替加环素.ppt

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1、替加环素药敏试验方法共识,杨佩红 徐修礼,（一）替加环素相关知识回顾 （二）替加环素药敏试验方法标准 （三）替加环素药敏试验数据分享 （四）替加环素药敏试验方法及影响因素探讨,内 容,（一）替加环素相关知识回顾,替加环素:甘氨酰环类的新型抗菌药物,简介,在9 位上增加甘氨酰氨基,替加环素 ：第一个甘氨酰环素类抗菌药物 增强了体外抗菌活性和抗菌谱(G+/G-/非典型病原体/厌氧菌) 避免了四环素类的耐药机制 通过与核糖体30S 亚单位结合、阻止氨酰化tRNA分子进入核糖体A 位而抑制细菌蛋白质合成,1、产品说明书。 2、Zhanel et al. Expert Rev. Anti Infect.

2、 Ther. 2006;4(1):9-25.,泰阁独特作用机制，有效抑制细菌蛋白质的合成,替加环素通过与核糖体30S 亚单位结合、阻止氨酰化tRNA分子进入核糖体A 位而抑制细菌蛋白质合成,1.泰阁(注射用替加环素)产品说明书,泰阁有效对抗四环素类两大耐药机制,核糖体保护机制,结合位点不同，结合方式独特 具有很高的结合力,外排泵机制,外排泵无法识别替加环素，不会将其泵出 排出蛋白无法识别或是排出蛋白诱导不足,泰阁不受常见耐药机制的影响,抗生素作用靶位改变 如青霉素结合蛋白的修饰 与-内酰胺类抗生素耐药相关(包括碳青霉烯类等) 抗生素酶的降解 与-内酰胺类抗生素耐药相关 DNA解旋酶突变 与喹诺

3、酮类的耐药相关,泰阁有效对抗多种耐药机制 泰阁对常见致病菌(包括耐药菌)抗菌活性强,泰阁广谱覆盖,6. Gilbert DN, et al.热病.40版,2011. 9. 杨青等. 中华检验医学杂志.2003;26(6):342-345. 10. Hu F. et al. J Med Microbiol. 2011.,x,x,x,x,x,x,x,x,x,x,x,x,x,MRSA:耐甲氧西林金黄色葡萄球菌；VRE:耐万古霉素肠球菌；ESBL:超广谱内酰胺酶；CR-AB:耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌；CRE:耐碳青霉烯肠杆菌 #：不包含真菌；：具有抗菌活性，临床敏感率60%；X：代表临床无效、无数据或敏

4、感率30%； *：替加环素对G-菌中铜绿假单胞菌天然耐药；： 部分基因型的VRE对替考拉宁敏感,11. Stephen P. Hawser, et al. International Journal of Antimicrobial Agents. 2010;36 :288294. 12. Michael J. Dowzickya, et al. International Journal of Antimicrobial Agents. 2011;37:562-566. 13. Ting-ting Qu et al.Journal of Clinical Microbiology.2009;

5、47(12):4194-4196.,泰阁药代动力学特性抗生素后效应(PAE),替加环素为时间依赖性抗菌药物，并具有中至长时间的PAE，因此，其PK/PD的评价参数为AUC/MIC,4.Dilip Nathwani et al. Int J of Antimicrobial Agents 25 (2005) 185192,对肺炎链球菌PAE为8.9h,1、体外试验显示，替加环素对各种金葡菌的PAE可持续3.4-4h，对大肠埃希菌(包括带有特定抗药性决定因子的菌株)可持续1.8-2.9h 2、一项嗜中性白血球缺乏症小鼠大腿局部感染模型研究显示， 替加环素体内的PAE持续时间极长，对肺炎链球菌为8.

6、9h,1,1,2,泰阁药代动力学特性分布,替加环素其分布范围要超过血浆的分布容积，可广泛分布到全身各个组织 根据临床研究观察，替加环素的体外血浆蛋白结合率约为71%至89%,1.泰阁(注射用替加环素)产品说明书 3.Peterson LR et al. Int J Antimicrob Agents. 2008;32 Suppl 4:S215-222.,患者手术前接受单剂100mg静脉滴注；多剂替加环素用药数据并未评估 健康人体接受首剂100mg静脉滴注，随后每12小时接受50mg替加环素静脉滴注,替加环素已获FDA及SFDA批准的适应症： 治疗18岁(含)以上由敏感菌株引起的成人复杂性皮肤和

7、皮肤软组织感染(cSSSI) 社区获得性细菌性肺炎 治疗18岁(含)以上由敏感菌株引起的成人复杂性腹腔内感染(cIAI),1.泰阁(注射用替加环素)产品说明书,（二）替加环素药敏试验方法标准,共识内容,药物特性 培养基的选择与制备 检测方法对结果的影响 结果判读,替加环素药敏操作难点,1 替加环素的保存与药液配制,2 培养基对测定结果的影响,4 判定折点对测定结果的影响,3 检测方法对测定结果的影响,5 判读结果时的注意事项,替加环素的保存,避光、干燥 日常使用替加环素纸片储存在8环境下，标准粉储存在 -20冰箱内 长期不使用的纸片和标准粉应密封、避光冻存于-80冰箱内尽量选择所需用量的药物包

8、装，避免反复冻融，药物（包括纸片和标准粉）变色后不可使用,替加环素药液配制注意事项,配制过程需严格避光，尽量缩短配制时间。 配制好的母液尽量一次性用完，未使用完的母液需分装、密封、避光冻存于-80冰箱内（冷冻变色后不可再用），不可反复冻融。,培养基品牌和批号对检测结果的影响,国内常用的BBL和Oxoid的M-H培养基品牌和批号对所有检测菌株的基本一致率和分类一致率均为100%。 替加环素理化性质活泼，建议使用当天新鲜配制的培养基。,培养基存放温度及存放时间不同,存放时间过长对肉汤稀释法测定结果影响较大 肉汤培养基中氧含量较高，存放时间过长会由于氧化作用而使替加环素失活 琼脂培养基在存放时会凝固

9、，用前要煮沸融化，相对含氧量较低,替加环素不同药敏方法的优缺点,肉汤稀释法 CLSI推荐的金标准，适合普通需养菌和兼性厌氧菌， 不适用于 厌氧菌体外药敏检测。 琼脂稀释法 用于非苛养菌、需养菌、兼性厌氧菌、厌氧菌。 Etest法 用于快速生长的需养菌和厌氧菌。文献报道检测不动杆菌MIC结果 高于肉汤稀释法。 仪器法 VITEK 2 AST-GN16卡，文献报道其检测MIC结果明显高于肉汤稀释法 纸片扩散法 用于常见快生长菌及部分苛养菌，不能用于厌氧菌。文献报道该 方法与肉汤稀释法一致性较低。 MTS法 用于需氧菌和厌氧菌 ，文献报道该方法与肉汤稀释法有很好的一致性。,不同方法与肉汤稀释法比较误

10、差发生情况,MIC Test strip 操作方法,将试剂条从冰箱中取出，平衡温度1h； 取45个形态相同的菌落，配成0.5麦氏浓度的菌悬液； 用无菌拭子将菌液在MH琼脂上涂抹均匀； 将测试条标有字和刻度的一面向上，贴于涂有菌液的琼脂上； 一旦贴好测试条后，不要移动,MIC测试条（MIC test strip，MTS）,E-test 法测量结果的判读,纸片扩散法：Basic principles still important.,替加环素药敏折点判读标准,美国食品药品监督局FDA 及欧洲药敏试验委员会EUCAST有替加环素的判断折点。 CLSI目前无替加环素对的折点 我国微生物实验室目前参照美

11、国FDA指定的折点判读标准。,替加环素药敏实验的判断折点,无论何种检测方法，只有当质控菌株做的的药敏结果在可接受的质控范围内时，待测菌株的检测结果才有效。,结果判读注意事项,替加环素药敏试验质控范围,替加环素体外药敏检测结果的影响因素和推荐对策,药物本身的稳定性 培养基的选择、配制时间、 检测方法、 菌种类型以及判读折点。 共识强调：药敏纸片保存、配制新鲜的培养基、了解不同检测方法的局限性，,替加环素体外药敏检测结果的影响因素和推荐对策,替加环素体外药敏检测结果的影响因素和推荐对策,（三）西京医院替加环素药敏结果数据,材料和方法,（1）菌株来源 收集2013.8-2014.5月院内感染非重复病

12、原菌。 包括：aba 72 株，CRE 9株，MRSA 11株。 （2） 标准菌株 ATCC25922大肠埃希菌用于E-test条、MTS条、 VITEK2 AST-GN16 常规质控。 (3) MH培养基 购于温州康泰生物公司（进口分装美国BD公司MH琼脂干粉）批号：2296146 有效期：201707,（4） 替加环素E-test条购于法国梅里埃公司 批号：1001744730 有效期：2015.5.28 替加环素MTS条购于意大利Liofilchem公司 批号：031113033 有效期：2016.3.10 VITEK2 AST-GN16卡购于法国梅里埃公司 批号：113272640 有

13、效期：2014.6.1 （5） 检测方法：E-test、MTS法、VITEK 2仪器法测定替加环素的MIC，参照美国临床和实验室标准协会CLSI文件要求进行。 （6）替加环素药敏判断折点 专家建议采用美国食品药品监督局FDA标准,不同药敏方法测定替加环素对72株鲍曼不动杆菌的抗菌活性,不同药敏方法测定替加环素对9株CRE菌株的抗菌活性,不同药敏方法测定替加环素对11株MRSA的抗菌活性,统计学分析指标,基本一致率（EA）：两种方法检测MIC相同或相差在1个稀释度范围以内的比例。 分类一致率（CA）：按照相同折点标准，敏感、中介、耐药一致的菌株百分比。 小误差（mE）:菌株在同一折点判定标准下，

14、被评估方法将中介判定为敏感或耐药。 大误差（ME）:使用同一折点判定标准，被评估方法将敏感判定为耐药，即“假耐药” 重大误差（VME):使用同一指点判定标注，被评估方法将耐药判定为敏感，即“假敏感” CLSI规定可接受的误差范围：CA和EA90%,VME1.5%,ME3%,mE 10%。,替加环素E-test法、VITEK2仪器法、KB法与MTS法测定比较结果（%）,试验结论,替加环素不同药敏方法之间存在不同差异。 E-test法、仪器法、KB法与MTS法的一致性较低。 MTS法结果较为稳定（已有文献报道，本实验室待与肉汤稀释法确认比较） 替加环素体外药敏试验需要严格操作规程，在专家共识的建议

15、下，不断提高结果的准确性。,据文献报道：,MTS法、琼脂稀释法与肉汤稀释法相关性较好。 MRSA、VRE、Eco，VITEK2仪器法肉汤稀释法符合性好。 aba、kpn、eae、ecl，MTS法符合性好；E-test法存在争议； VITEK2仪器法与肉汤稀释法一致性较低。 但也有研究表明： 对CRAB菌株，琼脂稀释法、 E-test法、 VITEK2仪器法均不适合检测替加环素的敏感性，其检测中介或耐药菌株需用微量肉汤稀释法确认，对MTS法测定需谨慎解释。,（四）替加环素药敏试验方法及影响因素探讨,替加环素药敏试验影响因素,培养基的类型：BBL和Oxoid MH琼脂 配制时间：最好新鲜配制 检测方法：药敏试验方法的差异 菌种的类型：不同菌种的差异 折点的选择：FDA 和EUCAST 药品试剂的避光冷冻保存 结果的判断,小 结,替加环素的抗菌谱广 抗阴性、阳性菌、厌氧、非典型菌 天然耐药：绿脓杆菌 目前监测数据显示： 替加环素保持优秀的抗菌活性 包括 MRSA、VRE、ESBL、CRE、CRAB 实验室开展替加环素药敏需要注意标准化 培养基种类、存放时间及存放温度 药敏检测方法差异 存在不同判定折点,替加环素药敏试验方法的差异性决定了药敏方法标准化的迫切性。 MTS法方便可靠，是实验室进行替加环素药敏试验的理想方法。但仍需肉汤稀释法大量菌株的确认实验数据支持。,谢 谢！,