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1、第三节杀菌剂的毒力测定和田间药效试验,一、毒力测定 杀菌剂对病菌的毒力是指药剂本身对病原菌直接作用的性质和程度，它是在严格控制条件下测定的，常用有效中量（ED50）表示，是指抑制50%病菌孢子萌发所需的剂量或有效中浓度（EC50）。 杀菌剂的毒力测定方法很多，长期采用经典的离体平板法，即以孢子萌发，抑制孢子发芽率或菌丝生长、变色、变形等指标作为毒力衡量的标准。,但近代随着新型内吸杀菌剂的发展，对杀菌剂的生物筛选逐渐由经典的离体筛选趋向活体筛选。 因为它不仅模拟田间实际，同时可以防止那些在离体平板上无效，而必须在植物活体上方显示活性的化合物漏筛。 但活体筛选涉及的因素较多，对寄主植物、试验条件要
2、求较高，如光照、湿度、温度，为控制病原菌与寄主相互作用的条件，必须有适合的温室，费工耗资都较大。 离体测定能反映化合物毒力的本质和程度，方法简便，为研制新农药不可缺少，但它存在有一点缺点，应该和温室活体的盆栽试验结合起来。,1.毒力测定的方法 室内离体平板法： （1）孢子萌发测定法 （2）抑菌圈法 （3）生长速率测定法,（1）孢子萌发测定法 有载玻片萌发法及平板培养基培养法。 即将不同的药液喷布于玻片表面或平板上，定量 滴加孢子悬浮液，药液与悬浮液接触后，经一定培育 时间，镜检孢子萌发的百分率，载玻片法适合于水溶 性较好的保护剂，能计算单位面积药液的沉积量及药 液浓度，接近实际条件，但对萌发时
3、需氧较多的病原 菌不适用。 平板萌发适用于不易分解的保护剂，根据测定对象生长需要的配方来制备合适的培养基，由于孢子在培养基的表面能得到较充足的空气，萌发时不致因缺少氧而受影响。,（2）抑菌圈法 广泛地应用于真菌细菌的杀菌剂筛选，基本原理是将病原菌孢子或菌丝的悬浮液与琼脂培养基混匀冷凝后，在培养基平面放上消毒的并蘸有不同浓度药剂的圆形滤纸片（直径6mm）左右，或放特制的直径8mm高10mm的不锈钢环，将配好的药液定量加 在钢环内，经定温培养一定时间后，由于药剂的扩 散作用，使病菌生长受到抑制，即形成“抑菌圈”。 测量抑菌圈的大小，以比较杀菌剂的毒力。,（3）生长速率测定法 即在琼脂培养基中加入药
4、液，冷凝后接菌的方法，用木塞钻孔器切取正常培养基上的供试菌丝体，放在平板上（也称菌碟），经一定时间后观察测量菌落生长速率，一定时间菌落直径的长度与对照组比较，求出抑制百分率，绘浓度对数-抑制百分率毒力曲线图，以ED50来比较毒力程度。,平板测定是室内杀菌剂活性测定最常用的方法，优点是条件比较一致，影响因子比较单一，活性效应显现较快，缺点是有时与活体测定结果不一致，有时会漏筛或误筛，如用粉锈宁处理大麦白粉病菌，离体测定不仅分生孢子能萌发且能形成吸器，但此药在活体上却表现高效。所以初筛手段不采用平板法，采用盆栽法，即病原-寄主植物组合法。,2盆栽方法 在温室内进行的，具体方法随各种不同病害而异，例
5、：小麦赤霉病采用分生孢子-幼苗组合法，根据杀菌剂物不同作用机理，有测定以下作用的方法。 （1）保护作用；（2）治疗作用； （3）内吸作用。,（1）保护作用： 一般经定量喷雾法处理供试植物，喷药后间隔一定的时间再接种（方法很多，如多针接种，剪叶法或将菌丝块贴在叶片上等），保持发病所需的温、湿度条件，发病后再按病情分级标准进行统计，以病叶率，病情指数增长等指标判断药效。,（2）治疗作用： 测定方法是先在植株上接菌，保温，保湿一定时间，待病菌菌丝侵入或始见发病，再进行喷药处理，其他调查统计方法同上。,（3）内吸作用： 测定根的内吸输导试验，可以采用水培的稻株或棉株，在营养液中加定量的药剂，待24h或
6、48h后进行接菌，发病后调查，若以土培盆栽方法，则药液定量灌入土中，程序与上相同。 持效期的试验： 以上各种方法，用先喷药后接菌或先接菌后喷药，间隔不同日期进行处理，可以测定杀菌剂残效。 剪叶法分级标准： 0级（不发病）；1级（剩余叶面1/4）；2级（剩余叶面1/4-1/2）；3级（剩余叶面1/2）；4级（全部发病）。,二、有效中量的测定,采用一系列的药剂剂量或浓度，每一剂量或浓度可以得出一个相应的孢子抑制百分率，得到两组数据，然后把各剂量换算成对数值，将抑制百分率换算成几率值，将换算后的 5 对数据建立回归方程，在直坐标系中画出回归直线，此直线称为剂量对数-抑制百分率几率值直线（ED-P-line直线）。,抑制百分率=50%，机率值=5 将5代入回归方程，然后求其反对数，即LD-P-Line（剂量对数-机率值直线）。 ED50可以作为多种药剂对同一病菌等效剂量的毒力比较，在一定的范围内可以用它来衡量一种药剂对病原菌毒力的大小，但不能做为田间防治的实际指标。,三、田间试验 室内筛选的药剂必须进行田间试验，通过试验确定其药效的好坏，经济效益的高低，也就是说，田间试验是确定一种药剂在生产上有无实用价值的主要方法。 田间实验的具体方法可参考农药药效试验的设计与分析一书，防治效果可用以下公式计算。,