《肿瘤干细胞分离方法研究现状.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《肿瘤干细胞分离方法研究现状.pdf（3页珍藏版）》请在三一文库上搜索。
1、进 展 述 评 医学与哲学( 临床决策论坛版) 2 0 1 0 年 1 1 月第3 1 卷第 1 1 期总第 4 1 7 期 肿瘤干细胞分离方法研究现状 李英华 张 弦 张 斌 刘 关 周 欢 刘 丹 张 阳 摘要 ： 肿瘤干细胞理论能够解释肿 瘤的发生 、 发展和转移等生物学行为 ， 使人 们对 恶性肿瘤有 一个全新的认识 ， 为临床治 疗展现全新视角 ， 使肿瘤靶向治疗找到 了新靶点 ， 改变 目前药物针 对全部 癌细胞的治疗策略 。本 文就肿 瘤干细胞分 离方 法做 一 简要 综 述 。 关键词 ： 肿瘤干细胞 ， 肿 瘤干细胞分 离， 分选仪器 ， 分选原理 ， 生物 学特性 中 图分
2、 类 号 ： R7 3 o 文献 标 识 码 ： A 文 章 编 号 ： 1 0 0 2 0 7 7 2( 2 0 1 0) 1 1 0 0 4 4 0 3 The Cur r e nt St a t u s O i l t he S e pa r a t i o n o f Ca nc e r St e m Ce l l s LI Yi ng h ua， ZHAN G Xi an， ZHANG Bi n， e t a1 The Se c o nd Af fi l i a t e d Ho s p i t a l o f Da l i a n M e d i c a l Un i v e r
3、s i t y， Da l i a n 1 1 6 0 2 3， Ch i n a Ab s t r a c t ： Hy p o t h e s i s o f c a n c e r s t e m c e l l s ( CS C)h a s b e e n p r o p o s e d f o r e l u c i d a t i n g t h e b i o l o g i c a l b e h a v i o r s o f t u mo r s u c h a s i t s i n i t i a t i on， p r o g r e s s i on， r e c
4、u r r e nc e a nd me t a s t a s i s The t he o r y a b ou t CSC pr o vi de s a ne w i ns i ght t o r e c o gn i z e t he e s s e n c e of t u mor s a n d ma y b r i ng U S a ne w a p pr o a c h f or t h e t r e a t me nt o f c a n c e r s Th e t a r ge t ha s be e n f ou nd f o r t he t a r ge t i
5、n g t he r a pe u t i c s t r at e gi e s o f c an c e r s I n t hi s a r t i c l e， we r e vi e ws t he cu r r e n t s t a t us on t he s e pa r a t i on of CSC Ke y W o r d s： CS C， s e pa r a t i on o f CSC， s e pa r a t i o n a p pa r a t us， s e pa r a t i on p r i nc i p l e， b i o l og i c a
6、l p r o pe r t y 关于癌症发 生、 发展有 多种学说 ， 如多 因素、 多 阶段学说 和 克隆选择学说等 ， 其理论 尚不完善 ， 难 以应用 于临床 。传统癌症 治疗是通过手术 、 放疗 、 化疗等方法 ， 消灭大部分癌细胞 ， 但 临床 常需面 对治 疗后 复 发 、 转 移和 耐 药等 严 峻 问题 。肿 瘤 干 细胞 ( c a n c e r s t e m c e l l s ， C S C ) 理论认 为 C S C在肿瘤形成 、 生 长、 浸润 、 复发和转移 中起重要 作用 ， 杀死 C S C能最终治愈肿瘤 ， 使人们对 恶性肿瘤有 了一个全新 的认识 ，
7、为临床治疗展现全新视 角 ， 肿瘤 靶向治疗找到新靶点 ， 使治愈肿瘤成为可能 。 1 CS C概 念 的 形 成 肿瘤发生的原因普遍认为是 内在遗传物 质与外在环境相互 作用 ， 导致突变事件 累积 ， 产生肿瘤 。早期研究形成 肿瘤生长 随 机假说 ， 认为肿瘤细胞是均质的 ， 进入细 胞分 化周期的肿瘤 细胞 很少 ， 是一个小 概率 随机事件 。 但 随后大量研究发现 这一结论 与实 际观察结果 不符 ， 产 生 层级假说 。该学说认 为只有有 限数 目的肿瘤 细胞 具有产生肿瘤 的能力 ， 这些细胞再生肿瘤是高频事件 ， 并引起肿瘤异 质性 。2 O 世纪 5 O年代有人做 过肿瘤
8、移植 的人 体实验 ， 即将 3 5例患者 约 1 o 亿 个 自身 的肿瘤细胞分别 注射到各 自的大腿和前臂 ， 只有 7 例 自体移植物在注射 部位 长出肿瘤 。1 9 5 8年， He w i t t 1 j 把小 鼠 白血病 细胞移植到同品系的小 鼠体 内， 发现移植细胞只有 1 4 能够形成脾脏 内克隆 ； 1 9 7 7 年 在人肺癌 、 卵巢癌 、 神经母 细 胞瘤 的体外培养实验 中发现仅 有 1 1 0 0 0到 1 5 0 0 0的肿瘤 细 胞能在软琼脂上形成克隆。因此推测肿瘤并 不是 由均一 的肿瘤 细胞构成 ， 只有其 中一小部分细胞具有肿瘤再生能力 。 这 两种假说都
9、肯定 了肿瘤组织 中细胞 生长 的不均一 现象 ， 但对这些起始细胞 的特性及生 物学行 为缺乏令 人满意 的解释 ， 大连 医科 大学附属第二 医院肿瘤 内科 辽 宁大连 1 1 6 0 2 3 大连 医科 大 学研 究 生 院 辽 宁 大连 1 1 6 0 4 4 究竟是何种细胞行使肿瘤起源细胞的功能?Ma c k i l l o p 3 于 1 9 8 3 年最先提出 C S C假说 ， 他认 为肿 瘤来源 于某些积 累了一 系列突 变事件的干细胞 。1 9 9 7年 B o n n e t 4 第 一次 在急 性髓 性 白血病 ( A ML ) 患者体 内分离 出表 面抗原 标记 为
10、C D 。 C D s 。 。 的细 胞 ， 占 AML总细胞数量 的 0 2 ， 将这部分细胞移植 到非 肥胖型糖 尿病 重症联合免疫缺陷小 鼠( N OD S C I D ) 后会引起 AML的发 生 ， 而将其他的 AML细胞 以更 大数量 移植到 NO D S C I D小 鼠 体 内却不能引起 AML 的发生 。提示 这部 分拥有 C D 。 C D 。 表面标记的细胞 可能是 C S C。随后研究人员 使用类似 的实验方 法 ， 在乳腺癌 、 肺 癌 、 结肠 癌等实 体瘤 中也鉴 定 出 C S C的存 在。 曾经认为 C S C是肿瘤组织中的一小群具有广泛繁殖能力并组成 肿瘤的
11、细胞 。A l Ha j j 则 认为 机体 中具 有无 限 自我更新 潜能 。 将其移植至免疫 缺陷 鼠体 内， 能高效地 产生异 质性肿瘤 的肿瘤 细胞为 C S C。C l a r k又将 C S C定义为肿瘤 组织 中能构 成细胞 自 我维持的细胞集合 群 ， 并有独特 的 自我更 新能力 及产生异 质性 的细胞群体 ， 从而构成肿瘤 的肿瘤细胞 。美 国癌症 联合会 2 0 0 6 年按功能将 C S C定义为肿瘤中具有 自我更新能力并能产生异质 性肿瘤细胞的细胞 。 2 CS C的 分 离 2 1 根据分选仪器不同分为荧光活化细胞分选术 ( F AC S ) 和磁 性活化细胞分选术
12、 ( MA C S ) F AC S是较 常用 的分离肿瘤干细胞的方法 ， 它能够一次性进 行 多标志分选， 而且能够选择荧光 强度大的肿瘤细胞 ， 分选纯度 高 ， 特异性强 ， 但需 要具备 有分选 功能 的流 式细胞 仪 ， 并且 无菌 操作过程相对繁琐 。MAC S 是利用未标记 的抗原等蛋 白的单克 隆抗体作为第一抗 体与单 细胞悬 液孵育后 ， 再 与免疫磁珠 标记 的第二抗体结 合 ， 这种特 异性标 记的 细胞悬液 流过特制 的永久 磁铁的磁场时 ， 被吸附在磁式分选 柱内 ， 再将磁式 分选柱移开磁 场从柱 内洗脱 ， 从而分离 干细胞 。MAC S需要的设备简单 ， 能够
13、Me d ic i n e a n d P h i lo s o p h y ( O l in ic a l D e c is io n Ma k in g F o r u m E d i t io n 】 ， N o v 2 0 1 0 。 V o l 3 1 ， N o 1 1 ， T o t a l N o 4 1 7 肿 瘤 干 细胞 分 离 方 法研 究现 状 李 英 华 等 在超净台中操 作 ， 但 进行 多标 志分选 时需要 分步 进行 。这 两种 分离技术均 有赖 于 C S C表面标记物 的识别 。 2 2 根据分选原理不 同分 为表 型标记筛 选法 和侧群 细胞 ( S P
14、 ) 筛选法 2 2 1 方法分类 ： ( 1 ) 表 型标 记筛选法 ： 用荧光标 记 的表 型标记 抗 体温育细胞 ， 抗体结合到表型标记后 ， 在流 式细胞仪荧 光活化 系统检测下将标有荧光 的细胞 分选 出来 。肿 瘤细胞至少 具备两 种表面标记 ， 一种是成 体干 细胞或祖 细胞 的 同源或异 源表 面标 记 ； 另一种是以前被广 泛报 道的 与多种 肿瘤 发生 、 发展 、 转移 和 复发密切相关 的细胞 表面标 记。该方 法特 异性强 ， 而 且能够 根 据 细胞表面标 志分 子将 肿 瘤 细胞分 为 多种 不 同 的亚群 进行 分 析 。( 2 ) S P法 ： Go o d
15、e l l 等进 行造血 祖细胞 分析 时 ， 发 现有 一群 细胞在流式二维分析点阵 图上呈彗 星状 ， 分布在干 祖 细胞 主群 的一侧 ， 故称 为侧 群 细胞 。该 方法 中用结 合 D NA 的荧 光染 料 ( 如 Ho e c h s t 3 3 3 4 2 、 R h o d a mi n e l 2 3 ) 处 理细 胞 ， 用维 拉 帕米 阻断 钙离子依赖转运泵 ( A B C转 运蛋 白家 族) 作为对 照组 ， 利用肿 瘤 干细胞可将染料泵 出细胞 的性质 ， 经 过荧 光活化 细胞 分选 系统 的分析 ， 将不被染色 或低染色 的 C S C筛选 出来 。应用 该法研
16、究 头颈部 C S C发 现 S P细胞高表 达干细胞 表面标 记l 5 。在荧光 显 微镜下观察 S P细胞 比流式 细胞仪分 析更 直观 ， 很 适合没有 明显 细胞表面标志的 C S C的分选 ， 但存在非特异性 。S P细胞代表 的 干细胞学说面临挑战 ， B u r k e r t 等 证 实在 7种 胃肠癌 细胞株 中 存在 S P细胞 ， 选择其 中的 4种癌细胞株进行干细胞 生物学行 为 鉴定 ， 发现分 离的 S P表 型细胞群和非 S P表型细胞 群在体外 克 隆形成和体 内致 瘤能力上无明显差别。 2 2 2 分子基 础 ： ( 1 ) 表面标 记有 两类 ： 一种 是正
17、 常干 细胞 祖 细胞的标记 ： C S C学 说认 为 C S C可能源 于正 常干细胞 的累积 突 变和 或祖细胞通过 基因突变重新获得 自我更新能力 ， C S C可 能 带有同源正 常干细胞 祖细 胞的 表面标 记 。如 C D 1 3 3是 一种 5 一 跨膜糖蛋 白， 存在 于正 常和初 级造 血、 神 经 、 内皮 和上皮 系癌 细胞膜 上的抗原 ， 其 显著特 点就是 随着 细胞 的分化 表达迅 速下 调 ， 是一个独特 的分 离和鉴 定 干细胞 和祖细 胞 的分子 标志 。 目 前已经从多种脑肿瘤 中分离 出肿瘤源性 细胞 ， 包括 星形细胞 瘤 、 恶性成神经管细胞瘤 及胶
18、 质母 细胞瘤 ， 这 种脑 肿瘤源 性细 胞与 正 常神经干细胞 有相 同 的标 记 C D 。研 究发 现肺癌 干细 胞存 在 与支 气 管 肺 泡 干 细 胞 相 似 的 表 面 标 志 物 ， 如 S c a 1 + ， C D 一， P e c a m ， C D 。 等 。Na n o g是全能性和 多能性干 细胞标 志物 ， 其在分化 的组 织 中均表达 降低 或消失 。B e n 7 在 乳腺 癌 、 膀胱癌等肿瘤 中发现 有 Na n o g的表达 ， 肿瘤 级别 越 高 ， 表达 越 强 ， N a n o g表 达与肿 瘤分 化状 态相关 。AMI 及 C ML中 的肿瘤
19、 干细胞具 有 与 造血 干 细 胞 相 同 的标 记 C D 。 一C D 。 。另 一 类 C S C标记可能是 与肿瘤 的发展 、 转移有关 的标记 ， 如 C D 属粘附 分子家族 中的一员 ， 是 细胞外 基质透 明质 酸的受体 ， 是分布 极为 广泛的细胞表面跨膜 糖蛋 白 ， 主要参 与细胞 与 间质之 间特异 性 粘连过程。F i l l mo r e 等 发现 ， 在 乳腺 细胞 中， 已分化 细胞 主要 表达 C D ， 而 祖 细 胞 群 样 的 细 胞 则 更 多 表 达 C D ， 并 且 以 C D C D ： l o w为表型的乳腺 细胞 表达 的基 因主要 与细
20、胞 的 能动性及血管生成有关 ， 它们是更 为间质 的、 能动 的和雌激 素受 体 阴性的细胞 ， 并 且 与 问质 型乳 腺 癌密 切 相关 。( 2 ) 功能 性 标 记 ： AL D H是 分选侧群 细胞 的主要 标记 。AL D H+细 胞在体外 克隆形成能力是 A L D H一细胞 的三 倍 以上 。J i a n g等 将 A I 一 D H用在肺肿瘤干 细胞 的分 选 中， 并 证 明 AL DH+细胞具 有 自 医学与哲学( 临床决策论坛版) 2 0 1 0 年 1 1 月第 3 1 卷第 1 1 期总第 4 1 7 期 我更新及 多向分化潜能 。AB C G2蛋 白是 耐药基
21、 因 AB C转 运蛋 白家族成员 A B C G2 B c r p l基因产物 ， A B C G2 蛋 白表达与 s P细 胞表征密切相关 ， 推测它除了排出对干 细胞有害 的毒 物 ， 还 能排 出分化诱导 因子 ， 维持 干细 胞 的未分 化状 态 。因此 ， A B C G2被 认为是干细胞 的通 用标 志物 ， 是从 不 同组 织 中分选 多潜能 干细 胞 的新途径 。费城杰 弗森 科摩 癌症 研究 中心 的研 究人 员“ 对 1 1 号基 因组 的某个信 号片段的功能有 了突破性 的发现 。S AG A 是一个至少 由 2 O个蛋 白组成 的不依赖 AT P的多功能染 色质重 塑
22、复合物 ， 它通过对 组蛋 白 H3和 H2 B氨基末 端赖氨酸 乙酰化 修饰来松动染色 质结构 ， 从 而促 进基 因转 录的起始 。他 们确认 了 US P 2 2作为 h S A GA复合物的一部分 ， 在多种肿 瘤 中有 高表 达 。US P 2 2 号基 因编码 了一种 与癌 症有关 的、 能控制 基 因表 达 大幅度变化的酶 ， 这一组基 因被 称为“ 癌症干细胞的信号” 。 C S C特异性标记 已被应 用于 C S C的分离 ， 但细 胞特异性标 记的表达与 C S C的 自我更新 和分化 特征之 问的联系 尚不明确 ， 因此特异性标记不能单独用于 C S C的分离 ； 分离
23、C S C的标记 物 分子并不是高度特异的 ， 一种组 织 C S C标记 物不能 用于其他组 织 C S C标 记， 对 C S C特异性标记物有待于进一步深入研究。 2 3 根据干细胞生 物学 特性分 为悬 浮培养 和上皮 一间质转化 ( EMT) 等 方 法 ( 1 ) 悬浮培养法 ： 该 法首先是在神经 干细胞 的研究 中被采用 的。未分 化、 具有多 向分化 潜能 的神经 干细胞 具有 悬浮 生长并 形成 神经 球的特性 ， 而且 ， 此 种方法培养 的细胞能够保 持多 向分 化 的潜能 ， 其干细胞 比例可达到 4 2 o 。借 鉴神经干细胞 的 培养技术 ， 将新鲜 的乳腺上皮标
24、本分 离成单细胞 后 ， 在无 血清培 养液 中进行悬 浮培养形 成小 的细胞 团， 将其分 离后 再次 进行悬 浮培养 ， 仍可得到乳 腺微 球 ， 经流式 细胞 仪分选 ， 微球 中具 有乳 腺干 细胞标 志的细胞 比率远远多于正常乳腺上皮 。 ( 2 ) E MT法 ： 上皮 间质转 化上皮 细胞 与其 周 围间质 的相 互作用过程 中逐渐 获得 间质 细胞特 性 ， 表现 为上皮 细胞在 形态 学上发生 向成纤维细胞或 间充质 细胞表型 的转变并获得 迁移的 能力 。应用该方法 可体 外检 测肿瘤 细胞 的迁 移、 侵 袭 能力 。乳 腺癌转移 时， 癌细胞极 性丧失 ， 发 生 E
25、MT。Gu p t a 等 通过 s h R NA抑制 C D H1 基 因( 编码 Ec a d h e r i n ) 导致 E MT， 获得 C D h C D 。 l 细胞是对 照组 1 O倍 以上 ； 形成乳 腺微球体 能力是对 照 组 1 0 0倍 。表明通过 E MT能够富集乳腺癌干细胞。 ( 3 ) 利用 多药 耐药 性 富集 C S C：C S C与 正常 干细胞 具有 许 多相似 的特征 ， 大多处于细胞周期 的 G O期 ， 表达特异 性的 AT P 结合盒 ， 如 AB C B 1 、 AB C G 2等介 导 的膜泵 耐药 分子 ， 使 其对 放 疗 、 化疗天然耐药
26、 。根据 C S C生物学特性 中固有 的对放 、 化疗 的 耐受能力 以及临床试 验发 现 ， 在经 过化疗 后 的乳 腺癌 患者 的病 灶中 C D C D l o w的细胞 比率增 加 ； 而针对表 皮生长 因子 受体的酪氨酸激酶抑制剂拉帕替尼靶 向治疗不 会导致患者治 疗 后循环血 中 C D C D e l o w细胞 数量增 多 1 。提示 传统 的 细胞毒性药物可以作为富集肿瘤干细胞的方法 。 实体瘤 C S C的分离纯化 困难 ， 首 先考虑在 肿瘤组织 制成单 细胞悬 液的过程中 ， 蛋 白水解酶 对细胞表 面抗 原的破坏 等原因 ， 单细胞悬液细胞活力受到影 响 ； 其次许
27、 多实体肿 瘤的 C S C标 志 蛋白不具有通用性 ； 实体瘤 C S C比率低 ； 还有大多数流式细胞技 术使用 高压 力下d , T L 径流 ， 不适用 于体积大 、 质地脆 的许 多实体 瘤 的分 离 ； 实体瘤组织正常干细胞干扰等 。 3肿瘤干细胞研究展望 Me d ic in e a n d P h i lo s o p h y ( Cl in ic a l D e c i s io n Ma k in g F o r u m E d it i o n ) ， N o v 2 0 1 0 。 Vo l 31 。 N o 1 1 T o t a l N o 41 7 肿瘤干细胞分离
28、方法研究现状李英华等 医学与哲学( 临床决策论坛版 ) 2 0 1 0年 l 1 月第 3 1 卷第 1 1期总第 4 1 7 期 目前血液系统 C S C已得到确认 ， 应用 相似的研究方 法对实 体瘤 中是否存在 C S C还停留在进一步 验证和分 离阶段 ， 对 C S C 的确认 ， 还有待于对肿瘤 生物学 特性 的充分认识 和生物学 技术 的进一步发展和完善 。未来的工作重点定位在 C S C基因表达谱 和相关信号传导通路 的研究 、 标 志分子的筛选和确定 、 表型和基 因型关系的探讨 、 生物学特性 的阐明及针对 C S C治疗 靶点 的筛 选 。 (*通 讯作 者) 1 E 2
29、 3 4 5 6 参考 文 献 He wi t t H BS t u d i e s o f t he d i s s e mi n a t i o n a n d q u a nt i t a t i v e t r a n s p l a n t a t i o n o f a l y mp h o c y t i c l e u k a e mi a o f C B A mi c e J B r J C a n e e r ， 1 9 5 8 ， 1 2： 3 7 8 4 0 1 H a mb u r g e r A W ， S a l mo n S E Pr i ma r y b i
30、o a s s a y o f h u ma n t u mo r s t e m c e l l s J S c ie n c e ， 1 9 7 7 ， 1 9 7 ： 4 6 1 4 6 3 Ma c k i l l o p W J， Cia mp i A，Ti l l J E，e t a 1 A s t e m c e l l mo d e l o f h u ma n t u mo r g r o wt h i mp l i c a t i o n s f o r t u mo r c e l l c l o n o g e n i c a s s a y s J J o u r n
31、 a l o f t h e Na t i o n a l C a n c e r I n s t i t u t e ， 1 9 8 3 ， 7 0 ： 9 1 6 B o n n e t D， Di c k J E Hu ma n a c u t e my e l o i d l e u ke mi a i s o r g a n i z e d a s a h i e r a r c h y t h a t o r i g i n a t e s f r o m a p r i mi t i v e h e ma t o p o i e t i c c e l l J Na t u r
32、e M e d i c i n e ， 1 9 9 7， 3 ( 7) ： 7 3 0 7 3 7 S u n G，Fu j i i M，S o n o d a A，e t a 1 I d e n t if i c a t i o n o f s t e ml i ke c e l l s i n h e a d a n d n e c k c a n c e r c e l l l i n e s J An t i c a n c e r R e s ， 2 0 1 0 ， 3 0 ( 6 ) ： 2 0 0 5 2 O 1 0 Bu r k e r t J Ot t o W R，Wr i
33、g h t N AS i d e p o p u l a t i o n s o f g a s t r o i n t e s t i n a l c a n c e r s a r e n o t e n r i c h e d i n s t e m c e l l s J J P a t h o l ， 2 0 0 8 ， 2 1 4( 5 ) ： 5 6 4 5 7 3 7 B e n P o r a t h l ，Th o ms o n M W，C a r e y V J ，e t a 1 An e mb r y o n i c s t e m c e l l l i k e g
34、e ne e x p r e s s i o n s i g n a t u r e i n p o o r l y d i f f e r e n t i a t e d a g g r e s s iv e h u ma n t u mo r s J Na t G e n e t ， 2 0 0 8 ， 4 0 ( 5 ) ： 4 9 9 5 0 7 r 8 Fi l l mo r e C， Ku p e r wa s s e r C Hu ma n br e a s t c a n c e r s t e m c e l l ma r k e r s CD4 4 a n d CDz 4
35、： e nr i c h i n g f o r c e l l s wi t h f u n c t i o na l p r o p e r t i e s i n mi c e o r i n ma n J B r e a s t C a n c e r Re s ， 2 0 0 7 ， 9 ： 3 0 3 9 J i a n g F ， Qi u Q， Kh a n ma A， e t a 1 Al d e h y d e d e h y d r o g e n a s e 1 i s a t u mo r s t e m c e l l a s s o c i a t e d ma
36、r k e r i n l u n g c a n c e r J Mo l C a n c e r Re s ， 2 0 0 9， 7 ( 3 )： 3 3 0 3 3 8 1 0 Z h a n g X Y， Va r t h i M， S y k e s S M， e t a 1 Th e p u t a t i v e c a n c e r s t e m c e l l ma r k e r US P2 2 i s a s u b un i t o f t h e h u ma n S AGA c o mp l e x r e - q u i r e d f o r a c t i
37、 v a t e d t r a n s c r i p t i o n a n d c e l l c y c l e p r o g r e s s i o n J M o l Ce l l ， 2 0 0 8， 2 9 ( 1 )： 1 0 1 1 1 1 1 1 Kl o p p A H，L a c e r d a L ，Gu p t a A，e t a 1 Me s e n c h y ma l s t e m c e l l s p r o mo t e ma mmos p h e r e f or m a t i o n a n d d e c r e a s e E c a d
38、 h e r i n i n no r ma l a n d ma l i g n a n t b r e a s t c e l l s J P I o S On e ， 2 0 1 0 ， 5 ( 8 ) ： e 1 2 1 8 0 1 2 P i y u s h B G，T a me r T O。Gu o z h i J i a n g ，e t a 1 I d e n t i f i c a t i o n o f S e l e c t i v e I n h i b i t o r s Of Ca n c e r S t e m Ce l l s by Hi g h Th r ou
39、 g hp u t S c r e e n i n g J C e l l ， 2 0 0 9 ， 1 3 8 ： 6 4 5 6 5 9 1 3 L i X， L e wi s M T， Hu a n g J ， e t a 1 I n t r in s i c r e s i s t a n c e o f t u mo r i g e n i c b r e a s t c a n c e r c e l l s t 0 c h e mo t h e r a p y 口 Na t l C a n c e r I n s t ， 2 0 0 8 ， 1 0 0 1 6 7 2 6 7 9
40、作者简介 ： 李英华 ( 1 9 7 6 一) ， 女 ， 吉 林通化 人 ， 主治医师 ， 2 0 1 0级在读博 士， 研究方向 ： 肿瘤干细胞 。 收 稿 日期 ： 2 0 1 0 1 0 2 0 修回 日期： 2 0 1 0 一l 1 一l l ( 责任编辑 ： 董方立) ( 上接第 2 2页) 2 Ha g e n f e l d t K， J a n s o n P O， Ho l md a h l G， e t a 1 F e r t i l i t y a n d p r e g n a n c y o u t c o me i n wo me n wi t h c o n g
41、 e n i t a l a d r e n a l h y p e r p l a s i a du e t o 3 4 5 6 7 8 2 1 一h y d r o x y l a s e d e f i c i e n c y Hu m Re p r o d J Hu ma n R e p r o d u c t i o n，2 0 0 8， 2 3： 1 6 0 7 孙晓方 ， 肖新华 院 内高血糖控制 及管理 J 内科急危 重症杂志 ， 2 0 1 0， 1 6 ( 1 ) ： 4 7 胡大一 ， 郭艺芳 稳定性冠心病患者血糖管理 的中国专家共识 J 心脑血管疾病的预防与治疗 ， 2
42、 0 1 0 ， 1 0 ( 1 ) ： 4 9 Cl e a r y P A， Or c h a r d T J ， Ge n u t h S， e t a I Th e e f f e c t o f i n t e n s i v e g l y c e mi c t r e a t me n t o n c o r o n a r y a r t e r y c a l c i f i c a t i o n i n t y p e 1 d i a b e t i c p a r t i c i p a n t s o f t h e D i a b e t e s C o n t r
43、 o l a n d C o mp l i c a t io n Tr i a l E p i d e mi o l o g y o f Di a b e t e s I n t e r v e n t i o n s a n d Co mp l i c a t i o n s(DCCT E DI C) S t u d y J D i a b e t e s ， 2 0 0 6 ， 5 5 ( 1 2 ) ： 3 5 5 6 3 5 6 5 Ho l ma n R R。 Pa u l S K， Be t h e l M A ， e t a 1 1 0 y e a r f o l l o w u
44、 p o f i n t e n s i v e g l u c o s e c o n t r o l i n t y p e 2 d i a b e t e s J E n g l J Me d ， 2 0 0 8 ， 3 5 9 ( 1 5 )： 1 5 7 7 1 5 8 9 Ch i a s s o n J 1 ， J o s s e R G， Go mi s R， e t a 1 Ac a r b o s e t r e a t me n t a n d t h e r i s k o f c a r d i o v a s c u l a r d i s e a s e a n
45、d h y p e r t e n s i o n in p a t i e n t s wi t h i mp a i r e d g l u c o s e t o l e r a n c e ：t h e S T OP NI DD M t r i a l J J AMA， 2 0 0 3， 2 9 0( 4 )： 4 8 6 4 9 4 Ka r a p a n a y io t id e s T， Pi e c h o ws k i J o z wi a k B， Va n Me l l e g， e t a 1 S t r o k p a t t e r n s ， e t io l
46、 o g y a n d p r o g n o s i s i n p a t i e n t s wi t h d i a b e t e s me l l i t u s J Ne u r o l o g y， 2 0 0 4， 6 2： 1 5 5 8 9 Va n c h e r i F， C u r c i o M， B u r g i o A， e t a 1 I mp a i r e d g l u c o s e me t a b o l i s m i n p a t i e n t s wi t h a c u t e s t r o k e a n d n o p r
47、e v i o u s d i a g n o s i s o f d i a b e t e s me l l i t u s J Q J Me d ， 2 0 0 5 ， 9 8 ： 8 7 1 8 7 8 1 0 Al p o r t I ， B a i r d T， B u t c h e r K，e t a 1 F r e q u e n c y a n d t e mp o r a l p r o f i l e o f p o s t s t r o k e h y p e r g l y c e mi a u s i n g c o n t i n u o u s g l u
48、c o s e mo n i t o r in g J Di a b e t e s C a r e ， 2 0 0 6 ， 2 9 ： 1 8 3 9 1 8 4 4 1 1 Th e E u r o p e a n S t r o k e Or g a n i s a t i o n ( E S O) E x e c u t i v e C o mmi t t e e a n d t h e ES O W r i t i n g Co mmi t t e e Gu i d e l i n e s f o r ma na g e me n t o f i s c h e mi c s t r o k e a n d t r a n s i e n t i s c h e mic a t t a c k 2 0 0 8 J C e r e b r o v a s c D i s ， 2 0 0 8， 2 5： 4 5 7 1 2 Mc C o r mi c k M，H