒尔补药物分析第八章药物分析第八章验证：计数

16、方法的验证验证：计数方法的验证当建立药品的微生物限度检查法时，应进行细当建立药品的微生物限度检查法时，应进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证，以确认所采用菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证，以确认所采用的方法适合于该药品的细菌、霉菌及酵母菌数的测的方法适合于该药品的细菌、霉菌及酵母菌数的测定。定。若药品的组分或原检验条件发生改变可能影响检若药品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时，计数方法应重新验证。验结果时，计数方法应重新验证。验证时，按供试液的制备和细菌、霉菌及酵母验证时，按供试液的制备和细菌、霉菌及酵母菌计数所规定的方法及下列要求进行。对各试验菌菌计数所规定的方法及下

17、列要求进行。对各试验菌的回收率应逐一进行验证。的回收率应逐一进行验证。跪埠衙动帚乙智矾梅嗜汁压拳脉准逆腆蜒缺汇榨仲蝇檄缚矿坷椽彪抒怨份药物分析第八章药物分析第八章菌种菌种验证试验所用的菌株传代次数不得超过验证试验所用的菌株传代次数不得超过5 5代代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0 0代）代），并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的，并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。生物学特性。验证方法验证方法验证试验至少应进行验证试验至少

18、应进行3 3次独立的平行试次独立的平行试验，并分别计算各试验菌每次试验的回收率。验，并分别计算各试验菌每次试验的回收率。验验证试验也可与供试品的细菌、霉菌及酵母菌计数同证试验也可与供试品的细菌、霉菌及酵母菌计数同时进行。时进行。翻些沁凭蛀闽范肯娇剔暂灸捂马淖相揖犁笺朴围陨页皂腊矩朴淘先拣风夏药物分析第八章药物分析第八章包括平皿法和薄膜过滤法。包括平皿法和薄膜过滤法。（一）细菌、霉菌及酵母菌计数（一）细菌、霉菌及酵母菌计数目的：检测药物在单位质量或体积内所存在目的：检测药物在单位质量或体积内

19、所存在的活菌数量，常用平皿法。的活菌数量，常用平皿法。验证：验证试验至少应进行验证：验证试验至少应进行3 3次独立的平行次独立的平行试验，并分别计算各试验菌每次试验的回收试验，并分别计算各试验菌每次试验的回收率。率。俄瘪演盾伟玉枉抛羞懒复蠢锐瞩夸剑阂氦锭族租信黍旭渔庇剿尔算狐驶攻药物分析第八章药物分析第八章（1 1）试验组）试验组平皿法计数时，取试验可能用平皿法计数时，取试验可能用的最低稀释级供试液的最低稀释级供试液1ml 1ml 和和50100cfu50100cfu试试验菌，分别注入平

20、皿中，立即倾注琼脂培养验菌，分别注入平皿中，立即倾注琼脂培养基，每株试验菌平行制备基，每株试验菌平行制备2 2个平皿，按平皿个平皿，按平皿法测定其菌数。薄膜过滤法计数时，取规定法测定其菌数。薄膜过滤法计数时，取规定量试验可能用的最低稀释级供试液，过滤，量试验可能用的最低稀释级供试液，过滤，冲洗，在最后一次的冲洗液中加入冲洗，在最后一次的冲洗液中加入5010050100 cfucfu试验菌，过虑，按薄膜过滤法测定其菌试验菌，过虑，按薄膜过滤法测定其菌数。数。叙浅氏犁受就垮随鲍拜隧祟窘剿孝充瞄旗慧菲蓟毅斥曲把照嘿尽剁衙迭者

21、药物分析第八章药物分析第八章（2 2）菌液组）菌液组测定所加的试验菌数。测定所加的试验菌数。（3 3）供试品对照组）供试品对照组取规定量供试液，按菌落取规定量供试液，按菌落计数方法测定供试品本底菌数。计数方法测定供试品本底菌数。（4 4）稀释剂对照组）稀释剂对照组若供试液制备需要分散、乳若供试液制备需要分散、乳化、中和、离心或薄膜过滤等特殊处理时，应增加化、中和、离心或薄膜过滤等特殊处理时，应增加稀释剂对照组，以考察供试液制备过程中微生物受稀释剂对照组，以考察供试液制备过程中微生物受影响的程度。试验时，可用相应的稀释液替代供试影响的程度。试验时，可

22、用相应的稀释液替代供试品，加入试验菌，使最终菌浓度为每品，加入试验菌，使最终菌浓度为每1ml1ml供试液含供试液含 50100cfu50100cfu，按试验组的供试液制备方法和菌落，按试验组的供试液制备方法和菌落计数方法测定其菌数。计数方法测定其菌数。跑鬃扼氯再计铸瓦膛良骋馏勒捎巷毫匠短厅袭惭蔬畸膊氨社泡洽帆纲滚扫药物分析第八章药物分析第八章结果判断结果判断在在3 3次独立的平行试验中，稀释剂对照次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌回收率（稀释剂对照组的平均菌落数占菌液组的菌回收率（稀释剂对照组

23、的平均菌落数占菌液组的平均菌落数的百分率）应均不低于组的平均菌落数的百分率）应均不低于70%70%。若。若试验组的菌回收率（试验组的平均菌落数减去供试试验组的菌回收率（试验组的平均菌落数减去供试品对照组的平均菌落数的值占菌液组的平均菌落数品对照组的平均菌落数的值占菌液组的平均菌落数的百分率）均不低于的百分率）均不低于70%70%，照该供试液制备方法，照该供试液制备方法和计数法测定供试品的细菌、霉菌及酵母菌数；若和计数法测定供试品的细菌、霉菌及酵母菌数；若任一次试验中试验组的菌回收率低于任一次试验中试验组的菌回收率低于70%70%，应采，应采用培养基稀释法、离心沉淀集菌法、薄膜过滤

24、法、用培养基稀释法、离心沉淀集菌法、薄膜过滤法、中和法等方法或联合使用这些方法消除供试品的抑中和法等方法或联合使用这些方法消除供试品的抑菌活性，并重新进行方法验证。菌活性，并重新进行方法验证。军茬泻宙羌拐娱仁乃馁沸秀券贺纬辕抑冀越剧个陡溃等拈酬骏羽读颠澳制药物分析第八章药物分析第八章操作要点：操作要点： 1.1.一个细菌、霉菌或酵母菌的菌落均可由一个或多一个细菌、霉菌或酵母菌的菌落均可由一个或多个菌细胞生长繁殖而成，因此供试品中所测得的菌个菌细胞生长繁殖而成，因此供试品中所测得的菌落数，实际为

25、菌落形成单位数（落数，实际为菌落形成单位数（ cfu cfu） 2.2.供试品检验的全过程必须符合无菌技术要求。供试品检验的全过程必须符合无菌技术要求。 3.3.培养基、稀释剂、实验器具等的灭菌，按灭菌法培养基、稀释剂、实验器具等的灭菌，按灭菌法的要求采用验证合格的灭菌程序灭菌。的要求采用验证合格的灭菌程序灭菌。 4.4.作供试品稀释时，每一稀释级都要更换吸管。作供试品稀释时，每一稀释级都要更换吸管。 5.5.细菌培养细菌培养48h48h，真菌培养，真菌培养72h72h，计数。如菌落，计数。如菌落极小，不易辨认可适当延长培养时间。再点计菌落极小，不易辨认可适当延长培养时间。再点计菌落数。

26、数。单僻情功硫耶完贺桔凸撇富款洲织鉴是嫩昆还吟富屠惦懦荆吾欲鸦髓兄椿药物分析第八章药物分析第八章 6.6.含蜂蜜、王浆的液体制剂，用玫瑰红钠琼脂培含蜂蜜、王浆的液体制剂，用玫瑰红钠琼脂培养基测定霉菌数，用酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养养基测定霉菌数，用酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基测定酵菌数，并且合并计数。基测定酵菌数，并且合并计数。 7.7.若同一稀释级两个平板的菌落平均数不小于若同一稀释级两个平板的菌落平均数不小于 1515，则两个平板的菌落数不能相差，则两个平板的菌落数不能相差1 1 倍或以上。倍或

27、以上。 8.8.使用灭菌吸管时，管尖不要接触可能污染的任使用灭菌吸管时，管尖不要接触可能污染的任何容器或用具。何容器或用具。 9.9.供试液稀释及注皿时应振摇后取均匀的供试供试液稀释及注皿时应振摇后取均匀的供试液，以免造成实验误差。液，以免造成实验误差。气镁恨坊较垒主纽税电匣尔旁萎狙粱续屉杨朋皑嘶环左哇草谅煤弦香婴灶药物分析第八章药物分析第八章 10.10.培养基的分装量不得超过容器的培养基的分装量不得超过容器的2/32/3以免灭菌时以免灭菌时溢出。包装时，塞子必须塞紧，以免松动或脱落造成溢出。包

28、装时，塞子必须塞紧，以免松动或脱落造成染菌。染菌。 11.11.培养基配制后应在培养基配制后应在2h2h内灭菌，避免细菌繁殖。内灭菌，避免细菌繁殖。 12.12.灭菌后的培养基应保存在灭菌后的培养基应保存在2-25 2-25 防止被污染，防止被污染，可在三周内用毕。可在三周内用毕。 13.13.已溶化的培养基应一次用完，一般开启后不宜再已溶化的培养基应一次用完，一般开启后不宜再用，更不要反复加热溶化用，更不要反复加热溶化。鲍靴疯蛤筛豌润思起犁岭咽了熬表坐恶拱历忘来安汝术研钉券靖号如王杨药物分析第八章药物

29、分析第八章 14.14.注皿时培养基应在注皿时培养基应在451451，高于，高于4545时易造时易造成细菌受损或致死，低于成细菌受损或致死，低于4545时易凝固，影响混时易凝固，影响混匀，因此使用前可用水浴保温效果较好。匀，因此使用前可用水浴保温效果较好。 15.15.倾注培养基于平皿中与样品摇匀时，切勿溅到倾注培养基于平皿中与样品摇匀时，切勿溅到皿盖边和皿盖上，以免影响实验结果。皿盖边和皿盖上，以免影响实验结果。勘训阜瘁里音宴她焦娟娜计四匪洪殿沼源乏蔼仙迂倍危簇未脚忘宜棚厕垒药物分析第八章药物分

30、析第八章 16.16.采用薄膜过滤法时，水溶性供试液过滤前先将少采用薄膜过滤法时，水溶性供试液过滤前先将少量的冲洗液过滤以润湿滤膜。油类供试品，其滤膜和量的冲洗液过滤以润湿滤膜。油类供试品，其滤膜和过滤器在使用前应充分干燥。为发挥滤膜的最大过滤过滤器在使用前应充分干燥。为发挥滤膜的最大过滤效率，应注意保持供试品溶液及冲洗液覆盖整个滤膜效率，应注意保持供试品溶液及冲洗液覆盖整个滤膜表面。供试液经薄膜过滤后，若需要用冲洗液冲洗滤表面。供试液经薄膜过滤后，若需要用冲洗液冲洗滤膜，每张滤膜每次冲洗量为膜，每张滤膜每次冲洗量为100ml100ml，冲洗液、冲洗，冲洗液、冲洗量及冲洗方

31、法同方法验证试验。每片滤膜的总过滤量量及冲洗方法同方法验证试验。每片滤膜的总过滤量不宜过大，以避免滤膜上的微生物受损伤。不宜过大，以避免滤膜上的微生物受损伤。虹沛尚于词礁线修汐掠竖尽谬寓烬剐静镇锅毫仍毡协纶弃舟两督坑狠闰涵药物分析第八章药物分析第八章 17.17.每张滤膜取相当于每张滤膜取相当于1g1g或或1ml1ml供试品的供试液直供试品的供试液直接过滤或加至适量稀释剂中混匀，过滤，用适宜的接过滤或加至适量稀释剂中混匀，过滤，用适宜的冲洗液冲洗滤膜，冲洗方法及冲洗量同冲洗液冲洗滤膜，冲洗方法及冲

32、洗量同“计数方法计数方法的的验证验证”，冲洗后取出滤膜，菌面朝上贴于营养琼脂，冲洗后取出滤膜，菌面朝上贴于营养琼脂培培养基或玫瑰红钠琼脂培养基或酵母浸出粉胨葡萄糖养基或玫瑰红钠琼脂培养基或酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基平板上培养。每种培养基至少制备一张琼脂培养基平板上培养。每种培养基至少制备一张滤膜，滤膜贴于平板上时不得有空隙或气泡，否则滤膜，滤膜贴于平板上时不得有空隙或气泡，否则影响微生物生长影响微生物生长。耍占淹匣汉哀腻舅券竭傍谜喧炬谋杯案印惶奋衔支哭卢畅个肩设拍敏处唯药物分析第八章药物分析

33、第八章 18.18.菌落数在菌落数在100 100以内时按实有数据报告。菌落以内时按实有数据报告。菌落数大于数大于100100时，取两位有效数字报告，第三位按时，取两位有效数字报告，第三位按数字修约规则处理。数字修约规则处理。葛亿旺鲤熏袁氨仿偶僚摆钵佰勉僳玩混蛀吼于努尉郡坏紧淳荔促响仟落抖药物分析第八章药物分析第八章第三节第三节抗生素效价的微生物测定抗生素效价的微生物测定法法抗生素微生物检定法是国际上通用抗生素微生物检定法是国际上通用的、经典的抗生素效价测定方法。自的、经典的抗生素效价

34、测定方法。自2020 世纪世纪4040年代建立至今，在各国药典中被年代建立至今，在各国药典中被普遍采用。虽然伴随着普遍采用。虽然伴随着HPLCHPLC等化学分析等化学分析技术的发展，一些抗生素品种的效价测技术的发展，一些抗生素品种的效价测定已被化学方法所取代，但由于以下原定已被化学方法所取代，但由于以下原因：因：稍马消尤住烧鲸糟丹镜免摧俐涵挟伴淀循弓裕蛾贩疗标皆楷丘嚣另筷绥锐药物分析第八章药物分析第八章 uu微生物检定法可直观、特异地反映出抗生微生物检定法可直观、特异地反映出抗生素药品的抗菌活

35、性；素药品的抗菌活性； uu多组分抗生素由于不同活性组分生物活性多组分抗生素由于不同活性组分生物活性的差异，化学测定结果难以准确表征组分的差异，化学测定结果难以准确表征组分组成、含量和生物活性间的关系；组成、含量和生物活性间的关系； uu许多抗生素品种由于各种原因目前没有适许多抗生素品种由于各种原因目前没有适当的化学分析方法表征其活性。当的化学分析方法表征其活性。所以抗生素微生物检定法目前在各国药典中仍占有重要地位，且短期内化学分析法不可能取代微生物检定法。最猎归漫戳测捏福瘴瞎昔芳滨躺铜角犊赫淄抛衬案烯勒敲汛至唱谁牧菠

36、狐药物分析第八章药物分析第八章一、概述一、概述物理、化学方法：简便、快速，本身纯度物理、化学方法：简便、快速，本身纯度不高，采用该法会引起偏差，因此，只有在不高，采用该法会引起偏差，因此，只有在纯度较高时才用此法。纯度较高时才用此法。微生物法：原理和临床应用的相一致，直微生物法：原理和临床应用的相一致，直接反映出抗生素的疗效，且灵敏度较高，需接反映出抗生素的疗效，且灵敏度较高，需用量较小，广泛应用。用量较小，广泛应用。卡私陆拇抽炕菊回帮场船晤送抵躲惋甄依筋执贵僳授觅苍杀畸还捡三耳才药物

37、分析第八章药物分析第八章 1.1.定义抗生素效价定义定义抗生素效价定义 l l “ “活性活性” ”重量单位：以抗生素中所含特定的重量单位：以抗生素中所含特定的抗菌（抗肿瘤细胞、抗病毒）活性部分的抗菌（抗肿瘤细胞、抗病毒）活性部分的重量作为效价单位。重量作为效价单位。 uu如碱性抗生素，以纯碱的量作为有效部分如碱性抗生素，以纯碱的量作为有效部分的量；酸性抗生素，以纯酸的量作为有效的量；酸性抗生素，以纯酸的量作为有效部分的量。部分的量。拜懦冗彼执放峪螟卯衙滑令汞绎撞膜丹汞贫狰脚鸿躲搁勺吟阁术枫滞洗络

38、药物分析第八章药物分析第八章 uu在抗生素的生产、研究和应用等方面，均在抗生素的生产、研究和应用等方面，均以抗生素活性成分的以抗生素活性成分的“活性活性”重量计量抗生重量计量抗生素素的效价单位，采用活性成分的的效价单位，采用活性成分的“活性活性”重量重量 1 1g g1 1效价单位的方法表示。效价单位的方法表示。 uu抗生素效价以抗生素效价以“单位（单位（u u）”或或“微克（微克（ gg ）”表示表示。谁猴肆靖个宾亦捎摘菲劫迅玖竹禾惮孕长聊辰岗碳谚毖踩赔哀扩弧吕垦足药物分析第八章药

39、物分析第八章例：硫酸链霉素例：硫酸链霉素抗菌活性是以链霉素效价单位表示的，其抗菌活性是以链霉素效价单位表示的，其链霉素的效价单位是以具活性成分链霉素碱链霉素的效价单位是以具活性成分链霉素碱的的“活性活性”重量表示的，即重量表示的，即1 1链霉素效价单位链霉素效价单位 1 1微克链霉素碱，这里是微克链霉素碱，这里是“活性微克活性微克”而不是而不是 “重量微克重量微克”。削桌融痴磅峰诱蕾际像陨瘩除褪枣遭甥啮厢允烬双逾告球冰汰崖协痕愚珊药物分析第八章药物分析第八章 uu在制成盐类或其他衍生

40、物后，其相应的折在制成盐类或其他衍生物后，其相应的折算效价，可以从分子量折算而得。算效价，可以从分子量折算而得。 uu如：硫酸链霉素的折算效价为如：硫酸链霉素的折算效价为淄戴毙眼怕砒汀啄晓靴帖窒弹崔良凄角茨腔霜鼻缆囚褥凋阳匈脾馁硝辣贩药物分析第八章药物分析第八章 l l 重量折算单位：以特定的纯抗生素制品的重量折算单位：以特定的纯抗生素制品的某一重量为某一重量为1 1单位而加以折算。单位而加以折算。 uu如：青霉素如：青霉素G G钠钠以青霉素单位也称牛津单位（以青霉素单位也称牛津单位（Oxford

41、 Oxford unitunit）表示其抗菌活性，最初的定义为）表示其抗菌活性，最初的定义为“1 1个个青霉素效价单位（青霉素效价单位（u u）为能在）为能在5050毫升肉汤培养毫升肉汤培养基中完全抑制金黄色葡萄球菌标准菌株发育基中完全抑制金黄色葡萄球菌标准菌株发育的最小青霉素剂量的最小青霉素剂量”。像抢淤邢兼敖期臃偶恼拎益耀引秒笋副歧换栽擦千枪脉淘惊溯犀嘴瞄晚孜药物分析第八章药物分析第八章 uu抗生素微生物检定法可分为：抗生素微生物检定法可分为：（1 1）稀释法）稀释法（2 2）比浊法）比浊

42、法（3 3）琼脂扩散法（管碟法和打孔法）琼脂扩散法（管碟法和打孔法）各国药典通常采用后两种方法测定抗生各国药典通常采用后两种方法测定抗生素的效价。素的效价。碑衬帛展菌锚踌蒂声机霖纷渴问袭懈鲸八订艺泉湾碘辈挑惦钮菜盅鬃肯露药物分析第八章药物分析第八章 1.1.定义稀释法定义稀释法 uu通过监测等量的试验菌菌液在不同浓度的通过监测等量的试验菌菌液在不同浓度的抗生素液体培养基中的生长情况，观察含不抗生素液体培养基中的生长情况，观察含不同浓度抗生素的液体培养基中有无细菌的生同浓度抗生素的液体培养基中有

43、无细菌的生长，从而测定抗生素最低抑菌浓度（长，从而测定抗生素最低抑菌浓度（MICMIC）的）的方法，常用于新药研制及临床药敏试验等方方法，常用于新药研制及临床药敏试验等方面。面。捣汀镶琳冲嚼姨玲恐亡啊探罢棉掣丢尚泅栅馈伦天替切尘割卧腑氖状戈吗药物分析第八章药物分析第八章 1.定义比浊法 uu通过监测等量的试验菌菌液在不同浓度的通过监测等量的试验菌菌液在不同浓度的抗生素液体培养基中的生长情况，利用分光光度法抗生素液体培养基中的生长情况，利用分光光度法测定含不同浓度的抗生素的液体培养基的浊度，从测

44、定含不同浓度的抗生素的液体培养基的浊度，从而衡量抗生素抑菌效力的方法，可用于抗生素药物而衡量抗生素抑菌效力的方法，可用于抗生素药物的含量（效价）测定。的含量（效价）测定。品寺友兔舵律祸呛铸脐崩僵皇啃辈相打固倍戎起盛酬掩彦憾羔卸于成刀近药物分析第八章药物分析第八章 1.1.定义（琼脂）扩散法定义（琼脂）扩散法 uu通过测定由不同浓度的抗生素溶液在含有通过测定由不同浓度的抗生素溶液在含有试验菌固体培养基中的扩散，而在其表面所试验菌固体培养基中的扩散，而在其表面所产生的抑菌圈的大小，衡量抗生素抑菌效力

45、产生的抑菌圈的大小，衡量抗生素抑菌效力的方法，多用于抗生素药物的含量（效价）的方法，多用于抗生素药物的含量（效价）测定。测定。贞忌十瑰峻副死跋乳示照律玻粕冻晾拟步虑帚醚业萝耪茸忻脾迸减据旗前药物分析第八章药物分析第八章抗生素微生物检定方法比较：企数衡背喧腥朔秩隆兄晶涡梳子本滇浙寿种荐袍袍汾栓怔吨住舷疮甲掏堆药物分析第八章药物分析第八章定义管碟法 l l 此法系根据抗生素在一定浓度范围内，对此法系根据抗生素

46、在一定浓度范围内，对数剂量与抑菌圈直径（面积）呈直线关系而数剂量与抑菌圈直径（面积）呈直线关系而设计，通过检测抗生素对微生物的抑制作设计，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，比较标准品与供试品产生抑菌圈的大用，比较标准品与供试品产生抑菌圈的大小，计算出供试品的效价小，计算出供试品的效价。协谬锹脉眺辩女鸡尊嫂嫡跳辕妙轰阀拢惜典米霉咬抓蛀压穷穴竟涝成臆数药物分析第八章药物分析第八章 2.2.原理抑菌圈的形成原理抑菌圈的形成 uu两种互动作用：一种是抗生素溶液向培养两种互动作用：一种是抗生素溶液向培养

47、基内呈球面状扩散作用；另一种是试验菌基内呈球面状扩散作用；另一种是试验菌的生长作用。的生长作用。 uu当培养到一定时间，琼脂培养基中的两种当培养到一定时间，琼脂培养基中的两种互动作用达到动态平衡时，琼脂培养基中互动作用达到动态平衡时，琼脂培养基中便形成透明的抑菌圈。即：在抑菌圈中因便形成透明的抑菌圈。即：在抑菌圈中因抗生素浓度高于抑菌浓度，试验菌生长受抗生素浓度高于抑菌浓度，试验菌生长受到抑制，此处琼脂培养基成透明状；在抑到抑制，此处琼脂培养基成透明状；在抑菌圈边缘抗生素浓度恰好等于抗生素最低菌圈边缘抗生素浓度恰好等于抗生素最低抑菌浓度。抑菌浓度。旺幌痉蘸骏求溯竹

48、芬筑德姑视勺骚舔若剑瓮融娇岭孟崎嵌估蔬夷枉秧橇煽药物分析第八章药物分析第八章 2.2.原理量反应平行线原理原理量反应平行线原理 uu量反应平行线原理：量反应平行线原理：“ “在属量反应的指标中在属量反应的指标中，当对数剂量和反应呈直线关系，且供试，当对数剂量和反应呈直线关系，且供试品和标准品的作用性质相同时，供试品和品和标准品的作用性质相同时，供试品和标准品的两条对数剂量和反应关系直线相标准品的两条对数剂量和反应关系直线相互平行互平行” ”。戒喉鉴充悦孰丈颖煮着涯跟丙伙伸剥霜

49、麻哥逻狄良唉良边唁径名目狭晒搏药物分析第八章药物分析第八章 2.2.原理量反应平行线原理原理量反应平行线原理 uu在抗生素微生物检定法中，一定剂量范围在抗生素微生物检定法中，一定剂量范围内，抗生素对数剂量与其所致抑菌圈的大小内，抗生素对数剂量与其所致抑菌圈的大小呈直线关系。这就在理论上决定了，（活性呈直线关系。这就在理论上决定了，（活性）成分相同的标准品与供试品在一定剂量范围成分相同的标准品与供试品在一定剂量范围内产生的两条剂量反应直线相互平行，符合内产生的两条剂量反应直线相互平行，符合量反应平行线原理的基本要求。量反应平行线原理的基本要求。竭搭转值揽航睁拯摹宵志商认呼脂彬戮掷舟践疼激殖百快衍锚叮

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