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1、日本血 吸 虫分泌 型和 跨膜晋份分子 T 辅助细胞表位的预测与鉴定陈雷 2, , 隋传宇2. , 陈 红 , 邵 东华 , 杨健美 , 苑纯秀, 冯新港 , 林矫矫 (1 . 中国农业科学院上海兽医研究所 , 上海 2 0 2 4 1 ; 2. 上海师范大学生命与环境科学学院, 上海 2 0() 23 4)关键词 : 日本血吸 虫; 分泌型蛋 白; Th 细胞表位 ; 反向疫苗学高效安全的血吸虫分子疫苗的研发 , 由于发现保护性抗原遇到挑战, 一直难以取得突破。 分泌型和跨膜蛋 白分子可直接与宿主免疫系统作用 , 可能成为重要的保护性抗原。 本研究采用反向疫苗学策略, 开展 日本血吸虫分泌型
2、和跨膜蛋白仆 细胞表位的理论预测和实验鉴定, 旨在探索筛选 日本血吸虫保护性 T 细胞抗原或表位的新途径。 从发表的日本血吸虫转录本组和蛋白质组数据中获取 30 个具有信号肤或跨膜结构的样本序列 , 采用基于不同算法的不同服务器, 预测样本序列中分别与人和小鼠 H LA Il MH C n 类分子结合的肤, 比较确定出与上述 n 类分子都结合的混杂性肤序列, 再用基于分子动力学算法的受体配体三维空间对接模拟服务器优选出候选表位肤。用改 良M Tr 法测定体外刺激人工合成候选表位肤免疫的 Bd ble 鼠脾淋巴细胞增殖 ; E U SA 法测定免疫鼠脾细胞上清IFN 一, 、 IL-4 和 LI
3、 一or 的含量 ; 流式细胞术三色标记法测定免疫鼠脾 C D 4+ T 细胞内的 Th l (IF N 一, ) 和 Th Z (ILe 4 )细胞 因子。 结果预测得到了至少与鼠的一个 MH C n 类分子结合的 5 个十五肤表位序列; 其中lP 、 2P 、 P4 和5P 等 4 个肤能显著刺激免疫鼠脾淋巴细胞增值, Is 值均大于 2 ; 咒、 4P 和 5P 号肤的 I刚一r 水平显著高于对照组 ,而 ILwe 4,IL 一10 分泌水平各组无显著差异 ; P4 号肤免疫组小鼠脾 CD 4 + T 细胞中分泌 I刚一, 细胞的百分比显著增 高,而分泌 LI 一 细胞的百分比则显著降低
4、( P 0 . 50 )。 说明用反向疫苗学技术可筛选到日本血吸虫分泌型分子的 hT l 型表位, 为高效筛选 日本血吸虫保护性 T 细胞表位奠定 了基础。* 通讯作者: 冯新港* * 本研究得到国家重点基础研究发展计划(97 3 计划) (2)X( 7 C e 5 1 3 1 0s )资助。今州卜.令. 令州卜. 幸州卜州卜. 令. 今州卜州卜川卜 . 令今 . 今. . 会. . 令. 今. 今州卜. 令. 令今叫卜州卜. 令今. 今今. 今今. 幸 令. 今州卜. 今州卜州卜. 今一合 州卜. 嘴, . 今. 奋今. 令今州卜 令日冲血 吸 女小 R N A (S n R N A )转录
5、组研 究陈启军 2, , 都力力 , 蔡鹏飞 (1 . 中国医学科学院病原生物学研究所寄生虫学联合实验室 , 北京 10 7 3 0 .2; 人兽共患病研究教育部重点实验室 , 吉林大学人兽共患病研究所, 长春 13 仪巧2 。 Ceh 呵j hul .P e ud c. n )内源性小 RN A( e nd o ge no us s lna l no n 一co d ing RN A , sn RN A) 是一类从基因组中非蛋 白质编码区转录而来的小RN A 分子。 目前发现的内源性 s n R N A 主要包括 SL RN A , siRN A 和而c ro R NA (而R NA )等。
6、 这些小 R NA 主要通过影响 m R N A 的成熟过程及稳定性进而调节转录因子或其它功能蛋白质的表达和转录后的基因调控功能 (Po st -nart sc 即tio nal eg n e re 列ati on , PT G R) 。 血吸虫的发育过程包括虫卵、 毛勤 、 雷坳 、 胞坳、 尾勤、 肺期幼虫、 肝期幼虫和雌雄成虫等阶段 。 此外, 血吸虫是生物进化过程中第一个具有 X 和 Y 染色体的生物 , 因而是研究生物发育繁殖过程中基因调控机制的理想动物模型。 本研究采用大规模小 RN A 测序的方法对 日本吸血虫基 因组中转录的小 NR A 分子进行了系统的研究。 149 。日本血
7、吸虫 的 m R NA 成熟过程是通过顺势(ci s 一 )和反式剪切(tra ns 一sP lic ing )两种方式完成的。 反式剪切过程包括剪切前体 R NA 和 m NR A 的转录和连接的过程。 在 日本血吸虫的基因组中含有 5 个散在分布的编码反式剪切前体 R N A (Sp cil ignR N A )的基因。 每个基 因所转录的 R N A 长度为 90 ni , 该 R NA 前体含有两个典型 的发卡结构和一个 RN A 剪切复合物识别位点。 该 R NA 在转录后 由RN A 剪切复合物剪切成一个 36ni 和一个 5 4 nt 的两个 R N A 片段。 前一个片段(si
8、ln ic gn el da e r , sL )被连接到 m RN A 前体(p re 一m R N A )上。 反式剪切的作用主要有三个方面 , 一是提供 5 端帽状结构和 A UG 起始密码子。 另外一个功能是增加 m RN A 的稳定性。 日本血吸虫的 m R N A 的产生包括顺式和反式剪切两个过程。 反式剪切的过程主要发生在虫体发育的初期(虫卵和尾勤)阶段。 含有 SL 的 m RN A 主要编码介导虫体代谢、 信号储藏及处理的功能蛋白质。 反式剪切在血吸虫发育繁殖过程中的重要性还有待进一步研究。内源性干扰性 R N A (ne od eg on sus m la ini e if
9、e ri ng RN A , si RN A )是 日本血吸虫转录组中第二类小 R N A 。 s iR N A主要 由基因组中的转座子(Tra ns p os on )转录而来, 其长度主要在 18 一2 5 nt 之间。 与其它生物不同的是 , is R NA 只从转座子的部分序列产生。 在虫体的不 同发育时期所表达的 。iRN A 长度不同, 其末端的修饰也存在发育时期的特异性。m ci ro R N A (m iRN A ) 是 目前在 日本血吸虫小 R N A 转录组中发现的一类主要小 R N A 分子。 在 c . e le ga n s , 而R N A 的表达与虫体不同发育时期
10、的转化有关。 而RN A 被认为是 C. el e gan s 发育及形态转化的分子开关。 本研究在 日本血吸虫发现了 13 个与其它生物共同的 而RN A 家族成员 , 此外还发现了近 5 0 个 日本血吸虫特异性 而R - N A 分子 。 此外 , 日本血吸虫存在明显与发育阶段相关和性别相关的 m iRN A 。 研究结果对研究血吸虫及其它生物的分子调控机制奠定了基础。日市血吸虫虫卵在 B A LB / 。 鼠肝脏各叶中的分布调查朱传刚 , 周扬帆 2 , 张 磊 , 汪 勇沛 , 林矫娇 (1. 中国农科院上海兽医研究所, 上海 2 0 0 2 4 1 ;2. 上海位育中学 , 上海
11、2 )X( 2 3 )1摘要 : 目的 建立计数血吸 虫虫卵的可 准确量化和易于操控的小 鼠肝脏模型 。 方法 人工感染 BA L 叼e 系小鼠 4 2 天后 , 根据肝脏的三个分叶计数各叶血吸虫虫 卵数 , 分析血吸虫虫卵在各叶中的分布。 结果 感染日本血吸虫 4 2 天的 B A LB lc 小 鼠肝脏的平均重量为 .2 32 劲2. 6 9 , 左叶、 中央叶、 右叶三个虫卵计数单位 占肝全重 的比例 分别是 : 93 % 、 72 % 、 43 % 。 肝脏左 叶、 中央叶、 右 叶三个取样样本 中血吸虫虫卵 E PG 分别为 49 . 50 土26 .7 0 10 3 怡, 59 .0 3 士29. 04 xl 03 /g 和 36 .5 5 土17 .7 71 护lg 。 各肝叶之间相差有显著性差异(P 0 .0 5 )。 肝脏 E PG 与各肝叶中E PG 符合线性关系, 每对配对成 虫对肝脏 E GP 的贡献从 3 6. 7 lx l30 g 到 6 s. lx 叽 个虫卵不等。 结论 血吸虫虫卵在肝脏各叶中的分布是不均 匀的 , 以肝 中央叶为最多, 肝右叶最少。关键词 :日本血吸虫 ; 虫卵; 小鼠; 杆脏解剖