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1、免疫组化、 HE 染色步骤骨组织石蜡切片制作步骤：1. 固定：切取骨缺损出的骨组织，用 PBS冲洗，放入 4%多聚甲醛缓冲液内固定 1224h。2. 脱钙：将固定好的骨组织放入脱钙液中侵泡脱钙 24h.3. 脱水：将固定好的骨组织用蒸馏水冲洗3 次，再用 50%的酒精冲洗2 次，常规脱水， 70%酒精（ 60min），80%酒精（ 40min）,95%酒精（30min）,100%酒精 1（25min）,100%酒精 II （25min）。4. 透明：二甲苯 I(35min) ，二甲苯 II （35min）。5. 包埋：将透明处理后的骨组织依次侵入石蜡I 1小时，石蜡 II 1小时。6. 切片：
2、包埋后的组织块经修理后， 用切片机切成 4um的石蜡带，将组织石蜡块在 50温水中展片，然后用干净的载玻片捞片。7. 烤片：将切好的组织片放入 63恒温箱中烤片 2 小时。免疫组化检测步骤：1.脱蜡：将组织切片放入 62恒温箱中烘烤 20min二甲苯1（10min）二甲苯 2（ 10min）。2.水化： 100%酒精 1（2min） 100%酒精（ 2min）95%酒精（ 2min）80%酒精（ 2min）70%酒精 (2min) 。免疫组化、 HE 染色步骤3.PBS 冲洗 3 次，每次 5min.。4. 抗原修复：将组织片置 0.01M 的柠檬酸缓冲液（ PH6.0）中煮沸 15min ,
3、 自然冷却至室温。5.PBS 冲洗 3 次，每次 5min。6.阻断： 3%去离子水 37孵育 10min, 以灭活内源性过氧化物酶活性。7.PBS 冲洗 3 次，每次 5min。8.滴加 1 抗（ GFP 1：100 稀释 , 4过夜）9.PBS 冲洗 3 次，每次 5min。10. 滴加二步法免疫组化检测试剂的试剂 1，37孵育 ,20min, PBS 冲洗 3 次，每次 5min。11.滴加二步法免疫组化检测试剂的试剂2，37孵育 ,20min, PBS冲洗 3 次，每次 5min。12.DAB 显色 5min。13. 自来水冲洗 10min。14. 苏木精复染 2min, 盐酸酒精分化
4、。15. 自来水冲洗 10min。16. 常规脱水，透明，封片，镜检。组织切片 HE染色步骤免疫组化、 HE 染色步骤1、将烘烤后的组织切片依次侵入二甲苯1，二甲苯II进行脱蜡各10min。2、脱蜡后的组织切片依次浸入无水乙醇I 、无水乙醇 II 、95%酒精、80%酒精、 70%酒精中各 2 min ，PBS冲洗 2 次，每次 5min。3、苏木素染色 3 min, 自来水冲洗 3 min, 1 % 盐酸酒精分色 2 s ，自来水冲洗 2 min, 依次浸入 50 %、70 %、80 %的酒精中各 2 min,伊红浸泡 5 s ，自来水冲洗3min。4、 再将组织切片依次侵入 95 %酒精、无水乙醇 I 、无水乙醇 II 中各 3min，最后再依次侵入二甲苯 I, 二甲苯 II 各 5min。5. 中性树胶封片，镜检。6.7. 8.