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1、HPLC测定枇杷花叶中熊果酸和齐墩果酸含量任红丽 2009090141四川师范大学成龙校区摘要：枇杷花叶含有挥发油、萜酸类、半萜类、酮类、酚类、机酸类等多种化学成分 ,具有抗炎止咳、血糖、病毒和抗肿瘤等药理活性 ,有重要的开发利用价值。综述了枇杷叶的化学成分、理作用及其应用研究进展，研究建立HPLC测定枇杷花中熊果酸和齐墩果酸的含量。采用甲醇溶剂超声提取法,在色谱条件下,熊果酸和齐墩果酸与其它成分达到了基线分离,进样量与峰面积呈良好的线性关系,本方法简便,灵敏,重现性好,结果准确可靠。关键词：枇杷花 熊果酸 齐墩果酸 色谱仪 枇杷别名卢橘，枇杷花系蔷薇科枇杷属植物枇杷Eriobotryajap
2、onica ( Thunb) Lindl的花 ,分布于我国浙江、江苏、四川、广西等省区，是我国亚热带地区的珍稀水果。据记载其味淡 ,性温 ,入肺经。湿肺散寒 ,润肺止咳 ,治疗外感风寒感冒 。枇杷花中含有齐墩果酸和熊果酸，齐墩果酸和熊果酸是两种五环三萜类化合物 ,结构极为相似。齐墩果酸（Oleanolic acid，OA）毒性很低，具有多种生物活性 抗病毒、消炎、增强免疫和免疫调解、抑制血小板凝集、降血脂、降糖、保肝、护肾、抗艾滋病毒等作用；对恶性肿瘤化疗造成的免疫功能下降的恢复和对抗结核药物的肝损害的保护意义重大。熊果酸(ursohc acid，UA)，毒性小，具有多种生物学活性，尤其是在抗
3、肿瘤、抗氧化、保肝、降血脂方面作用显著。1.实验部分1.1仪器、试剂与材料美国DIONEX高效液相色谱仪ASI一100 Automated Sample Injector,P680A HPLC Pump,PDA-100 Photodiode Array Detector,TCC-100 Column Thermostat。KQ32O0B型超声波清洗器。十万分之一电子天平,pH计，0.45m微孔过滤膜。样品甲醇（色谱级），乙醇（分析级），冰乙酸（分析级），超纯水。1.2 方法1.2.1 色谱条件 色谱柱: C18 (150 mm 4.6 mm, 5m) ; 流动相：甲醇-酸水溶液(体积比为946
4、)流动相体系, 柱温: 20 ; 流速: 0.5 mL /min; 进样量: 10L; 检测波长: 210 nm。1.2.2标准溶液的配制 精密称取齐墩果酸12.05mg，熊果酸18.16mg，加入20ml色谱级甲醇，超声30min，定容到25ml。1.2.3样品的前处理 枇杷花经过粉碎之后过24目筛，称取样品1g，至于25ml容量瓶中（其中加入20ml色谱醇），静置30 min，超声30 min，定容到25ml。1.2.4流动相配置： 取1L超纯水，用冰乙酸调节pH至3.4，经0.45m微孔过滤膜过滤再超声脱气20min后备用。2.结果（1）样品中的齐墩果酸Y=3.860，故X由Y=0.07
5、12X得，X=54.21mg/L，由此可知1g样品中齐墩果酸含量=54.21*25/1000=1.355mg。（2）样品中的熊果酸Y=16.043，则X由Y=0.0714X得，X224.69=mg/L。由此可知1g样品中的熊果酸含量=223.44*25/1000=5.617mg。3.结论（1）采用超声波提取方法，该方法能利用超声波振动的能量强化扩散过程，使溶剂容易侵入固体，固体溶质容易扩散到溶剂中，从而加速萃取过程，且不破坏活性成分的分子结构，简便快捷，提取率高；（2）熊果酸和齐墩果酸是同分异构体，结构十分相似区别仅在于其中一个甲基的位置不同，完全分离较为困难，向流动相中添加 0. 2% （
6、V / V）磷酸，能使二者的分离度达到 1. 69，基线平稳，对称因子和理论塔板数均达到了定量分析的要求。经方法学考察证明，该提取方法和定量分析方法准确、快速，数据准确可靠，重现性好，无其他杂质干扰，可用于枇杷花叶中熊果酸和齐墩果酸含量的测定。 4 讨论 （1.）在本实验中有哪些不足之处？本实验未对实验条件，样品处理条件，提取条件的选择以及提取溶剂的选择进行平行实验，实验次数，实验时间都没有进行比较，实验结果的准确性有待考察，并且实验所得色谱图与标准样品熊果酸，齐墩果酸的标准色谱相差比较大。（2）选择枇杷花的齐墩果酸，熊果酸进行测验的原因？ 齐墩果酸和熊果酸具有低的细胞毒性和广泛生物活性，具有
7、杀虫、消炎、防流感、抗糖尿等功能，并且熊果酸现已被证明能够阻断艾滋病蛋白酶的聚合作用，同时对于其他恶性肿瘤细胞亦表现出强烈的抑制作用；齐墩果酸对于肝脏也具有一定的保护作用，开发利用的前景很大。 参考文献 1) 张才华，郭兴杰，李芳，薛秀峰，李发美HPLC法测定白花蛇舌草中齐墩果酸、熊果酸的含量沈阳药科大学学报，2004 21（5），3582) 王德仁齐墩果酸研究新进展天津药学，2003 15（3），56 成丽，高朝霞，陈凌亚，吴维碧枇杷花三萜皂甙的分离与鉴定中国野生植物资源, 1999,18（2）,503) 石心红，郭江宁，翟静华HPLC法测定女贞子中齐墩果酸、熊果酸的含量海峡药学，2005 17（4），414) 李琪，杨必坤，张晓喻，张宏，黄春萍，于树华.枇杷花主要有效成分的含量. 四川师范大学 生命科学学院，成都6100685) 周宁，颜红枇杷叶不同炮制品中熊果酸含量的测定广东药学，2005 15（3），36) 中国医学科学院药物研究所.中药志 (第 2册) M.北京 :人民卫生出版社 ,1984. 72 .7) 葛金芳 ,李俊姚 ,宏伟 ,等.枇杷叶提取物对佐剂性关节炎的作用及部分机制研究J .中国药理通讯 ,2003 , 20(3) :48.