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1、实验二 细菌基本形态及 特殊形态观察 实验二 细菌基本形态及 特殊形态观察 一 目的要求一 目的要求 1 了解普通光学显微镜原理及构造。了解普通光学显微镜原理及构造。 2 学习并掌握学习并掌握普通普通光学显微镜油镜光学显微镜油镜的正确的正确使用方法使用方法。 3 用油镜观察用油镜观察细菌基本形态细菌基本形态。 4 了解负染色原理、细菌芽孢染色基本原理，油镜了解负染色原理、细菌芽孢染色基本原理，油镜观察细 菌的荚膜、芽孢 观察细 菌的荚膜、芽孢及观察有鞭毛细菌的运动。及观察有鞭毛细菌的运动。 二 基本原理二 基本原理 普通光学显微镜的结构普通光学显微镜的结构 普通光学显微镜的光学成象原理普通光学
2、显微镜的光学成象原理 3 荚膜染色3 荚膜染色 4 芽孢染色4 芽孢染色 5 鞭毛染色及细菌运动5 鞭毛染色及细菌运动 普通光学显微镜的结构普通光学显微镜的结构 （1 )机械系统机械系统 包括镜座、镜臂、载物台、物镜转换器、镜筒及调节器等包括镜座、镜臂、载物台、物镜转换器、镜筒及调节器等 （2 )光学系统光学系统 包括反光镜、聚光器、物镜、目镜等。包括反光镜、聚光器、物镜、目镜等。 普通光学显微镜的光学成象原理普通光学显微镜的光学成象原理 （1）显微镜的放大倍数）显微镜的放大倍数 放大倍数：放大倍数：目镜的放大倍数与物镜的放大倍数之乘积目镜的放大倍数与物镜的放大倍数之乘积 。 目镜目镜： 物镜
3、物镜 目镜目镜物镜物镜 低倍镜：低倍镜：10X 高被镜：高被镜：40X 油镜：油镜：100X 10 X 100X 显微镜的分辨率显微镜的分辨率 油镜比低倍镜、高倍镜观察物体更清晰。油镜比低倍镜、高倍镜观察物体更清晰。 原因：原因： 油镜油镜分辨率分辨率高于低倍镜、高倍镜高于低倍镜、高倍镜 油镜油镜汇聚光线汇聚光线的能力大于低倍镜、高倍镜的能力大于低倍镜、高倍镜 分辨率分辨率是指显微镜能够分辨的最小距离即鉴别限度（是指显微镜能够分辨的最小距离即鉴别限度（R） R=2NA (为入射光波波长为入射光波波长； NA为显微镜数值孔径为显微镜数值孔径) NA= .sin 为标本、物镜之间介质的折射率。为标
4、本、物镜之间介质的折射率。 为光轴上物点发出的光线与物镜有效直径两端最大夹角角度的为光轴上物点发出的光线与物镜有效直径两端最大夹角角度的 一半。一半。 低倍镜低倍镜= 高倍镜高倍镜=空气空气=1.0 ， 油镜香柏油 ， 油镜香柏油=1.52 低倍镜低倍镜 高倍镜高倍镜 油镜，油镜， sin低倍镜低倍镜 sin高倍镜高倍镜 sin油镜油镜 NA低倍镜 低倍镜 NA高倍镜高倍镜 NA油镜 所以， 油镜 所以，油镜的分辨力比高倍镜、低倍镜高油镜的分辨力比高倍镜、低倍镜高。 汇聚光线的能力油镜高于低倍镜、高倍镜。汇聚光线的能力油镜高于低倍镜、高倍镜。 菌体 荚膜 菌体 荚膜 3 荚膜染色3 荚膜染色
5、主要成分多为糖 类， 主要成分多为糖 类，无色透明无色透明且且 不易着色不易着色常用常用负 染色 负 染色观察。观察。负染 色 负染 色是将是将细菌细胞 和背景着色 细菌细胞 和背景着色，从 而把无色透明、 不着色的荚膜结 构衬托显现出来。 ，从 而把无色透明、 不着色的荚膜结 构衬托显现出来。 菌胶团：菌胶团： 多个菌体的荚膜融合为一个团状物，内有多个菌体。多个菌体的荚膜融合为一个团状物，内有多个菌体。 菌胶团菌胶团 芽孢芽孢 菌体菌体 4 芽孢染色4 芽孢染色 细菌芽孢壁厚而致密，透性 低，难于染色，但一旦被染 色又难于脱色。因此先用强 着色力的染料（ 细菌芽孢壁厚而致密，透性 低，难于染
6、色，但一旦被染 色又难于脱色。因此先用强 着色力的染料（孔雀绿孔雀绿）处 理，并同时加热，使菌体以 及芽孢均着色，后使菌体脱 色，而芽孢保留原色，经复 染（ ）处 理，并同时加热，使菌体以 及芽孢均着色，后使菌体脱 色，而芽孢保留原色，经复 染（蕃红蕃红），菌体与芽孢分 别以不同颜色显现。 ），菌体与芽孢分 别以不同颜色显现。 菌体菌体 芽孢芽孢 菌体菌体 芽孢芽孢 对有芽孢的菌体进行对有芽孢的菌体进行简单染 色 简单染 色（只用一种染料染色）。（只用一种染料染色）。 菌体和芽孢着色情况如何？菌体和芽孢着色情况如何？ 5鞭毛染色 及运动观察 鞭毛染色 及运动观察 细 菌 鞭 毛 直 径 极 微
7、 小 （约10-20nm）,一般 用电镜观察，但采用 细 菌 鞭 毛 直 径 极 微 小 （约10-20nm）,一般 用电镜观察，但采用特 殊染色 特 殊染色后，在普通光镜 下也可观察到。其原理 是先用 后，在普通光镜 下也可观察到。其原理 是先用媒染剂媒染剂处理，使 之沉积于鞭毛上，从而 处理，使 之沉积于鞭毛上，从而 加粗鞭毛加粗鞭毛外观直径，然 后再进行染色。 外观直径，然 后再进行染色。 有鞭毛的菌体可以运动。有鞭毛的菌体可以运动。 三 实验材料三 实验材料 细菌基本形态标本片细菌基本形态标本片：大肠杆菌片：大肠杆菌片 枯草杆菌片枯草杆菌片 金黄色葡萄球菌片金黄色葡萄球菌片 细菌特殊形
8、态标本片 细菌特殊形态标本片：钾细菌荚膜片：钾细菌荚膜片 枯草芽孢杆菌芽孢片枯草芽孢杆菌芽孢片 土壤菌体培养液土壤菌体培养液 四 实验内容及步骤四 实验内容及步骤 1 细菌基本形态观察细菌基本形态观察 2 细菌特殊结构观察细菌特殊结构观察 3 细菌运动性观察悬滴片的制作。细菌运动性观察悬滴片的制作。 1 细菌基本形态观察细菌基本形态观察 学习油镜的正确使用方法。学习油镜的正确使用方法。 用油镜观察用油镜观察 大肠杆菌大肠杆菌 枯草杆菌枯草杆菌 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 2 细菌特殊结构观察细菌特殊结构观察 学习油镜的正确使用方法。学习油镜的正确使用方法。 用油镜观察细菌特殊结构用油镜观察细
9、菌特殊结构 钾细菌荚膜（钾细菌荚膜（高倍镜高倍镜） 枯草芽孢杆菌芽孢（枯草芽孢杆菌芽孢（油镜油镜） 菌体菌体 芽孢芽孢 荚膜荚膜 菌体菌体 菌胶团菌胶团 3 细菌运动性观察悬滴片的制作。细菌运动性观察悬滴片的制作。 土壤细菌菌悬液培养液。土壤细菌菌悬液培养液。 观察注意要点： （光线要暗）观察注意要点： （光线要暗） 油镜使用主要步骤油镜使用主要步骤 观察前准备观察前准备 ：显微镜的准备和调试：显微镜的准备和调试视野明亮视野明亮 低倍镜观察低倍镜观察 高倍镜观察（此步可以省略）高倍镜观察（此步可以省略） 油镜观察油镜观察：加香柏油，油镜头浸入香柏油中后调焦加香柏油，油镜头浸入香柏油中后调焦 显
10、微镜油镜头的清洗和归位（显微镜油镜头的清洗和归位（二甲苯清洗二甲苯清洗） 注意 ！注意 ！ 显微镜调焦方法显微镜调焦方法 五 实验报告五 实验报告 绘绘 大肠杆菌 枯草杆菌 金黄色葡萄球菌 大肠杆菌 枯草杆菌 金黄色葡萄球菌形态示意图 绘 形态示意图 绘 荚细菌荚膜 枯草芽孢杆菌芽孢 荚细菌荚膜 枯草芽孢杆菌芽孢形态示意图形态示意图 菌名：枯草杆菌菌名：枯草杆菌 放大倍数：放大倍数：16100 X 细菌形态示意图绘图要求：细菌形态示意图绘图要求： 选择选择形态典型形态典型的部分细菌细胞绘图。的部分细菌细胞绘图。 仅绘出细菌细胞仅绘出细菌细胞轮廓轮廓，但不同细菌的细胞大小，但不同细菌的细胞大小比例比例应 适宜，且形态上应有所区分。 应 适宜，且形态上应有所区分。 细菌与视野相对大小应符合实际，应将细菌细胞排布 在视野中离开中心的部位（即绘 细菌与视野相对大小应符合实际，应将细菌细胞排布 在视野中离开中心的部位（即绘空心图空心图）。）。 注明菌名、放大倍数注明菌名、放大倍数。 思考题思考题 （1）观察细菌染色片时应如何调节光线？）观察细菌染色片时应如何调节光线？ （2）油镜观测时，是否可以除香柏油以外的其它液体作介质？）油镜观测时，是否可以除香柏油以外的其它液体作介质？