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1、.常见荧光素：（ 1）异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate, FITC)：FITC 纯品为黄色或橙黄色结晶粉末， 易溶于水和酒精溶剂。 有两种异构体， 其中异构体型在效率、稳定性与蛋白质结合力等方面都更优良。FITC 分子量为 389.4 ，最大吸收光波长为 490495nm，最大发射光波长为520 530nm，呈现明亮的黄绿色荧光。FITC 在冷暗干燥处可保存多年，是目前应用最广泛的荧光素。其主要优点是人眼对黄绿色较为敏感，通常切片标本中的绿色荧光少于红色。（ 2）四乙基罗丹明(rhodamine, RB200)：RB200为橘红色粉末，不溶于水，易溶于酒精和
2、丙酮，性质稳定，可长期保存。最大吸收光波长为570nm，最大发射光波长为 595600nm，呈现橘红色荧光。（ 3）四甲基异硫氰酸罗丹明 (tetramethyl rhodamine isothiocynate, TRITC)：TRITC为罗丹明的衍生物，呈紫红色粉末，较稳定。最大吸收光波长为550nm，最大发射光波长为 620nm，呈现橙红色荧光，与 FITC 的翠绿色荧光对比鲜明，可配合用于双重标记或对比染色。因其荧光淬灭慢，也可用于单独标记染色。（ 4）镧系：镧系螯合物某些 3 价稀土镧系元素如铕 （Eu3）、铽（ Tb3）、铈（Ce3）等的螯合物经激发后也可发射特征性的荧光， 其中以
3、Eu3 应用最广。 Eu3 螯合物的激发光波长范围宽， 发射光波长范围窄， 荧光衰变时间长， 最适合用于分辨荧光免疫测定。（ 5）藻红蛋白（ P-phycoerythrin ，PE）： PE是在红藻中所发现的一种可进行光合作用的自然荧光色素，分子量为 240kD的蛋白，最大吸收峰为 564 nm，当使用 488 nm激光激发时其发射荧光峰值约为 576 nm，对于单激光器的流式细胞仪来说，推荐使用 58521nm的带通滤光片，双激光器的流式细胞仪推荐使用57513nm的带通滤光片。 FL2 探测器检测 PE。（ 6）多甲藻叶绿素蛋白（peridinin chlorophyll protein，
4、PerCP）： PerCP是在甲藻和薄甲藻的光学合成器中发现的，是一种蛋白复合物，分子量约为35kD，最大激发波长的峰值在490nm附近，当被 488nm氩离子激光激发后， 发射光的峰值约为 677nm。FL3 探测器检测 PerCP。（ 7）碘化丙啶（ propidium iodide ， PI ）：可选择性地嵌入核酸（ DNA、RNA）的双螺旋碱基对中。在对 DNA染色时，需用 RNase对细胞进行处理，以排除 RNA;.对 DNA荧光定量精度的影响。在 488nm波长激发下，PI 的发射光谱为 610-620nm。FL2 探测器检测 PI 。常见荧光素的特性：（ 1） FITC：黄色结晶
5、粉末，吸收光： 490495nm，发射光： 520530nm，明亮的黄绿色荧光。（ 2） RB200：橘红色粉末 , 吸收光 570nm，发射光 595600nm，橘红色荧光。（ 3） TRITC：紫红色粉末，吸收 550nm，发射光 620nm，橙红色荧光。（ 4）镧系： Eu、Tb（ 5） PE：吸收光 490 560nm，发射光 595nm，红色荧光。（ 6）其它：酶作用后产生荧光物质。酶作用后产生荧光物质：酶底物产物激发光发射光B-GMUGMU360450APMUPMU360450HRPHPA二聚体317414酶作用后产生荧光的物质某些化合物本身无荧光效应， 一旦经酶作用便形成具有强荧光的物质。例如， 4- 甲基伞酮 - -D 半乳糖苷受 - 半乳糖苷酶的作用分解成 4- 甲基伞酮，后者可发出荧光，激发光波长为 360nm，发射光波长为 450nm。其他如碱性磷酸酶的底物 4- 甲基伞酮磷酸盐和辣根过氧化物酶的底物对羟基苯乙酸等。镧系螯合物 某些 3 价稀土镧系元素如铕 (Eu3+) 、铽 (Tb3+) 等的螯合物可发射特征性的荧光， 而且激发光波长范围宽、 发射光波长范围窄、 荧光衰变时间长，最适合于时间分辨荧光免疫测定。;.