《（参考）id1在宫颈癌及其癌前病变组织中的表达及意义.doc》由会员分享，可在线阅读，更多相关《（参考）id1在宫颈癌及其癌前病变组织中的表达及意义.doc（18页珍藏版）》请在三一文库上搜索。
1、【摘要】 目的 通过检测宫颈癌及其癌前病变组织中dna结合抑制因子-1(id-1)蛋白和mrna的表达情况，探讨id-1在宫颈癌变过程中的作用。方法 采用免疫组化sp法检测id-1蛋白在15例慢性宫颈炎、17例cin?、25例cin?和79例宫颈癌组织中的表达;采用实时荧光定量rt-pcr法检测id-1 mrna在10例慢性宫颈炎、8例cin?、9例cin?和8例宫颈癌组织中的表达。结果 慢性宫颈炎、cin?、cin?、宫颈癌组织中id-1蛋白表达阳性率呈逐渐升高趋势(p0.01)，分别为0、11.8%、40.0%、74.7%;cin?、cin?和宫颈癌组织中id-1 mrna的相对表达量分别
2、是慢性宫颈炎组织的1.34倍、3.42倍和10.37倍，随宫颈癌变程度加重id-1基因表达增加(p cin?-? cin? chronic cervicitis (p0.96，标准曲线拟合满意。id-1基因扩增效率为1.97，-actin为1.99。可见，目的基因与管家基因的扩增效率基本相同，故可采用比较阈值法计算id-1基因拷贝数。cin?、cin?和宫颈癌组织中id-1 mrna的相对表达量分别为慢性宫颈炎组的1.34倍、3.42倍和10.37倍，差异有统计学意义(p=0.003)，id-1基因表达在宫颈癌组高于癌前病变组(p0.05)，而在慢性宫颈炎组织中的表达低于宫颈癌(p=0.031
3、)和cin?组织(p=0.045)。可见，随宫颈癌变程度加重id-1基因表达增加。图1 宫颈癌及其癌前病变组织中id-1蛋白的表达情况表3 id-1 mrna在宫颈癌及其癌前病变组织中的表达3 讨论3.1 id-1的结构与功能 id-1是分化和(或)dna结合抑制因子(inhibitor of differentiation and/or dna binding，id)家族成员之一，id因子是1990年由benezra等3首先从小鼠红白血病(murine erythro-leukemia，mel) 细胞 cdna文库中克隆出来的。id因子属于hlh转录因子，也是迄今为止发现的惟一具有负性调控h
4、lh基因家族功能的调控蛋白。hlh蛋白是一类具有螺旋-环-螺旋(helix-loop-helix，hlh)结构域的dna结合蛋白，id因子可通过hlh结构中的-螺旋相互作用与其他hlh家族转录因子(主要为bhlh类转录因子)结合形成二聚体，但因其结构内缺乏碱性残基区使得这种二聚体无法有效地结合到dna上，不能发挥转录因子活性，从而抑制相关基因转录，产生生物学效应。在哺乳动物细胞中已发现4种id因子，即id-1id-4。目前对id-1的研究最多，发现其参与细胞分化调控、抑制肿瘤细胞凋亡、诱导细胞永生化、促进肿瘤血管生成等1，4，5，在癌症发生发展中起重要作用。而且id-1在许多上皮来源的肿瘤，如
5、食道鳞状上皮癌6、子宫内膜癌7，8、肺癌9、胃癌等均有高表达，推测id-1可能参与了这类上皮源性肿瘤的发生。3.2 id-1在宫颈癌变过程中的作用 目前，关于id-1在宫颈癌变过程中表达情况的研究国内外尚无相关报道。仅schindl等2利用免疫组化方法研究发现早期宫颈癌中有id-1高表达，表达阳性率为79.2%。分别采用免疫组化sp法和实时荧光定量rt-pcr从蛋白和基因水平检测了慢性宫颈炎、cin?、cin?、宫颈癌组织中id-1的表达情况。免疫组化结果显示， id-1表达阳性率与宫颈癌病变程度密切相关，在慢性宫颈炎、cin?、cin?、宫颈鳞癌组织中id-1蛋白表达阳性率呈逐渐升高趋势(p
6、0.01)，分别为0、11.8%、40.0%、74.7%，而且id-1的染色强度也随病变加重而加深，所有的宫颈癌及其癌前病变组织中均出现不同程度的id-1免疫阳性反应;实时荧光定量rt-pcr检测结果也从基因水平进一步证实了免疫组化的结论，即id-1mrna的表达也随宫颈癌变程度加重而增加，cin?、cin?和宫颈鳞癌组织中id-1 mrna的相对表达量分别是慢性宫颈炎组织的1.34倍、3.42倍和10.37倍，差异有统计学意义(p0.05)。综上结果提示id-1过表达参与了宫颈癌的癌变过程，在宫颈癌的发病机制中可能起到了重要作用，但具体致癌机制有待进一步研究阐明。流行病学和分子病毒学已有相当
7、多资料证明，人乳头状瘤病毒(hpv)极有可能是宫颈癌的一个主要病因10。在持续hpv感染的基础上，由慢性宫颈炎?cin?cin?宫颈浸润癌可能是大多数宫颈鳞癌的发病过程。但hpv感染并不能完全解释宫颈癌的发生，比如，前瞻性研究发现宫颈感染hpv16/18型者在1年内只有1/3发展为cin，以后也仅约15%将发展为宫颈癌，其余大部分均自行消退。可见宫颈癌的发生机制中，还存在其他hpv协同因素起重要作用。本研究结果初步显示了转录调节因子id-1与宫颈鳞状上皮癌变进展有关，推测在hpv持续感染的基础上，id-1可能与hpv e6/e7癌基因协同作用参与了宫颈鳞癌的发病机制，促进了宫颈癌变的持续恶性进
8、展，但尚需更深入的研究证实。细胞分化受阻引起无限增殖，导致细胞永生化是体外培养细胞恶性转化过程的第一步，也是体内肿瘤发生与发展进程的早期阶段。大量试验结果表明，id-1具有“永生化”癌基因的某些特性11，如抑制细胞分化、引起细胞持续增殖及血管持续新生等。id-1被认为是致癌性转化的一个重要调节因子。tang等12研究发现，kshv(卡波济肉瘤相关病毒) 感染人内皮细胞可诱导id-1表达增加，且内皮细胞增殖加快，提示id-l表达上调可能是细胞恶性转化的重要步骤。外源性表达id-1可通过抑制p16ink4a/rb和p53途径使细胞永生化，促进细胞不断增殖，最终形成肿瘤4。有研究显示，同时转染id-
9、1和抗凋亡因子bcl-2可诱导成纤维细胞永生化13，仅id-1持续表达就可使皮肤上皮细胞的端粒酶活化，进而导致细胞永生化4。此外，id-1可以通过激活nf-b途径抑制肿瘤细胞凋亡，通过激活mapk途径诱导癌细胞增生，促进肿瘤发生。ling等15的研究发现，通过基因转染上调前列腺癌lncap细胞id-1的表达，可增强nf-b的反式激活及核转移，同时伴有下游效应因子bcl-xl和icam-1的表达上调，使肿瘤细胞凋亡受到抑制;而用反义寡核苷酸技术抑制id-1表达可抑制nf-b的激活，使细胞对tnf-诱导的凋亡敏感。在前列腺癌细胞lncap中id-1 的瞬间表达和稳定表达增加均可活化raf/mek1
10、/2信号途径使癌细胞增殖明显加速，而当用mek1/2抑制剂pd098059阻断raf/mek1/2信号途径后，细胞周期s期的有丝分裂受抑制，细胞生长速度减慢，提示mapk信号途径的活化在id-1诱导的前列腺癌细胞增殖中起重要作用16。总之，本研究结果表明id-1在宫颈癌发生发展中起重要作用，靶向抑制id-1基因表达可能给宫颈癌的治疗带来新的希望。深入研究id-1在宫颈癌发病机制中的作用对宫颈癌的防治研究有重要意义。【参考文献】 1 perk j, iavarone a, benezra r. id family of helix-loop-helix proteins in cancer. n
11、ature reviews cancer, 2005,5(8):603-614.2 schindl m, oberhuber g, obermair a, et al. overexpression of id-1 protein is a marker for unfavorable prognosis in early-stage cervical cancer. cancer res, 2001, 61(15):5703-5706.3 benezra r, davis rl , lockshon d, et al. the protein id: a negative regulator
12、 of helix-loop-helix dna binding proteins. cell, 1990, 61(1): 49-59.4 wong yc, wang x, ling mt. id-1 expression and cell survival. apoptosis, 2004, 9(3):279-289.5 hashmat a, sikder, meghann k, et al. id proteins in cell growth and tumorigenesis. cancer cell, 2003, 3(6):525-530.6 曾达武，方明霞，刘豫瑞. rna干扰分化
13、抑制因子-1基因表达对食管鳞状细胞癌增殖与凋亡的影响. 福建医科大学学报，2009，6：447-4517 黄玉秀，郑秀，刘林芳. id-1在子宫内膜腺癌中的表达及与vegf、tsp-1的关系. 福建医科大学学报，2009，3： 231-233，240.8 陈晶晶，陈柯，王晓秋，等. 子宫内膜样腺癌中id-1、smad4和p21(waf1/cip1)蛋白及mrna的表达. 安徽医科大学学报，2010，1：39-43.9 徐俊，秦治明. id-1与id-3在非小细胞肺癌中的表达及临床意义. 重庆医科大学学报, 2010, 2:213-216.10 连利娟.林巧稚妇科肿瘤学，第4版.北京: 人民卫生
14、出版社, 2006, 278-287.11 lasorella a, uo t, iavarone a. id proteins at the cross-road of development and cancer. oncogene, 2001, 20(58):8326-8333.12 tang j, gordon gm, muller mg, et al.kaposis sarcoma-associated herpesvirus latency-associated nuclear antigen induces expression of the helix-loop-helix p
15、rotein ld-1 in human endothelial cells.j viro1，2003, 77(10): 5975-5984.13 norton jd, atherton gt. coupling of cell growth control and apoptosis functions of id proteins. mol cell biol, 1998, 18(4):2371-2381.14 alani rm, hasskarl j, grace m, et al. immortalization of primary human keratinocytes by th
16、e helix-loop-helix protein, id-1. proc natl acad sci usa, 1999, 96(17):9637-9641.15 ling mt, wang x, ouyang xs, et al. id-1 expression promotes cell survival through activation of nf-kappab signaling pathway in prostate cancer cells. oncogene, 2003,22 (29):4498-4508.16 ling mt, wang x, ouyang xs, et al. activation of mapk signaling pathway is essential for id-1 induced serum independent prostate cancer cell growth. oncogene, 2002, 21(55): 8498-8505 （注：文档可能无法思考全面，请浏览后下载，供参考。可复制、编制，期待你的好评与关注）