毕业设计（论文）高粱叶枯病的室内毒力测定.doc

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1、编号：编号：119070241015 本 科 毕 业 论 文 题 目：高粱叶枯病的室内毒力测定 学 院： 农学院 专 业： 植物保护 年级： 2011 级 姓 名： 指导教师： 完成日期： 2015 年 5 月 目 录 摘要1 Abstract2 引言3 1 材料和方法3 1.1 供试材料3 1.2 室内药剂筛选及配制4 1.3 试验方法5 2 结果与分析6 2.1 单剂抑制率的测定6 2.2 5 种杀菌剂对病原菌孢子相对抑制率的显著性分析8 2.3 毒力回归方程的计算11 3 结论与讨论12 参考文献13 致谢14 摘 要 高粱叶枯病是高粱上一种真菌病害，本文以高粱叶枯病为材料，选用 5 种

2、低毒 杀菌剂，采用生长速率法和孢子萌发抑制法对常用的五种杀菌剂进行室内毒力测定。 结果表明，50%异菌脲 500 倍液对两种供试病菌的毒力最强，EC50 值分别为 4.98E- 26、7.47E-02mg/L。50%多菌灵 400 倍液对高粱叶枯病菌的毒力仅次于异菌脲，55%烯 酰福美双 1200 倍液的抑菌效果仅次于 50%多菌灵，这 3 种药剂都可作为防治高粱 叶枯病的有效杀菌剂。而 50%嘧菌酯 400 倍液和 800 倍液下该菌株表现出微弱的生 长促进作用。 关键词：高粱叶枯病；杀菌剂；毒力测定；萌发抑制率 Abstract Sorghum leaf blight is a new k

3、ind of fungi diseases on sorghum. In the paper, five common fungicides indoor toxicity to the pathogen from sorghum leaf blight disease tissue were tested by using the growth rate and spore germination inhibition method. The results show that the Iprodione 50% wp 500 times liquid exhibited the lowes

4、t growth effect and the best inhibitory effect, its EC50 value respectively 4.98E-26mg/L、7.47E- 02mg/L. Carbendazim 50% wp 400 times bacteriostatic effect only worse than Iprodione. Thiram 55% wdg 1200 times bacteriostatic effect worse than Carbendazim 50% wp. The three pesticides can be effective f

5、ungicides for the prevention and control of the disease. But Azoxystrobin 50% wp 400 times and 800 times liquid showed weak growth promoting effect. Key Words: sorghum leaf blight；fungicide；toxicity measurement；germination inhibition rate 引 言 高粱属禾本科一年生草本植物，又名蜀黍、秫秫、芦粟、茭子、木稷等，高粱 是酿酒的重要原料，泸州特曲、茅台、竹叶青等名

6、酒都是以高粱为主要原料酿造的 【1】。高粱在中国的栽培面积很广，其中山西地区是高粱的主产量区，在内蒙地区， 高粱的的产量也占有很大的比重。 随着高粱大面积的种植，高粱病害种类高达 30 多种，其主要为害以黑穗病， 叶斑病，炭疽病和大斑病为主【2】，高粱散黑穗病在我国各高粱产区普遍发病，在 华北、东北发病较重，近几年来严重影响高粱产量【3】。高粱上的新病害也逐步增 多，高粱叶枯病在一些地区也被发现。高粱叶枯病是由交链格孢（Alternaria alternata）引起的真菌性病害，属于无性类真菌，链格孢属是全球分布最广，经济 上重要的半知菌类真菌之一，其菌丝黑色，大量存在于土壤、空气和作为培养料

7、的 各种有机质上，其孢子通过空气传播【4】。由链格孢引起的病害一般都属于流行性 较强的病害。高粱叶枯病是高粱上一种新的病害，目前还没有特效的防治药剂，本 文采用菌丝生长速率法和孢子抑制率法对五种杀菌剂对于高粱叶枯病菌的室内毒力 进行研究，为高粱叶枯病的田间防治提供理论指导。 1 材料和方法 1.1 供试材料供试材料 1.1.1 供试菌供试菌种种 采集于内蒙古通辽市内蒙古民族大学农学院试验田，进行分离纯化【5】获得两 个菌种：高粱叶枯 2 号菌种和高粱叶枯 4 号菌种，并保存于冷藏箱备用。 1.1.2 供试药剂及有效成分供试药剂及有效成分 编 号药剂名称有效成分剂型防治对象生产厂家 1异菌脲50

8、%可湿性粉剂小麦赤霉病 海南正业中农高科技股份有限公 司 2多菌灵50%可湿性粉剂 水果蔬菜等多种病 害 利民化工 3烯酰福美双55%水分散粒剂霜霉病青岛瀚生科技 4中生菌素3%可湿性粉剂辣椒疫病利民化工 5嘧菌酯50%可湿性粉剂黄瓜枯萎病陕西美邦农药 1.1.3 培养基制备原料培养基制备原料 本试验均采用 PDA 培养基进行接种培养，培养基配制原料包括马铃薯 200g， 葡萄糖 20g，琼脂 20g 和蒸馏水 1000ml。 1.1.4 试验主要仪器试验主要仪器设备设备 超净工作台，LRHS-250B 恒温恒湿培养箱（上海贺德实验设备有限公司），立 鹤牌电热恒温培养箱（山东潍坊医疗器械厂），

9、101 型电热鼓风干燥箱（江苏省通 州市通用科技仪器厂），万分之一电子天平(上海精密科学仪器公司)，电子显微镜( 日本尼康公司)，高压灭菌锅（上海三申），酒精灯，培养皿，移液管，接种环，打 孔器，直尺，锥形瓶，烧杯，搅拌棒，电磁炉，镊子等。 1.2 试验室内药剂梯度调节及培养基的配制试验室内药剂梯度调节及培养基的配制 1.2.1 PDA 培养基的培养基的制备制备 按照 PDA 培养基的制备配方，配制 1000ml 培养基五组，每组分装至 3 个三角 瓶中，封装完毕后，用高压灭菌锅 121灭菌 30min 后取出冷却备用。 1.2.2 药剂梯度调节及配制方案药剂梯度调节及配制方案 本试验的每个药

10、剂均设定五个梯度，一个对照，每个梯度三次重复。具体配制 为：50%异菌脲可湿性粉剂配制 500 倍母液，配制成 500、1000、1500、2000、2500 倍液；50%多菌灵可湿性粉剂配制 400 倍母液，配 制成 400、600、800、1000、1200 倍液；55%烯酰福美双水分散粒剂配制 400 倍母 液，配成 400、800、1000、1200、1600 倍液；3%中生菌素可湿性粉剂配制成 400 倍母液，配制成 400、600、800、1000、1200 倍液；50%嘧菌酯可湿性粉剂配制 400 倍母液，配成 400、800、1000、1200、1600 倍液。 1.3 试验方

11、法试验方法 1.3.1 生长速率法生长速率法 本试验需在超净工作台上进行，并且试验所用的培养皿和其他仪器都要放进干 热灭菌箱 165灭菌 1h，冷却后取出备用。在无菌条件下，将上述配置好的药剂取 1ml 放入 9ml 冷却至约 50的 PDA 培养基中混合均匀，倒入消毒灭菌的培养皿中 制成带药的培养基平板，每个药剂浓度重复 3 次。然后用直径为 5mm 的打孔器， 在试验前将已经培养好的高粱叶枯病 2 号菌种的菌落中打取直径为 5mm 的菌饼， 将菌饼分别接种在含不同浓度药剂的 PDA 平板的中心,25下放入恒温培养箱中培 养。另外，每个药剂做一个对照处理，对照组取 1ml 无菌水放入 9ml

12、 PDA 培养基中 混合，重复三次。（高粱叶枯病 4 号菌种采取同样的方法）最后在培养的第 2、4、6 天分别调查病原菌菌丝生长情况，并用十字交叉法测量其菌落直径，记录 数据。 菌落直径抑制率=%100 - 对照菌落直径 处理菌落直径对照菌落直径 孢子抑制率=%100 - 对照孢子数 处理孢子数对照孢子数 1.3.2 孢子孢子数目法数目法 将培养 5 至 6 天的病原菌取出，在培养皿中滴加 5L tween-20 试剂和 50L 的 蒸馏水，用玻璃棒搅拌，配制成均匀的孢子悬浮液，用球计数板记录孢子数目。 2 结果与分析 2.1 单剂抑制率的测定单剂抑制率的测定 由表 1 可知，50%异菌脲抑制

13、率范围为 82.3%-48.3%，其次为 55%烯酰福美双， 而抑制率最低的是 50%嘧菌酯；进行显著性分析的结果表示 50%异菌脲 500-2000 倍液抑菌效果最好，都处于同一显著水平，各倍液之间防效相同，但较其他药剂有 差异。55%福美双抑菌效果次于 50%异菌脲，50%多菌灵、50%嘧菌酯、3%中生菌 素及各倍液，各药剂之间存在都差异，但不明显。 表 1 五种药剂各梯度对高粱叶枯 2 号菌株菌落生长平均速率及抑制 药剂及有效成分稀释倍数GLYK2 显著水平 菌落生长平均速率抑制率 0.05 3%中生菌素400 倍液7.21110.4126 GHK 3%中生菌素1200 倍液9.5667

14、0.2208 K 50%嘧菌酯800 倍液5.96390.4197 HK 3%中生菌素600 倍液8.39810.3159 FGHK 3%中生菌素800 倍液9.54810.2223 EFGH 3%中生菌素1000 倍液9.39070.2351 EFGH 50%嘧菌酯400 倍液8.49260.1736 DEFGH 50%嘧菌酯1600 倍液7.56940.2635 DEFG 50%嘧菌酯1200 倍液5.54540.4604 CDEFG 50%多菌灵1000 倍液5.74260.3716 BCDEF 50%多菌灵400 倍液4.45370.5127 ABCDE 50%多菌灵600 倍液6.2

15、9440.3112 ABCDE 50%多菌灵800 倍液6.91850.2429 ABCDE 50%多菌灵1200 倍液7.42780.1872 ABCDE 55%烯酰福美双400 倍液6.96850.4219 ABCDE 55%烯酰福美双1600 倍液3.46110.7129 ABCDE 50%嘧菌酯1000 倍液6.41020.3763 ABCDE 55%烯酰福美双1000 倍液5.57960.5371 ABCD 55%烯酰福美双1200 倍液4.94070.5901 ABCD 55%烯酰福美双800 倍液5.28520.5616 ABC 50%异菌脲2500 倍液3.27220.4833

16、 AB 50%异菌脲2000 倍液2.62780.5851 A 50%异菌脲1500 倍液2.19440.6535 A 50%异菌脲1000 倍液1.62780.7429 A 50%异菌脲500 倍液1.12220.8228 A 由表 2 可知，高粱叶枯 4 号菌株，50%异菌脲抑制率范围为 68.1%-45.6%，其 次为 55%烯酰福美双，而 50%嘧菌酯低倍液下对于该菌种的生长具有增效作用； 进行显著性分析的结果表示 50%异菌脲 500 倍液抑菌效果最好，较其他药剂有差异。 55%福美双抑菌效果次于 50%异菌脲，50%嘧菌酯显著水平最低，其抑菌效果最差。 表 2 五种药剂各梯度对高粱

17、叶枯 4 号菌株菌落生长平均速率及抑制率比较 药剂及有效成分稀释倍数GLYK4 显著水平 菌落生长平均速率抑制率 0.05 50%嘧菌酯400 倍液8.0648-0.3825K 3%中生菌素1200 倍液9.87220.1922 K 50%嘧菌酯1000 倍液5.29540.0922G 50%嘧菌酯800 倍液8.7148-0.4939H 50%嘧菌酯1200 倍液3.14170.4614F 50%多菌灵1200 倍液6.75190.2209F 50%嘧菌酯1600 倍液1.84720.6833EF 50%多菌灵400 倍液4.60190.469EF 50%多菌灵600 倍液6.02040.3

18、053EF 50%多菌灵800 倍液6.33520.269EF 50%多菌灵1000 倍液5.39810.3771EF 3%中生菌素1000 倍液9.67590.2083 EF 3%中生菌素800 倍液9.65560.2099 CDEF 55%烯酰福美双1200 倍液3.64070.6467 BCDEF 55%烯酰福美双1600 倍液3.76110.635 BCDEF 3%中生菌素600 倍液8.62960.2939 BCDEF 3%中生菌素400 倍液6.22040.4911 ABCDEF 55%烯酰福美双800 倍液6.26850.3917 ABCDE 55%烯酰福美双1000 倍液3.3

19、50.6749 ABCDE 50%异菌脲2500 倍液3.90.4558ABCD 55%烯酰福美双400 倍液5.97220.4204 ABC 50%异菌脲1500 倍液3.47780.5147ABC 50%异菌脲2000 倍液2.92780.5914ABC 50%异菌脲1000 倍液2.96110.5868AB 50%异菌脲500 倍液2.28890.6806A 2.2 5 种杀菌剂对病原菌孢子相对抑制率的种杀菌剂对病原菌孢子相对抑制率的显著性分析显著性分析 表 3 表明，对于 2 号菌种，50%异菌脲的防效较其他杀菌剂高，其中 50%异菌 脲 500 倍液，孢子抑制效果最好；其次为 50%

20、异菌脲 1500 倍液，50%异菌脲 2000 倍液；显著水平最低的为 3%中生菌 1200 倍液，其防效表现为最差。 表 3 五种药剂各梯度对高粱叶枯 2 号菌株孢子抑制率显著性差异比较 显著水平 药剂及有效成分稀释倍数孢子相对抑制率 0.010.05 3%中生菌素1200 倍液0.8321gK 50%嘧菌酯800 倍液0.8754fgHK 3%中生菌素400 倍液0.8016efgGHK 3%中生菌素600 倍液0.8495defgFGHK 3%中生菌素800 倍液0.8567cdefgEFGH 50%嘧菌酯1600 倍液0.8431cdefgdefgh 3%中生菌素1000 倍液0.88

21、52cdefgEFGH 50%嘧菌酯400 倍液0.8946bcdefDEFGH 50%嘧菌酯1200 倍液0.8846abcdefCDEFG 50%多菌灵1000 倍液0.9089abcdefBCDEF 50%嘧菌酯1000 倍液0.8992abcdeABCDE 50%多菌灵1200 倍液0.9115abcdeABCDE 50%多菌灵800 倍液0.9123abcdeABCDE 50%多菌灵400 倍液0.9216abcdABCDE 55%烯酰福美双1600 倍液0.9253abcdABCDE 50%多菌灵600 倍液0.9311abcdABCDE 55%烯酰福美双400 倍液0.9564a

22、bcdABCDE 55%烯酰福美双1000 倍液0.9434abcABCD 55%烯酰福美双1200 倍液0.9658abcABCD 55%烯酰福美双800 倍液0.9684abcABC 50%异菌脲2500 倍液0.9838abAB 50%异菌脲2000 倍液0.9844aA 50%异菌脲1500 倍液0.9857aA 50%异菌脲1000 倍液0.9864aAB 50%异菌脲500 倍液0.9875aA 表 4 表明，4 号菌种，50%异菌脲 500 倍液显著水平最高，其防效最好，50% 异菌脲 1000 倍液仅次之。其他药剂之间都存在着差异性；显著水平最低的为 50% 嘧菌酯，其抑制效果

23、最差。3%中生菌素，55%福美双和 50%多菌灵之间都存在着差 异，防治效果都不同。 表 4 五种药剂各梯度对高粱叶枯 4 号菌株孢子抑制率显著性差异比较 显著水平 药剂及有效成分稀释倍数孢子相对抑制率 0.010.05 50%嘧菌酯400 倍液-0.3529hK 50%嘧菌酯800 倍液-0.4165gH 50%嘧菌酯1000 倍液0.1521fG 3%中生菌素1200 倍液0.8105hK 50%嘧菌酯1600 倍液0.8452efEF 50%多菌灵1200 倍液0.7986eF 50%嘧菌酯1200 倍液0.5498deF 50%多菌灵600 倍液0.8213cdeEF 50%多菌灵80

24、0 倍液0.8252cdeEF 50%多菌灵1000 倍液0.8123cdeEF 50%多菌灵400 倍液0.8547bcdeEF 3%中生菌素1000 倍液0.8426bcdeEF 3%中生菌素800 倍液0.8245bcdeCDEF 3%中生菌素600 倍液0.8459abcdeBCDEF 55%烯酰福美双1200 倍液0.8947abcdeBCDEF 55%烯酰福美双1600 倍液0.8959abcdeBCDEF 3%中生菌素400 倍液0.8989abcdeABCDEF 55%烯酰福美双1000 倍液0.9018abcdeABCDE 55%烯酰福美双800 倍液0.9125abcdeA

25、BCDE 50%异菌脲2500 倍液0.9431abcdABCD 55%烯酰福美双400 倍液0.9541abcABC 50%异菌脲2000 倍液0.9689abcABC 50%异菌脲1500 倍液0.9657abABC 50%异菌脲1000 倍液0.9798abAB 50%异菌脲500 倍液0.9875aA 2.3 毒力回归方程的计算毒力回归方程的计算 最后对 5 种杀菌剂进行毒力回归方程的计算，对于高粱叶枯 2 号菌株，五种杀 菌剂的 EC50 高低排列为 50%异菌脲可湿性粉剂50%多菌灵可湿性粉剂55%烯 酰福美双水分散粒剂50%嘧菌酯可湿性粉剂3%中生菌素可湿性粉剂，50%异菌 脲最

26、灵敏，因此抑菌效果最好，而 3%中生菌素 EC50 很大，且 r 值是负值，浓度与 抑制率表现负相关，其抑菌效果最差。 表 5 五种杀菌剂对高粱叶枯 2 号菌株的毒力回归方程 药剂r毒力回归方程EC50（mg/L) 50%异菌脲可湿性粉剂0.92y=6.97+0.08x4.98E-26 50%多菌灵可湿性粉剂0.69y=5.68+0.23x1.09E-03 55%烯酰福美双水分散粒剂0.51y=5.65+0.34x1.23E-02 3%中生菌素可湿性粉剂-0.59y=7.30-0.41x4.27E+05 50%嘧菌酯可湿性粉剂0.70y=5.29+0.29x9.88E-02 对于高粱叶枯 4

27、号菌株，50%异菌脲可湿性粉剂的 EC50 为 7.47E-02，表现为 最灵敏，抑菌效果最好，而 50%嘧菌酯可湿性粉剂的 EC50 非常，抑菌效果表现为 最差。 表 6 五种杀菌剂对高粱叶枯 4 号菌株的毒力回归方程 药剂r毒力回归方程EC50（mg/L) 50%异菌脲可湿性粉剂0.96y=5.55+0.49x7.47E-02 50%多菌灵可湿性粉剂0.94y=4.65+0.41x7.21E+00 55%烯酰福美双水分散粒剂0.90y=4.44+0.64x7.60E+00 3%中生菌素可湿性粉剂0.89y=3.76-0.72x5.15E+01 50%嘧菌酯可湿性粉剂-0.62y=10.39

28、-1.82x9.35E+02 3 结论与讨论 本文选用农业生产中用来防治真菌病害常用的 5 种杀菌剂对高粱叶枯病进行室 内的药剂筛选和毒力测定，这 5 种杀菌剂对于链格孢的病害都具有很好的防治作用， 并且具有不同程度的抑制作用，通过选取不同梯度的药剂用于试验，计算菌丝的生 长抑制率和孢子抑制率，最终结合毒力回归方程，结果表明 50%异菌脲可湿性粉剂 对于该病菌的防治效果表现最好，尤其是在 400-100 倍液之间，其防治效果最高。 另外，55%烯酰福美双水分散粒剂和 50%多菌灵对于高粱叶枯病的防治也有一定的 效果；3%中生菌素的防治效果微乎其微；而 50%嘧菌酯在这几个方法中得出的结 果均是

29、对病害的发生有促进作用，因此在大田防治高粱叶枯病害时，尽量不要用此 药剂。 本文最终筛选出的药剂异菌脲属于低毒类内吸性杀菌剂，对于蔬菜水果上的霜 霉病，叶斑病都有很好的防治效果，另外，异菌脲对于玉米交链格孢叶枯病的防治 效果也比较好，与高粱交链格孢叶枯病很相似，张希福教授曾对玉米叶枯病做过相 关的试验，其结果表示退菌特、扑海因、代森锰锌、异菌脲等对病菌分生孢子萌发 有较强的抑制作用【6】 ，因此对于退菌特、扑海因、代森锰锌是否同样适用于高粱 叶枯病还有待于下一步的试验。 虽然此试验结果表明 50%异菌脲是防治高粱叶枯病的最佳药剂，但是此试验属 于室内的药剂筛选，于田间试验相比，由于试验条件和时

30、间的限制，对于外界的自 然因素和环境因素等都没有严格的控制，化学药剂室内抑菌活性和田间防治效果有 较大的相关性【7】， 但田间病害的发生和流行是多种因素综合影响的结果【8】， 因 此，田间试验结果是否与室内试验效果一致，还有待依赖多点重复的田间试验结果 来确定， 本试验结果只是为田间病害防治选药提供参考。 参考文献 1曹玉佩.高粱病虫害的防治技巧J.农药市场信息.2011，15(20)：15-19 2成慧娟.严福忠.马尚耀.王立新.葛占宇.王岩.影响高粱种子出苗率下降的原因及预 防措施J.内蒙古农业科技.2011，16(04)：22-29 3杨冠美.郑永利.吴华新.吴降星.章初龙.林福呈.9

31、种杀菌剂对芸薹生链格孢菌毒力 的测定.浙江农业科学.浙江大学生物技术研究所.2011,23(3)：29-31 4邱星海.古蔺县高粱主要病虫害及防治技术J.四川农业科技.2011，24(08)：11-16 5周德庆.平板划线法分离微生物纯种的一个经验J.辽宁省农业科学院.1981,12(7)： 1-2 6张希福.张定法.高山松.河南省玉米细交链孢菌叶枯病的初步研究.玉米链格孢菌叶 枯病发生及综合防治技术.1996：31-33 7林晓民.胡公洛.侯文邦.周丽鸿.豫西地区小麦雪霉叶枯病的初步研究J.河南科技 大学学报(农学版).1991,08(03)：11-19 8蒋军喜.戴兆基.唐自文.5 种杀菌

32、剂对梨轮纹病的毒力测定和田间药效试验J.江西 农业大学学报.2010.(04):0710-0713 致 谢 本篇论从题目的选择到实验的设计和数据的处理都得到了赵艳琴老师的耐心指 导。悉心的帮我捋请论文思路，对我的论文批改给与了无微不至的关怀，使论文得 以顺利完成。赵艳琴老师严谨的教学作风让我颇感敬意。特此机会，在这里对赵艳 琴老师表示衷心的感谢。 然后，感谢这四年来，给我们代课的安瑞军老师、赵艳琴老师、张宁老师、张 丽娟老师、石凯老师、于秀英老师、董永义老师，是你们细心的传教让我们在求学 的路上受益匪浅，并且帮助我们逐步走向成才之路，感谢我的同学们陪我度过的四 年大学生活，和对论文写作的大力支持。 最后，向将要在论文审阅、评议、答辩过程中给予指导的各位老师表示最衷心 的感谢和美好的祝愿！