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1、.,2. 色谱分离基本方程,对于常规分析工作，一般选用： 选择性系数（相对保留值）与保留指数I来评价固定液 有效塔板数N有效来评价色谱柱与分离条件 以分离度R作为柱的总分离效能指标,.,（1）几个概念选择性系数,定义与相对保留值(ri,s)基本相同 不同之处在于:选择性系数是两个相邻峰的调整保留值之比（后峰比前峰，1），而不是被测物与标准物质的调整保留值之比（可小于1） 它是评价固定液选择性的指标。选择性系数越大，该柱对此相邻峰的分离越好。,.,几个概念有效塔板数N有效,在气相色谱中，通常用有效塔板数N有效和有效塔板高度H有效来评价柱子的分离效能，它扣除了死体积对分离的影响，更好地反映了柱子的
2、实际分离效能。 柱效越高，该柱的分离能力越好。,.,几个概念分离度R,R越大，说明两组分分离得越好。 由于该定义综合了色谱动力学和热力学因素，可作为色谱柱的总分离效能指标。,.,(2)色谱分离基本方程（Purnell方程）,公式推导,.,.,（3）色谱分离基本方程的启示,要改善物质对的分离（提高R），即提高两相邻物质的分离度，可以采取以下措施： 提高柱效N 提高选择性系数 增大容量因子k,.,N的影响，如何提高N？,分离度R与理论塔板数N的平方根成正比关系，增加塔板数，有利于提高分离度。 增加柱长可增加N，改善分离，但分析时间将大大延长，峰产生扩展。 减小塔板高度H： 根据速率方程的启示制备一
3、根性能优良的色谱柱是十分重要的。 根据速率方程选择合适的色谱条件同样有效。,.,K的影响，如何改变k？,分离度与容量因子有关，容量因子越大，分离越好。 k 1 3 5 7 9 11 13 k/k+1 0.50 0.75 0.83 0.88 0.90 0.92 0.93 1.00 但当容量因子大于10，k/(k+1)的改变不大，而分析时间将大大延长。因此，k的最佳范围是1k10。,.,改变容量因子的方法有： 改变柱温 改变相比，即改变固定相的量和改变柱死体积，其中死体积对k/(k+1)的影响很大，使用死体积大的柱子，分离度将受到很大损失。 在高效液相色谱中改变流动相的配比是最简便、最有效的方法,
4、.,的影响，如何改变？,.,越大，分离效果越好。 增大是提高分离度最有效的手段。 改变柱温也可改变。 因此在气相色谱中，增大最有效的手段是改变固定相，选择合适的固定相种类是解决分离问题的关键 在高效液相色谱中，流动相的种类和配比是改善分离最简便有效的方法。,.,.,（4）分离度究竟要多大？,一般来说R应大于1.5。 具体工作中应根据样品要求和定量方法来确定。 例如：含量50%的组分，要使峰高定量误差小于1%，需达到R1/2=1.28，而采用峰面积定量R1/2需1.00。含量1%的组分，要使峰高定量误差小于1%，需达到R1/2=1.83，而采用峰面积定量R1/2需2.37。,.,3. 气相色谱操
5、作条件的选择,流速 柱温 气化温度 检测器温度 进样量 载气种类 固定相种类,.,流速u（Fc）,根据速率方程，可计算求出最佳流速，此时柱效最高。在实际工作中，为缩短分析时间，往往使流速稍高于最佳流速。 具体的：对于填充柱，氮气的实用最佳线速为10-15cm/s；氢气为15-25cm/s；氦气介于两者之间。若填充柱内径为3mm，则体积流速为氮气15-25ml/min，氢气30-50ml/min。,.,柱温Tc,直接影响分析效能和分析速度。 每一种固定液都有它的最高使用温度，柱温不可超过这一温度，否则固定液挥发流失。 柱温太高，组分挥发度靠拢，不利于分离。但柱温太低，被测组分的扩散速度下降，分配
6、不能快速达到平衡，影响峰型，柱效下降，并使分析时间大大延长。 柱温选择的原则是，在保证难分离物质有良好分离的前提下（分离度满足要求），可以采取较高柱温，以缩短分析时间，保证峰型对称。,.,混合物bp 柱温 固定液含量 300 低于bp100-200 1-3% 200-300 低于bp100 5-10% 100-200 平均bp的2/3 10-15% 气体 室温 15-25% 吸附剂 沸程范围100 程序升温,具体的,.,汽化温度,一般进样方法下，汽化温度比柱温高30-70。 进样量大时高一些好，保证瞬间汽化。 保证不可超过试样的分解温度。 其它气化温度与具体进样方式有关。,.,检测器温度,一般大于或等于柱温，具体与检测器种类有关。,.,进样量,液体试样一般进样量0.1-5l。 气体试样一般进样量为0.1-10ml。 具体视柱类型，固定液含量（不能超过柱容量） 、进样方式、检测器的灵敏度和线性范围等确定。,.,流动相（载气）种类,流动相的种类要视检测器种类确定。 常用的有氢气（热导用）、氮气（氢火焰用）、氦气（均可用，但价格较高）。 氢气和氦气适合于快速分析。 氮气做载气峰型较好，柱效较高。,.,固定相种类,.,作业 Page 61-62 21, 22, 25, 33,