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1、科技论文撰写课程考查论文 题 目：地黄研究的新进展学 院： 轻工化工学院 专业班级： 制药工程4班 学 号： 姓 名： 2010年 10 月 14 日地黄研究的新进展覃灵荡 制药工程4班 学号 3107001860摘要：地黄是我国的传统中药，具有特殊的药用成分和多种药理活性。本文就近年来对地黄的最新研究现状作一综述，为进一步开发和利用地黄提供依据。关键词：地黄；药用植物；中药；研究进展Abstract:Rehmanniae is one of traditional Chinese medicine,which contains special ingredients and avariety
2、 of pharmacological activity.Rehmanniae summarized in this paper for further study.The information provided is to serve as a reference for the development and utilization of rehmanniae.Key words: Rehmanniae;madicinal plants;traditional Chinese medicine;study progress地黄(Rehmannia glutinosa Libosch)为玄
3、参科多年生草本植物，以干燥块根入药，是中国著名的“四大怀药”之一，因主产于古“怀庆府”(今河南焦作)一带而被称为 地黄”。现代药理研究证明，地黄具有降血糖、保肝、止血、利尿、抗炎、抗真菌等作用。地黄中的多糖RPSb是地黄有效成分之一，具有免疫与抑制肿瘤活性，并且在机体造血、抗老、降血糖等方面有一定作用。1 提取方法1.1 响应面分析法 原增艳等人为了优化怀地黄多糖的微波提取工艺，采用苯酚一硫酸比色法对怀地黄多糖含量进行测定，通过设定不同单因素研究了微波处理时间、微波功率和液料比对怀地黄多糖提取率的影响，以响应面分析法确定了微波提取怀地黄多糖的最佳工艺。结果显示：微波处理时间、微波功率和液料比对
4、地黄多糖得率具有显著影响，其中在微波处理功率为720W，微波处理时间为210s，料水比为1:6条件下，地黄多糖提取率可达到61.9，并且该工艺有很好的重现性。王明道等人利用响应面分析法考察了酶用量、提取时间、pH值和提取温度4个因素对酶法提取怀地黄梓醇的影响。结果表明，酶法提取怀地黄梓醇的最佳工艺条件为：酶用量0.31 、提取时间147min、pH值4.6、提取温度56 ，梓醇提取率达7.98 ，与模型预测值基本相符。说明酶法可较好地应用于怀地黄梓醇的提取，通过响应面分析法能得到一个较好预测试验结果的模型方程。1.2 正交试验法 刘海洋等人采用L9(3 )正交实验优选出醇提工艺条件，干燥提取物
5、用H103大孔吸附树脂(内径3cm，柱长30cm，树脂层高20cm)充分吸附2h，比例为1:30。流速1ml/min，用水洗脱至色浅，再用1O 乙醇洗脱至色浅，分段收集，每份收集500mL，然后用20乙醇洗脱，以薄层层析法检测，合并含有梓醇的流份，减压浓缩，干燥至恒重，分离得样品，并纯化。结果：梓醇的基线分离良好，进样量在0.72g-3.61xg范围内，峰面积(x)与梓醇含量呈良好的线性关系，回归方程Y=1.5074X-1.851，相关系数r=0.9998，平均加样回收率为99.88 ，RSD=1.84 (n=5)；梓醇提取的最优工艺是l0倍量的80 乙醇提取2次，每次1.5h。结果发现大孔吸
6、附树脂H103能有效地吸附梓醇，并且能将地黄中的水溶性杂质与梓醇分离，洗脱比较集中，是分离纯化梓醇较理想的大孔吸附树脂，转移率为72 。纯化后纯度达到96 以上，可用此种方法来分离纯化地黄中的梓醇。提取溶剂为80 的乙醇，该溶剂无毒、无残留、可回收反复利用，生产成本较低。适合梓醇的大规模生产制备工艺的参考。刘影等人通过对超声提取、室温浸出提取、回流提取3个提取方法的考察得出了回流提取梓醇含量高。在溶剂选择方面分别对水、甲醇、95乙醇3种溶剂进行了考察，在干浸膏重量上95乙醇低于其他两个溶剂，分析可能由于大量的糖类、氨基酸等水溶性杂质不能被乙醇提出来的缘故 J。这样对后期梓醇的纯化带来很大的方便
7、。在此基础上采用了正交实验对不同的乙醇浓度、提取时间、提取次数、提取溶剂倍数。分别选择了3个水平分别进行考察。得出了乙醇浓度对干浸膏和梓醇含量影响较显著。有文献对地黄中梓醇变化的条件进行研究，结果表明，梓醇溶于水中加热100oC10 h后，其含量未见明显变化；但在酸、碱条件下极不稳定。因此实验所确定回流提取工艺对梓醇含量不会有影响，而且较适合工业生产，对梓醇提取的工业化提供了一定的技术参数。1.3 微波辅助法 何江华等以微波处理为辅助手段，应用水浴法浸提怀地黄中梓醇对利用微波技术提取怀地黄梓醇的工艺条件进行了研究，通过单因素和正交试验，考察了影响梓醇提取率的因素，微波辅助法提取梓醇的最佳工艺条
8、件为：甲醇体积比50 ，料液比1g:15ml，在微波功率为400W 条件下处理时间为4min，再在70水浴锅中保温浸提30 rain，梓醇提取率在7.3 以上。进一步按最佳工艺进行了验证试验，与传统的温浸提取法比较，结果表明微波技术用于怀地黄梓醇成分的提取具有省时、高效、节能等优点，适合于工业化生产由于乙醇毒性远小于甲醇，本试验也选用了乙醇进行梓醇的微波辅助提取，但相同浓度的乙醇对梓醇的提取效果远小于相应浓度的甲醇，因此只报告了甲醇的微波辅助提取效果试验通过微波辅助提取怀地黄的梓醇，只是用HPLC方法测定了微波处理溶液中梓醇的溶出效果，对于梓醇的进一步分离提纯尚需继续研究1.4 磁化技术提取法
9、 初兰娜等以经过磁化的自来水作为提取溶剂，参考中药煎煮方法，在煮沸条件下提取地黄中水苏糖的工艺，并建立了地黄水苏糖提取率的二次多项式数学模型。通过实验测定观测值与预测值非常接近，这证明该模型是合理可靠的。得到的优化工艺参数为：磁场强度为0.2878T，磁化时间为74.34 min，提取时间为1.96h，料液比为1:11。在此条件下水苏糖的提取率可达28.20。因此，利用响应曲面分析法进行优化，可获得最优的工艺参数，能有效减少工艺操作的盲目性，技术上可行。采用磁化技术强化地黄水苏糖的提取过程，与采用未经磁化的自来水提取，水苏糖的提取率和含量分别提高了40.02和20.27，说明磁化对于提高水苏糖
10、的提取率及含量极其有效。1.5 酶-超声波提取法 李文波等选用市售地黄为原料，利用纤维索酶解法结合热水浴提取法研究了提取温度、提取时间、提取液pH以及液料比对多糖提取量的影响通过单因素试验得出地黄多糖提取工艺在液料比1:30的条件下的最佳参数为：提取温度4O ，提取时间25min，提取液pH 为6.0，纤维素酶添加量为3.00 在最佳参数组合下，多糖提取率为21.4 ，地黄多糖对OH 的还原率为43.5 ，此方法是简单、快捷和高效的提取方法1.6 水提醇沉法 刘晓茵等地黄烘干恒重后粉碎，天平称取100g。置提取器中，经石油醚(60-90)，回流脱脂2次，每次2h。再用80乙醇回流提取2次，每次
11、2h，除去单糖和低聚糖。将药渣加500mL水90水浴提取2次，提取液浓缩至150mL，加适量活性炭脱色2次，过滤，滤液加5倍量95乙醇，放置过夜，抽滤后的沉淀以100mL水溶解重复醇沉一次。沉淀以95乙醇、无水乙醇、丙酮、乙醚依次洗涤，60cc干燥，即得地黄粗多糖无定型粉末。2 测定方法2.1 比色法 纪耀华等采用精密称取生地黄和熟地黄粗多糖各0.5g，用蒸馏水溶解，稀释至刻度，制成浓度为100um/ml供试品溶液。标准曲线的制备：精密吸取对照品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml分别置10ml具塞试管中，分别加蒸馏水至2.0ml，再各加苯酚试液1.0ml，摇匀，迅速滴加浓硫
12、酸5.0ml，摇匀后放置5min置沸水浴中加热15min，取出冷却至室温；另取蒸馏水2ml，加苯酚和硫酸，同上操作为空白对照。用722型可见分光光度计于490nm处测定吸光度，以对照品浓度(ug/ml)为横坐标，吸光度为纵坐标，计算回归方程，结果表明葡萄糖在11.6116ug/ml范围内，呈良好的线性关系。回归方程为A=0.007083C+0.0092(r=0.009)。精密度试验：精密吸取溶液0.3ml，定容到100ml量瓶中摇匀。分别精密吸取2ml于5个试管中，测定吸光度，RSD=0.65% ，结果表明该法精密度良好。稳定性试验：精密吸取生地黄供试品溶液0.6ml，测定吸光度，每隔30mi
13、n测定1次至150min，RSD=1.32%，结果表明该样品在150min内基本稳定。重复性试验：精密称取上述提取得到的生地黄0.5g，共5份。分别制备5份样品溶液，各精密吸取0.3ml，分别定容到100ml量瓶中，摇匀。分别精密吸取2ml于试管中，测定吸光度，RSD=0.86%，结果表明该方法重复性良好。2.2 紫外分光光度法 刘卫欣等采用乙醇和酸处理样品后，用紫外分光光度法进行测定。发现梓醇在0.0660.143mg/ml范围内有良好的线性关系(r=0.99)，其稳定性、重复性、回收率都较好，从而建立了测定鲜地黄提取物中总环烯醚萜含量的方法，该方法简便、快速、可靠。并用此法测定了总环烯醚萜
14、类成分的含量。2.3 高效液相色谱法 洪毅等通过高效液相色谱法测定地黄提取物水苏糖的含量。色谱条件：色谱柱为SpherisorbNHz柱，流动相为甲醇一水(80:20)，柱温为室温，流速为1.0ml/min。ELSD检测器参数为漂移管温度40 ，载气流速4.0L/min。对照品纯度按归一化法计算，水苏糖对照品纯度为99%以上。线性关系考察：将水苏糖对照品制成质量浓度分别为4.00，8.00，12.00，16.00，20.00mg/ml的溶液，按上述色谱条件分别进样l0uL，记录峰面积，以对照品进样量为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线。回归方程为Y=-447.0966+1205.159X，r=
15、0.99996(n=5)。结果表明水苏糖进样量线性范围是41205ug。精密度试验：精密吸取同一对照品溶液，重复进样5次，每次10ul，记录色谱图。结果峰面积平均值为95 863，RSD=0.62(n=5)。重现性试验：对同一批样品进行多次测定，计算样品溶液水苏糖质量浓度。结果平均质量浓度为71.88mg/ml，RSD=0.65(n=5)。、加样回收试验：精密称取已知含量的地黄水提物粉末，分别加人定量水苏糖对照品溶液，振摇，滤过，滤液加水定容至25ml，即得供试溶液。按上述色谱条件取供试溶液10ul进样测定，计算回收率。3 展望地黄多糖可促进正常小鼠骨髓造血干细胞的增殖，刺激其造血功能。并对放
16、射损伤有一定的保护和促进恢复作用。地黄低聚糖也能增强小鼠的造血干细胞。地黄多糖b有明显的免疫调节活性，能使Lewis肝癌细胞内P53基因的表达明显增加，从而对地黄多糖的抗肿瘤机理从基因水平上找到了依据。鲜地黄汁、鲜地黄及干地黄水煎液均有拮抗阿司匹林诱导的小鼠凝血时间延长，其中鲜地黄汁的作用明显强于干地黄。地黄水提取液有明显降压作用，对寒冷情况下的血压则有稳定作用。从而显示地黄对血压具有双向调节作用。生、熟地黄均能调节甲亢型阴虚大鼠模型的甲状腺功能，并能调节异常的甲状腺激素状态。另外，地黄低聚糖不仅可以调节实验性糖尿病紊乱，亦可调节生理性高血糖状态。地黄水提液还可抑制胃酸分泌和抗溃疡，有镇定作用
17、等。怀地黄在中医药中被认为是治疗糖尿病的“四大圣药”之一，现代药理研究也证明其具有降血糖的作用 。研究表明怀山药多糖与怀地黄多糖同步后对四氧嘧啶导致糖尿病的小鼠具有较好的治疗效果 。由于目前天然产物提取往往采用分步提取而忽略大多天然产物多糖需要进行复配才能起到有效的效果，因此对天然产物进行同步提取可以简化提取步骤，提高多糖含量。4 讨论近年来，世界上掀起了植物药开发的热潮，植物药以其天然低毒的特点倍受青睐，而梓醇类类化合物以其广谱的药理作用引人瞩目。地黄植物分布广泛，怀地黄中含有较为丰富的梓醇，其提取物总梓醇对羟自由基具有很好的清除作用。因此，怀地黄具有广泛开发和利用价值，值得综合利用，应加强
18、资源开发。参考文献：【1】 原增艳，刘红记，刘新育，等.响应面分析法优化怀地黄多糖的微波提取工艺.中国农学通报. 2010，26(9)：60-64.【2】 倪慕云，边宝林地黄化学成分的研究概况J中国中药杂志，1989，14(7)：41-43【3】 郭巧生药用植物栽培学北京：高等教育出版社，2004：257-262【4】黄霞，庆慧，王惠林，等熟地水煎液及其提取物对小鼠外周血象影响的比较研究J中成药，2002，24(2)：l11-l13【4】苗明三，孙艳红，方晓艳熟地黄多糖抗氧化作用J中国中医药信息杂志，2002，9(10)：32-33【5】张汝学，顾国民，张永祥，等地黄低聚糖对实验性糖尿病与高血
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