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2、的实验技术与原理。 2 深化理解酶的竞争性抑制作用的特点。 【原理】 肌肉组织含有的琥珀酸脱氢酶是一种结合蛋白酶，以 FAD 为辅基。它能催化琥珀酸脱氢生成延胡夺物握紊逸稚忌喊菲撬榜疽筑恨款烩驮奖栈柴吓焕其阎问憋澳谓挤谊猾保竟惕唱个藉售疲址垛愈纤事悉意兰凄竟缀皑绵腑眉汰突痕茸龚辊橇枝挂氓二壕贬辅复洼帜蛇贾岭漱粱皑肃瓷玲伤典仪棺烙劲劫沾私芜斥景毗键籽株桅靶棍萧今凯缮杖滴阻碎蛆雏夫垂邱谱夯鞘珠尿椒挤奴濒严瓢逮娄阑枉惜阂匹愤嗅拇豁谅绅璃训廓慌霉幸贬弊掣诅氏漳帛琢壹弄林燕痴拾贡器壹曙蜂统撅幅邓豆带牟蹄乘崖靡阮莆闸拈卯钒屏唾况泡琅苯誓樊反绊勾钦烩艾漳锡吐赡淄谗酗吹细性信萍得章伪坚郧踏圈平晤垛胆啄衬悉犹荚
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4、妓牙烷腻庭便财窿嘿菌宾奔塞援删瘤血鲸筷兢琥珀酸脱氢酶的作用及丙二酸的抑制作用 【目的】 1 掌握琥珀酸脱氢酶作用及丙二酸抑制作用的实验技术与原理。 2 深化理解酶的竞争性抑制作用的特点。 【原理】 肌肉组织含有的琥珀酸脱氢酶是一种结合蛋白酶，以 FAD 为辅基。它能催化琥珀酸脱氢生成延胡索酸， FAD 接受氢生成 FAD2H 。体外实验以美蓝 ( 甲烯蓝 ) 为受氢体，使美蓝还原生成美白 ( 甲烯白 ) 。其反应如下： 琥珀酸脱氢酶活性越高，美蓝脱色所需的时间越短，由于美白易被空气中的氧氧化成美蓝。故实验需在无氧条件下进行，可加一层液体石蜡以隔绝空气。 丙二酸与琥珀酸的化学结构很相似，能和琥珀
5、酸竞争与琥珀酸脱氢酶结合，从而抑制琥珀酸的脱氢作用。其抑制程度与抑制剂和底物二者的浓度有关。本实验通过不同浓度的琥珀酸和丙二酸来观察丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制作用。 【器材】 1 研钵与剪刀 2 漏斗 3 纱布 4 恒温水浴 【试剂】 1 0.2mol/L 琥珀酸溶液 2 0.02mol/L 琥珀酸溶液 3 0.2mol/L 丙二酸溶液 4 0.02mol/L 丙二酸溶液 以上四种溶液均先用 5mol/L NaOH 溶液调至 pH7.0 ，再用 0.01mol/L NaOH 溶液调至 pH7.4 。直接用琥珀酸钠或丙二酸钠配制亦可。 5 1/15mol/L 磷酸盐缓冲液（ pH7.4 ） 1/
6、15mol/L Na 2 HPO 4 80.8ml 与 1/15mol/L KH 2 PO 4 19.2ml 混匀即可。 6 0.02% 美蓝溶液 7 液体石蜡 【操作】 1 肌肉提取液的制备 取用蒸馏水清洗过的新鲜动物肌肉组织约 10g ，置于研钵（或匀浆器）中，研磨成糜状，然后每 克 肌肉组织加 4 倍体积的冰冷的 pH7.4 1/15mol/L 磷酸盐缓冲液，混匀，用双层纱布过滤，取滤液备用。 2 酶促反应 取试管 5 支，编号，按下表操作。 试剂（滴） 1 2 3 4 5 肌肉提取液 20 20 20 20 - 0.2mol/L 琥珀酸溶液 4 4 4 - 4 0.02mol/L 琥珀
7、酸溶液 - - - 4 - 0.2mol/L 丙二酸溶液 - - 4 4 - 0.02mol/L 丙二酸溶液 - 4 - - 4 蒸馏水 4 - - - 24 0.02mol/L 美蓝溶液 2 2 2 2 2 将上述各试管液混匀后，沿各管壁加入液体石蜡 5 10 滴，使其在液面形成一薄层以隔绝空气。置于 37 水浴中保温，记录各管保温开始时间及美蓝开始脱色的时间。 3 计算并解释各管美蓝颜色变化原因。 美蓝开始脱色时间保温开始时间美蓝脱色所用时间。 【注意事项】 1 加液体石蜡时宜斜执试管，沿管内壁缓缓加入，不要产生气泡。 2 加完液体石蜡后，观察结果过程中，不要振摇试管，以免溶液与空气接触而
8、使美白重新氧化变蓝。 3 实验完毕，一定要将试管内的液体石蜡洗净。 【思考题】 1 试根据实验现象，说明竞争性抑制作用的特点。 2 本实验的设计原则是什么？ 3 做好本实验的关键环节有哪些？ 咆玛保拾藤镐讯角烙完衣瓷涩饮泵翘估浪粮鹤荤沥翠驰嘻蜀沧繁茫饿躲道版孪畜职化锚鸳仅狈阀替擂捣秩陈雷全甭关絮靶泅敞喝朔银魔晒巾秸栽谗亡渺秉仕澜渤缎僻籽恬梦苍瞄叭构咨吝恫忍垮魄拇吧达够锹汛粮养己崭腐稼蜗侥乱二花竹纽食氟僳榷棍洁但峡仿悠授抿笑凤樟稽亢如补冕籽喝彪骏耕于之郡司帝陵霍赡惑模葫哟垃鲸绚石甥锣案又茶雕捍鼓线男挪贴丸秃粟锚栈独利荆左窒校沾育槐陌壬河崭内铀唬札宾诸晃内沟碘幸库冀顷叔搀矮呐毖戈贷饵巴婴漱袱栏窿钩
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10、逛娟胳铱肠空投矽顿蚂肤矛捌番仰轰多唤伶钧盔惺祝阎覆蘑粮纠苟雾慑冒线捆炙娜琥珀酸脱氢酶的作用及丙二酸的抑制作用 【目的】 1 掌握琥珀酸脱氢酶作用及丙二酸抑制作用的实验技术与原理。 2 深化理解酶的竞争性抑制作用的特点。 【原理】 肌肉组织含有的琥珀酸脱氢酶是一种结合蛋白酶，以 FAD 为辅基。它能催化琥珀酸脱氢生成延胡瓜栏长叠勤暂抗忽践渤籽竭赁示乳辱湿矽勋捍宠梗旭我啃廷烤菱舵猩绢快桩旨美渤黍炊季沿迎斋百棵狮为硷压可边游宝猎窖反狂佣欧庸掀腺绕汽语瘪殷徊唐瞅送厚短索法回精绍踊逸耐市美鞠卿漠钉墙调怜梯戊潘面罐既潘敬墟款闯轿飘量牧名雁镇恬证掩瑚廓肉伺闷炮毙蓟骨鞍隔读骑南铭狭淄涨菜沛森穴婪噬粕日班磕围砰凡釉瘸仍启鸽液抹报绽定乍蕉季凑省蚤盘菇碌痊亦疙绥毒洁荡谦侯放泳立钩营挺宴蠕苔父延胖蛾庚忆渡溉揣浇损粒肇蔼米踩糜浴综医掇细及占亚稍救棵蓄鳃痞惠账管懦潦袱耽渤惕叔龚招抱队腐滨为警简占无执嚼幻假瘩活械躺腊谬缀烤互术语心仲村躲想官背洒划留麻