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1、植株全氮、磷、钾测定方法一、植物全氮测定（一） H2SO4-H2 O2 消煮法1、适用范围本方法不包括硝态氮的植物全氮测定, 适合于含硝态氮低的植物样品的测定。2、方法提要植物中的氮、 磷大多数以有机态存在 , 钾以离子态存在。 样品经浓 H2SO4 和氧化剂 H2O2 消煮 , 有机物被氧化分解 , 有机氮和磷转化成铵盐和磷酸盐 , 钾也全部释出。消煮液经定容后 , 可用于氮、磷、钾的定量。采用 H2O2 为加速消煮的氧化剂 , 不仅操作手续简单快速 , 对氮、磷、钾的定量没有干扰 , 而且具有能满足一般生产和科研工作所要求的准确度。但要注意遵照操作规程的要求操作, 防止有机氮被氧化成 N2
2、 气或氮的氧化物而损失。3、试剂（1）硫酸 ( 化学纯 , 比重 1.84);（2）30% H2O2( 分析纯 ) 。4、主要仪器设备。消煮炉，定氮蒸馏器。5、操作步骤称取植物样品 (0.5mm)0.3 0.5g( 称准至 0.0002g) 装入 100ml 开氏瓶或消煮管的底部 , 加浓 H2SO45ml, 摇匀 ( 最好放置过夜 ), 在电炉或消煮炉上先小火加热,待 H2SO4发白烟后再升高温度 , 当溶液呈均匀的棕黑色时取下。稍冷后加班 10 滴 H2O2(3) , 再加热至微沸 , 消煮约 7 10min, 稍冷后重复加 H2 O2, , 再消煮。如此重复数次 , 每次添加的 H2O2
3、 应逐次减少 , 消煮至溶液呈无色或清亮后 , 再加热 10min, 除去剩余的 H2O2。取下冷却后 , 用水将消煮液无损地转移入 100ml 容量瓶中 , 冷却至室温后定容 (V1) 。用无磷钾的干滤纸过滤 , 或放置澄清后吸取清液测定氮、磷、钾。每批消煮的同时 , 进行空白试验 , 以校正试剂和方法的误差。6、注释（1）所用的 H2O2 应不含氮和磷。 H2 O2 在保存中可能自动分解 , 加热和光照能促使其分解 , 故应保存于阴凉处。在H2O2 中加入少量 H2SO4 酸化 , 可防止 H2O2 分解。1（2）称样量决定于 NPK含量 , 健状茎叶称 0.5g, 种子 0.3g, 老熟
4、茎叶可称 1g, 若新鲜茎叶样 , 可按干样的 5 倍称样。称样量大时 , 可适当增加浓 H2SO4用量。（3）加 H2 O2 时应直接滴入瓶底液中 , 如滴在瓶劲内壁上 , 将不起氧化作用 ,若遗留下来还会影响磷的显色。（二）水杨酸 - 锌粉还原 - H 2SO4- 加速剂消煮法1、适用范围包括销态氮的植物全氮测定, 适合于硝态氮含量较高的植物样品的测定。2、方法原理样品中的硝态氮在室温下与硫酸介质中的水杨酸作用 , 生成硝基水杨酸 , 再用硫代硫酸钠及锌粉使硝基水杨酸还原为氨基水杨酸 . 然后按 H2SO4- 加速剂消煮法进行消煮法进行消煮样品 , 使样品中全部氮转化为铵盐。3、试剂（1）
5、固体 Na2S2O3;（2）还原锌粉 (AR);（3）水杨酸 - 硫酸 :30g 水杨酸溶于 1L 浓硫酸中。也可以该用含苯酚的浓硫酸 :40g 苯酚溶于 1L 浓硫酸中。4、仪器设备。同上。5、操作步骤称取磨细烘干样品 ( 过 0.25mm筛)0.1000 0.2000g 或新鲜茎叶样品 1.000 2.000g, 置于 100ml 开氏瓶或消煮管中 , 先用水湿润内样品 ( 烘干样 ), 然后加水杨酸 - 硫酸 10ml, 摇匀后室温放置 30min, 加入 Na2S2O3 约 1.5g, 锌粉 0.4g 和水 10ml,放置 10 min, 待还原反应完成后 , 加入混合加速剂 2g,
6、按土壤全氮测定方法进行消煮 , 消煮完毕 , 取下冷却后 , 用水将消煮液无损地转移入 100ml 容量瓶中 , 冷却至室温后定容 (V1) 。用于滤纸过滤 , 或放置澄清后吸取清液测定氮。每批消煮的同时 , 进行空白试验 , 以校正试剂和方法的误差。（三）消煮液中铵的定量 ( 凯氏法 )1、适用范围。适合于各种植物样品消煮液中氮的定量。2、方法原理2植物样品经开氏消煮、定容后, 吸取部分消煮液碱化 , 使铵盐转变成氨 , 经蒸馏 , 用 H3BO3吸收 , 硼酸中吸收的氨可直接用标准酸滴定 , 以甲基红 - 溴甲酚绿混合指示剂指标终点。3、试剂（1）400g/L NaOH溶液。（2）20g/
7、L H 3BO3- 指示剂溶液。（3）酸标准溶液 c(HCL 或 1/2H2SO4)=0.01mol/L。4、仪器设备。蒸馏装置或半自动蒸馏仪。5、蒸馏检查蒸馏装置是否漏气和管道是否洁净后, 吸取定容后的消煮液5.00 10.00mL (V 2, 含 NH4-N 约 1mg), 注入半微量蒸馏器的内室。另取150ml 三角瓶 , 内加 5 ml 2% H 3BO3指示剂溶液 ( 若为包括硝态氮的待测液 , 应加约 6 mL 的 400g/L NaOH溶液 ), 通过蒸气蒸馏 ( 注意开放冷凝水 , 勿使馏出液温度超过 40) 。待馏出液体积约达 50 60ml 时 , 停止蒸馏 , 用少量已调
8、节至 pH4.5 的水冲洗冷凝管末端。用酸标准溶液滴定馏出液至由蓝绿色突变为紫红色( 终点的颜色应和空白测定的滴定终点相同 ) 。与此同时进行空白测定的蒸馏、滴定、以校正试剂和滴定误差。6、结果计算 (N), %= c(V-V 0 ) 0.014 D100/m;式中 :(N) 植物全氮的质量分数,%;c 酸标准溶液的浓度 ,mol/L;V滴定试样所用的酸标准液体积,ml;V0 滴定空白所用的酸标准液, ml;0.014 N 的摩尔质量 ,kg/mol;D分取倍数 ( 即消煮液定容体积V1/ 吸取测定的体积V2) 。二、植物全磷的测定（一） 钒钼黄吸光光度法1、适用范围。适合于含磷量较高的植物样
9、品的测定( 如籽粒样品 ) 。2、方法原理植物样品经浓 H2SO4消煮使各种形态的磷转变成磷酸盐。待测液中的正磷酸与偏钒酸和钼酸能生成黄色的三元杂多酸, 其吸光度与磷浓度成正比, 可在波长3400 490nm处用吸光光度法测定。 磷浓度较高时选用较长的波长, 较低时选用较短波长。此法的优点是操作简便 , 可在室温下显色 , 黄色稳定 , 在 HNO3、 HClO4 和 H2SO4 等介质中都适用 , 对酸度和显色剂浓度的要求也不十分严格 , 干扰物少 , 在可见光范围内灵敏度较低 , 适测范围广 ( 约为 1 20mg/L P), 故广泛应用于含磷较高而且变幅较大的植物和肥料样品中磷的测定。3
10、、试剂（1）钒钼酸铵溶液 :25.0g 钼酸铵 (NH 4) 6Mo7O24H2 O,分析纯 溶于 400mL水中 , 必要时可适当加热 , 但温度不得超过 60。另将 1.25g 偏钒酸铵 (NH4VO3, 分析纯 ) 溶于 300mL沸水中 , 冷却后加入 250mL浓 HNO3( 分析纯 ) 。将钼酸铵溶液缓缓注入钒酸铵 ( 溶液中 , 不断搅匀 , 最后加水稀释至 1L, 贮于棕色瓶中。（2）NaOH溶液 (c=6mol/L):24gNaOH 溶于水 ,稀释至 100ml。（3）二硝基酚指示剂 ( =2g/L):0.2g2,6-二硝基酚或 2,4- 二硝基酚溶于100ml 水中。（4）
11、磷标准溶液 (P)=50mg/L:0.2195g(干燥的 KH2PO4( 分析纯 ) 溶于水 ,加入 5ml 浓 HNO3, 于 1L 容器瓶中定容。4、主要仪器设备。分光光度计。5、分析步骤准确吸取定容 , 过滤或澄清后的消煮液 520ml( V2, 含 P0.05 0.75mg)放入 50ml 容量瓶中 , 加 2 滴二硝基酚指示剂 , 滴加 6mol/LNaOH中和至刚呈黄色 , 加入 10.00ml 钒钼酸铵试剂 , 用水定容 ( V3 ) 。 15min 后, 用 1cm光径的比色槽在波长440nm处进行测定 , 以空白溶液 ( 空白溶液消煮液按上述步骤显色 ), 调节仪器零点。校准
12、曲线或直线回归方程 : 准确吸取 50mg/L P 标准液 0, 1, 2.5, 7.5, 10, 15ml 分别放入 50mL容量瓶中 , 按上述步骤显色 , 即得 0, 1.0, 2.5 , 5.0, 7.5, 10, 15 ml P 的标准系列溶液 , 与待测液一起进行测定 , 读取吸光度 , 然后绘制校准曲线或求直线回归方程。6、结果计算 (P) V3 (V1/V 2) 10-4 (P)=4m式中 : (P)植物磷的质量分数 ,%; (P) 从校准曲线或回归方程求得的显色液中磷的质量浓度 , mg/L; V1消煮液定容体积 , ml;V2吸取测定的消煮液体积 , ml; V3显色液体积
13、 , ml; m称样量 ,g;10-4 将 mg/L 浓度单位换算为百分含量的换算因数。7、注释（1）显色液中 (P)=15 mg/L 时 , 测定波长 420nm;520mg/L 用 490nm。待测液中 Fe3+浓度高应选用 450nm,以清除 Fe3+干扰。校准曲线也应用同样波长测定绘制。（2）一般室温下 , 温度对显色影响不大 , 但室温太低 ( 如15 ) 时 , 需显色30min。稳定时间可达 24h。（3）如试液为 HCl,HClO4 介质 , 显色剂应用 HCl 配制 ; 试液为 H2SO4 介质 ,显色剂也用 H2SO4配制。显色液酸的适宜浓度范围为0.2 1.6 mol/L
14、, 最好是 0.5 1.0 mol/L 。酸度高显色慢且不完全, 甚至不显色 ; 低于 0.2 mol/L 易产生沉淀物 ,干扰测定。钼酸盐在显色液中的终浓度适宜范围为1.6 10-3 10-2 mol/L,钒酸盐为 810-5 2.2 10-3 mol/L 。4、此法干扰离子少。主要干扰离子是铁, 当显色液中 Fe3+浓度超过 0.1%时,它的黄色有干扰 , 可用扣除空白消除。（二）钼锑抗吸光光度法1、适用范围适合于含磷量较低的植物样品的测定( 如茎秆样品等 ) 。2、方法提要植物样品经浓 H2SO4消煮使各种形态的磷转变成磷酸盐。在一定酸度下 , 待测液中的正磷酸与钼酸铵和酒石酸锑钾生成一
15、种三元杂多酸, 后者在室温下能迅速被抗坏血酸还原为蓝色络合物, 可用吸光光度法测定。3、试剂（ 1） 6mol/L NaOH 溶液5（ 2） 0.2%二硝基酚指示剂（ 3） 2mol/L(1/2 H 2 SO4) 硫酸溶液 :5.6mL 浓 H2SO4加水至 100mL。（4）钼锑贮存液 :浓 H2SO4( 分析纯 )126 ml 缓慢地注入约 400 ml 水中 , 搅拌 ,冷却。 10.0g 钼酸铵 ( 分析纯 ) 溶解于约 60的 300ml 水中 , 冷却。然后将 H2SO4 溶液缓缓倒入钼酸铵溶液中 , 再加入 100 ml0.5%酒石酸锑钾 (KSbOC4O6 1/2H2 O, 分
16、析纯 ) 溶液 , 最后用水稀释至 1L, 避光贮存。此贮存液含钼酸铵为 1%,酸浓度为c(1/2 H 2SO4)=4.5 mol/L（5）钼锑抗显色剂 :1.50g 抗坏血酸 (C6 H8O6 , 左旋 , 旋光度 +21+22, 分析纯 ) 溶于 100ml 钼锑贮存液中 , 此液须随配随用 , 有效期一天 , 冰箱中存放 , 可用 3 5 天。（6）磷标准工作液 (P)=5 mg/L: 吸取 100mg/L P 标准贮存液稀释 20 倍,即为 5 mg/L P 标准工作溶液 , 此溶液不宜久存。4、主要仪器设备。同上5、分析步骤吸取定容过滤或澄清后的消煮液2.00 5.00ml(V 2,
17、 含 P530 g) 于 50ml 容量瓶中 ,用水稀释至约 30ml, 加 1 2 滴二硝基酚指示剂 , 滴加 6mol/L NaOH溶液中和至刚呈黄色 , 再加入 1 滴 2mol/L(1/2H2SO4) 溶液 , 使溶液的黄色刚刚褪去 , 然后加入钼锑抗显色剂5.00ml, 摇匀 , 用水定容 (V3) 。在室温高于 15的条件下放置 30min 后 , 用 1cm光径比色槽在波长 700nm处测定吸光度 , 以空白溶液为参比调节仪器零点。校准曲线或直线回归方程 : 准确吸取 (P)= 5mg/L 标准工作溶液 0, 1, 2, 4, 6, 8 ml, 分别放入 50mL容量瓶中 , 加
18、水至 30ml, 同上步骤显色并定容 , 即得 0,按 0.1, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8 mg/L P 标准系列溶液 , 与待测液同时测定 , 读取吸光度 , 然后绘制校准曲线或直线回归方程。6、结果计算 : 同 1。7、注释根据分光光度计性能 , 可选用 650 890nm波长处测定 ,880 890nm处灵敏度高三、植物全钾的测定火焰光度法（一）适用范围。适合于植物样品消煮液中钾含量的测定。6（二）方法提要植物样品经消煮或浸提 , 并经稀释后 , 待测液中的 K 可用火焰光度法测定。（三）试剂K标准溶液 (K)= 100mg/L :0.1907gKCl( 分析纯 ), 在 1
19、05 110干燥 2h)溶于水 , 于 1L 容量瓶中定容 , 存于塑料瓶中。（四）主要仪器设备。火焰光度计。（五）分析步骤吸取定容后的消煮液5.00 10.00ml( V2) 放入 50mL容量瓶中 , 用水定容 ( V1),直接在火焰光度计上测定, 读取检流计读数。校准曲线或直线回归方程准确吸取 100mg/L K 标准溶液 0, 1, 2.5,10, 20ml,分别放入 50mL容量瓶中 , 加水定容的空白消煮液5 或 10ml( 使标准溶液中的离子成分和待测液相近 ), 加水定容。即得 0, 2, 5, 10, 20, 40 mg/L K标准系列溶液。以浓度最高的标准溶液定火焰光度计检流计的满度( 一般只定到 90), 然后从稀到浓依次进行测定 , 记录检流计读数 , 以检流计读数为纵坐标 , 钾浓度为横坐标绘制校准曲线或求直线回归方程。（六）结果计算(K) V3 (V1/V 2) 10-4 (K)=m式中 : (K)植物钾的质量分数 ,%; (K) 从校准曲线或回归方程求得的测读液中 K 的浓度 , mg/L; V1消煮液定容体积 , ml;V2吸取体积 , ml;V3测读液定容体积 , ml;m试样质量 ,g;10-4 将 mg/L 浓度单位换算为百分含量的换算因数。7