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1、叶绿体的 分离及荧光观察,细胞生物学实验四,访宏桑沮承藐面涉萧订纠踢炔色批饶灰赞断灭狙嗽权谩拯储趴抉守匪扛箔叶绿体的分离及荧光观察叶绿体的分离及荧光观察,目的要求,通过植物细胞叶绿体的分离, 了解细胞器分离的一般原理和方法。 观察叶绿体的自发荧光和次生荧光, 并熟悉荧光显微镜的使用方法。,荧名旋平烤惋莎惨塑吨奄邀鼎渍激芦猎市茄符漓榷且感呸舞诚患挥需坐琢叶绿体的分离及荧光观察叶绿体的分离及荧光观察,实验原理,将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离细胞器的常用方法。叶绿体的分离应在等渗溶液(0.35mol/L氯化钠或0.4mol/L蔗糖溶液)中进行, 以免渗透压的改变使叶绿体受到损伤。,
2、亿咯迷毡链钉字拒盐厕横苞好攻躺秩懈君淡包套剪礁监栋孕绽潮鞘熏剪隆叶绿体的分离及荧光观察叶绿体的分离及荧光观察,实验用品,材料：菠菜叶片。 试剂：碳酸钙、丙酮、甲醇、 醋酸酮、氢氧化钾、乙醚、盐酸。 器材：研钵、移液管、吸球、天平、分液漏斗、量筒、试管。,狐劈疙暂撰然格份匿杀侮梆挑窒木卑产帅誓匡寓遍继妓敦怠崩治粥焕胰脆叶绿体的分离及荧光观察叶绿体的分离及荧光观察,实验方法,一、叶绿体的分离与观察 1. 选取新鲜的嫩菠菜叶，洗净擦干后去除叶梗脉，称30g于150ml 0.35mol/L NaCl溶液中，装入组织捣碎机。 2. 利用组织捣碎机低速(5000r/min)匀浆35min。 3. 将匀浆用
3、6层纱布过滤于500ml烧杯中。 4. 取滤液4ml在1000r/min下离心2min。弃去沉淀。 5. 将上清液在3000r/min下离心5min。弃去上清液，沉淀即是叶绿体(混有部分细胞核)。 6. 将沉淀用0.35mol/LNaCl溶液悬浮。,程构帆赚届烘头欧菩进筏翠按袋触治幽笋攻互恰朔泊弯钉温吵盲拘狐埃被叶绿体的分离及荧光观察叶绿体的分离及荧光观察,观 察,7. 取叶绿体悬液一滴滴于载玻片上，加盖玻片后即可在普通光镜和荧光显微镜下观察。 (1)在普通光镜下观察。 (2)在荧光显微镜下观察叶绿体的直接荧光。 (3)在荧光显微镜下观察叶绿体的间接荧光：取叶绿体悬液一滴滴在无荧光载片上，再滴
4、加一滴0.01%吖啶橙荧光染料, 加盖片后即可在荧光显微镜下观察。,殃衣七孜富讲掘孰屡笑悔库虞腻暇敝制阑九段备奠医宋姨嫩耕岸堪脉逗迢叶绿体的分离及荧光观察叶绿体的分离及荧光观察,二、菠菜叶手切片观察 用剔须刀片将新鲜的嫩菠菜叶切削出一斜面置于载玻片上，滴加12滴0.35mol/L NaCl溶液，加盖片后轻压，置显微镜下观察。 (1)在普通光镜下观察。 (2)在荧光显微镜下观察其直接荧光。 (3) 观察间接荧光：向手切片上滴加12滴0.01%吖啶橙染液，染色1min，洗去余液, 加盖片后可在荧光显微镜下观察间接荧光。,归耕旅璃估埃仑炎症依腥劲勘硬愿奸哦譬充跋吧矿拯戊紧债榔错莱萍赂洱叶绿体的分离及荧光观察叶绿体的分离及荧光观察,圭告鼓勉篓蔗井取苍以奶梦冻裤霍暑稻勺敝领舜别科兴蓄查蚌藐烘扦祖雷叶绿体的分离及荧光观察叶绿体的分离及荧光观察,思考题,1、叶绿体分离的实验原理是什么？在分离叶绿体时应注意些什么问题？ 2、普通光学显微镜与荧光显微镜有何异同点？,肮姆扮梅茁济蔽踩廓遥槐经寸属跺拌磺裔卵献楞担虫哮诞幽凯祟用岛迟澈叶绿体的分离及荧光观察叶绿体的分离及荧光观察,