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1、,仙灵芝,清水芙蓉,墨牡丹,胭脂点雪,植物的组织培养,课题1菊花的组织培养,1、说明植物组织培养的基本原理。 2、学习植物组织培养的基本技术。 3、掌握实验操作过程中使用的无菌技术。(重、难点) 4、进行菊花或其他植物的组织培养。,学习目标,预习初知：答案展示,植物组织培养的相关概念:,（1）细胞分化：形态、结构和生理功能，选择性表达,（2）细胞的全能性：已经高度分化，完整个体,（3）愈伤组织：细胞分裂，疏松而无规则，高度液泡化， 无定形,薄壁,（4）脱分化：已经分化，愈伤组织,（5）再分化：愈伤组织，根或芽,知识深化：我问你答,胡萝卜的组织培养示意图,1、植物组织培养的基本原理是什么？,植物
2、细胞的全能性,2、细胞为什么具有全能性？,构成生物体的细胞内含有该物种生长发育所必需的全部遗传物质,即具有完整的细胞核,3、实现细胞全能性，首先做的是？,在一定的时间和空间条件下，基因选择性表达；具有不可逆性,离体,选材：生长旺盛的嫩枝；,这些部位的细胞相对幼嫩，细胞分化程度低，细胞分裂能力强，细胞的全能性较高，更易诱导进行脱分化和再分化。,知识深化：我问你答,4、实现细胞的全能性，除了离体外，还需要哪些条件？,（1）离体（前提条件） （2）一定的营养物质 （3）植物激素 （4）环境条件：适宜的pH、温度、光照等,条件：,大量元素,有机物,微量元素,提供无机盐,甘氨酸、维生素等：,蔗糖：,（1
3、）离体（前提条件） （2）一定的营养物质 （3）植物激素 （4）环境条件：适宜的pH、温度、光照等,营养物质,MS培养基,作为碳源提供能量，维持细胞渗透压（必要成分）,满足离体细胞特殊的营养需求,注意：MS培养基以无机养料为主， 而微生物培养基以有机养料为主。,（2）一定的营养物质（成分？作用？）,知识深化：我问你答,4、要实现细胞的全能性，除了离体外，还需要哪些条件？,（1）离体（前提条件） （2）一定的营养物质 （3）植物激素 （4）环境条件：适宜的pH、温度、光照等,条件：,（3）植物激素（种类？影响因素？）,植物激素：生长素（IAA或NAA等）、细胞分裂素（BA）等,A、激素的浓度,B
4、、使用的先后顺序,C、用量的比例,知识深化：我问你答,结合生长素/细胞分裂素用量比例的影响思考：,在进行植物组织培养时，至少需配制几种培养基？,几种培养基的作用及顺序分别是？,比值适中时，诱导愈伤组织的形成；,比值低时，诱导发芽；,比值高时，诱导生根。,至少三种,知识深化：我问你答,4、要实现细胞的全能性，除了离体外，还需要哪些条件？,（1）离体（前提条件） （2）一定的营养物质 （3）植物激素 （4）环境条件：适宜的pH、温度、光照等,条件：,（4）环境条件：适宜的pH、温度、光照等,菊花组织培养过程中，pH控制在5.8，温度控制在1822 ，每天光照12h。,一般情况下，脱分化过程是否需要
5、光照？再分化过程呢？,光照条件下，利于诱导细胞分化，,脱分化过程是通过细胞分裂形成愈伤组织，,需要进行避光处理，,再分化过程需要适宜光照，叶绿素的形成必须要有光。,知识深化：我问你答,实验操作流程包括：,1、制备MS固体培养基,问题探究：实验操作,1制 2消 3接 4培 5移 6栽,【思考及讨论】 利用手中的小纸片，模拟制备过程，注意各成分的添加顺序。,(1)配制各种母液：,(2)配制培养基：,(3)灭菌：,常温保存。使用时根据母液的浓缩倍数，计算用量，加水稀释。,灭菌方法是高压蒸汽灭菌（温度121，时间1530分钟 ）,蒸馏水800ml,蔗糖30g,大量元素母液,琼脂10g,微量元素母液,有
6、机物母液,植物激素母液,定容至1000ml，调节PH，分装到各锥形瓶（50或100ml/个）,实验操作流程包括：,2、外植体消毒,1制 2消 3接 4培 5移 6栽,【思考及讨论】 熟读外植体消毒的流程，总结出口诀或顺口溜。,消毒液：70%酒精；0.1%氯化汞（又称升汞，有毒）,注意：在此消毒过程中，强度是不是越大越好，为什么？,考虑药剂的消毒效果以及植物细胞的耐受能力,问题探究：实验操作,实验操作流程包括：,1制 2消 3接 4培 5移 6栽,【注意】通过视频学习：3接种；4培养；5移栽；6栽培四步， 特别注意实验操作方法。,用70%酒精将工作台擦拭，然后点燃酒精灯。,（1）接种前，如何进行
7、消毒灭菌？,（2）插入外植体时，为什么不能倒插？,插入外植体时，形态学上端在上，更利于茎段下部生根，吸收矿质元素和养料。 （生长素的极性运输；生长素/细胞分裂素比值高，利于根的分化）,所有的接种操作必须在酒精灯火焰旁进行，,并且每次使用器械后，都要用火焰灼烧灭菌。,（3）接种时每瓶接种68块外植体。只接种1块，行不行？为什么,避免偶然性误差,平行重复原则,问题探究：实验操作,实验难点探究：,2、如果某一步灭菌不彻底，组织培养能否成功？ 如果设计对照实验，来验证无菌操作是植物组织培养成功的关键环节，你的设计思路是？实验中的因变量是？,实验组：严格控制无菌条件,1、实验操作中如何实现无菌条件？,（
8、1）培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）,（2）外植体的消毒（70%酒精、0.1%氯化汞）,（3）接种中的无菌操作（70%酒精、酒精灯、火焰灼烧）,（4）无菌箱的培养，定期消毒。,（5）移栽至消过毒的环境中,对照组：某一步灭菌不彻底,对照原则,因变量：外植体的生长情况,在植物组织培养过程中，属于引起外植体被污染的原因有 （ ） 培养基灭菌不彻底；外植体消毒不彻底； 接种中被杂菌污染；锥形瓶密封性差等。 A B C D,习题训练,D,菊花的组织培养,基本原理,细胞的全能性,基本过程,脱分化,愈伤组织,再分化,影响因素,材料选择、营养物质、植物激素、环境条件,操作流程,配制MS固体培养基,外植体的 消毒,
9、接种,培养,移栽,栽培,知识小结,把胡萝卜的单个韧皮部的细胞放入配制的培养基上培养， 获得了完整的植株。 这种细胞工程技术和繁殖方式分别属于( ) A细胞杂交技术和有性生殖 B植物组织培养和无性生殖 C细胞拆合技术和有性生殖 D细胞培养和无性生殖,习题训练,B,在外植体脱分化形成愈伤组织的过程中，下列哪个条件是不 需要的( ) A消毒灭菌 B适宜的温度 C充足的光照 D适宜的养料和激素,习题训练,C,1某株名贵花卉用种子繁殖会发生性状分离。为了防止性状分离并快速繁殖，可以利用该植株的一部分器官或组织进行离体培养，发育出完整的植株。进行离体培养时不应采用该株的( ) A茎尖 B子房壁 C叶片 D花粉粒 2某园艺场经过长期精心选育，培养出一株形态优美的兰花，如果要保持母本的优良性状，并尽快大规模繁殖，最适合的繁殖方式是 ( ) A分裂生殖 B有性生殖 C孢子生殖 D组织培养 3植物组织培养的原理、培养过程的顺序及诱导的植物激素分别是( ) 细胞的全能性离体植物器官.组织或细胞 根.芽生长素和细胞分裂素生长素和乙烯愈伤组织再分化脱分化植物体 A. B. C. D.,提升训练,D,D,A,