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1、不同栽培品种阳春砂的化学成分比较研究 本课题得到国家“十一五”科技支撑计划子课题、国家中药材扶持资金项目与广东省高等学校学科建设专项“中药学研究生创新培养基地”项目（项目编号：2006BAI09B01-06；粤经贸工业20071055号；粤教科函20083号）的资助。宁 鑫1,2，吴 睿1,2，何 瑞1,2，杨锦芬1,2，詹若挺1,2，苏 景3，徐 晖1,2，徐鸿华2,4 陈蔚文1,21. 广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心，广东 广州(510006)2. 教育部（省部共建）中药资源科学重点实验室, 广东 广州 (510006)3. 广东省阳春市砂仁试验示范场，广东 阳春(529600)
2、4. 广州中医药大学中药学院，广东 广州(510006)E-mail：ningxin0412摘 要：目的：比较阳春砂的三个栽培品种长果、圆果及春选果实化学成分的差别。方法：分别采用气相色谱法，挥发油含量测定法，水分含量测定法对其乙酸龙脑酯含量、挥发油含量以及水分含量进行测定。结果：阳春砂三个栽培品种长果、圆果、春选挥发油含量无明显差异，但春选较长果、圆果乙酸龙脑酯含量偏低，有显著性差异；三个品种水分含量均小于15%，符合药典要求。结论：不同栽培品种阳春砂的化学成分含量有所不同。关键词：阳春砂；栽培品种；挥发油；乙酸龙脑酯 砂仁是我国著名“四大南药”之一，来源于姜科植物阳春砂Amomum vil
3、losum Lour.、绿壳砂Amomum villosum Lour. var. xanthioides T.L. Wu et Senjen、或海南砂Amomum longiligulare T. L. Wu的干燥成熟果实。其辛、温，归脾、胃、肾经，具化湿开胃、温脾止泻、理气安胎之功效，临床用于湿浊中阻、脘痞不饥、脾胃虚寒、呕吐泄泻、妊娠恶阻、胎动不安等1。广东省阳春市是阳春砂的道地产区。目前，云南、广西、海南、福建等地均有引种栽培。对于阳春砂的栽培品种早期有文献报道，认为可分为：大青苗、变态种、黄苗仔，其中大青苗为正种，后两者为变异种2。近年的文献报道则将阳春砂大致分为长果型和圆果型两个栽
4、培品种，并建议将阳春砂变态种并入长果阳春砂，而将阳春砂黄苗仔并入圆果阳春砂3。阳春砂品种混乱的现状不利于阳春砂的品种选育。因此作者所在课题组对道地产区阳春砂种质资源和栽培情况进行了系统调查，走访了当地农户，当地有农户称长果阳春砂就是大青苗，圆果阳春砂即黄苗仔。除了长果和圆果阳春砂，在阳春市砂仁试验示范场（以下简称砂仁示范场）还有小面积种植的“春选”阳春砂。课题组对上述阳春砂栽培品种进行了果实和花形态的初步比较4。在本实验中，对阳春市不同产区上述三个栽培品种的阳春砂干燥成熟果实采用2005年版中国药典附录方法分别测定了其挥发油、水分含量，并采用气相色谱法测定各品种中乙酸龙脑酯含量，对道地产区阳春
5、砂仁不同品种进行质量对比研究，为其质量评价及优良品种选育提供参考依据。1 材料与仪器1.1 材料 10批道地药材阳春砂果实，分别来源于阳春蟠龙、阳春春湾大垌、阳春永宁庙龙、阳春双窑大陈、阳春春湾、阳春砂仁示范场等地，均为20072008年采收。样品经广州中医药大学徐鸿华教授鉴定为姜科植物阳春砂（Amomum villosum Lour.）的干燥成熟果实。1.2 仪器与试剂 美国Agilent公司HP-6890型气相色谱仪，氢火焰离子化检测器(FID)；XR 205SM-DR型电子分析天平。乙酸龙脑酯对照品（批号：110759-200303），萘对照品（批号：11673-200602），购自中国
6、药品生物制品鉴定所；流动相甲醇为色谱纯，其余试剂为分析纯，水为超纯水。2 实验方法2.1 挥发油含量测定 取阳春砂仁供试品，去壳，将种子团置铜盅捣碎，过2号至3号筛，取约20 g，称定重量，置1000 mL磨口圆底烧瓶中，加蒸馏水300 mL，浸泡1 h，照挥发油含量测定甲法（中国药典2005版一部附录XD）测定并计算供试品中挥发油含量%（mL·100g-1）。每个批次平行测定3次。2.2 水分含量测定 取阳春砂仁供试品，置铜盅捣碎成直径不超过3 mm的颗粒或碎片，取约20 g，称定重量，置500 mL的短颈圆底烧瓶中，加甲苯200 mL，照水分测定第二法（中国药典2005版一部附录
7、IX H）测定并计算供试品含水量%（mL·100g-1）。每个批次平行测定3次。2.3 乙酸龙脑酯含量测定2.3.1 色谱条件 安捷伦HP-5毛细管柱（30 m×0.32 mm，0.25 µm)；进样口温度：250 ；气化室温度：250 ；分流比为501；流动相为N2，流速为1.5 mL·min-1；程序升温，起始温度70 ，保持1 min，以10 ·min-1速度上升至280 ，保持3 min；氢火焰离子化检测器(FID)，温度300 ，H2为30 mL·min-1，空气为400 mL·min-1； 尾吹气为N2，流速为3
8、0 mL·min-1。2.3.2 对照品溶液制备 取乙酸龙脑酯适量，精密称定，置25 mL量瓶中，加无水乙醇制成每1 mL含7.544 mg的溶液，作为对照品溶液。2.3.3 内标溶液的制备精密称定萘适量，置100 mL量瓶中，加无水乙醇制成每1 mL含0.9056 mg的溶液，作为内标溶液。2.3.4 供试品溶液制备 取“2.1”项下提得挥发油加无水硫酸钠0.2 g，振摇，静置过夜。精密吸取脱水后的挥发油10 µL，置1 mL容量瓶中，加无水乙醇定容至刻度，摇匀，精密吸取上述溶液500 µL，置1 mL容量瓶中，加入内标溶液定容至刻度，摇匀，备用。2.3.5 标
9、准曲线的制备精密吸取对照品溶液0.05，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5 mL，分别置于1 mL容量瓶中，精密加入内标溶液0.5 mL，再加无水乙醇定容至刻度，摇匀。分别精密吸取1 µL，按上述色谱条件测定，以对照品与内标物峰面积之比为纵坐标Y，以对照品的进样量为横坐标X绘制标准曲线，计算得回归方程：Y=1.7857X-0.0911，r=0.9996，结果表明乙酸龙脑酯在0.37723.772 µg范围内有良好的线性关系。2.3.6精密度实验取“标准曲线的制备”项下的溶液，按照上述方法测定，连续进样10次，每次进样1 µL，以萘为内标，按乙酸龙脑酯与内标物峰
10、面积之比计算，结果峰面积之比的RSD为0.64%（n=10），表明方法精密度良好。2.3.7 测定方法吸取供试品溶液1 µL，按以上色谱条件测定，记录色谱图，根据标准曲线计算乙酸龙脑酯含量。每个批次平行测定3次。3 实验结果3.1 气相色谱图 按拟定的色谱条件测定，所得色谱图如图1，内标物的保留时间tR=7.9557.958，乙酸龙脑酯的保留时间tR=9.2559.259，表明方法稳定。AABAB图1 气相色谱图上图：内标物（萘）；中图：乙酸龙脑酯对照品和内标物；下图：砂仁供试品A：萘；B：乙酸龙脑酯3.2 不同栽培品种（长果、圆果、春选）阳春砂的挥发油含量、水分含量、乙酸龙脑酯含量
11、测定结果见表1。表1 不同栽培品种阳春砂样品测定结果（n=3）品种来源批次挥发油%mL·100g -1±SD水分%mL·100g -1±SD乙酸龙脑酯g·mL-1±SD长果蟠龙CG0707303.5±0.110.3±0.30.4976±0.0431春湾大垌CG0808292.6±0.19.51±0.160.5135±0.0119 永宁庙龙CG0808153.3±0.110.9±0.30.5826±0.0160 双窑大陈CG0808193.5
12、77;0.111.6±0.30.5839±0.0241 砂仁示范场CG0808282.8±0.112.0± 0.30.5838±0.0069圆果春湾YG080812-23.2±0.111.3±0.30.5742±0.0014 春湾YG0808283.5±0.16.69±0.150.5818±0.0358 春湾YG0808153.9±0.112.5±0.20.5863±0.0153 春选砂仁示范场CX0808283.2±0.111.7±0
13、.30.4198±0.0345 砂仁示范场CX0812174.5±0.113.4±0.10.3653±0.04134 讨论4.1本实验分析了来自阳春市五个不同产区的长果挥发油的含量，从表1来看，其中有两个批次（CG080829、CG080828）挥发油含量低于3%，不符合2005年版中国药典中砂仁项下的规定，这可能受不同生态环境或采收后处理、保存不同的影响。从测定结果看出，三个品种挥发油含量差异不明显。利用SPSS统计学软件分析，结果表明长果、圆果、春选中挥发油含量无显著性差异。另外，所有测试样品水分含量均低于15%，符合2005年版中国药典中砂仁项下规
14、定。4.2 乙酸龙脑酯是砂仁挥发油中主要成分，利用GC-MS峰面积归一化法分析砂仁挥发油中特征成分百分含量，结果表明多数砂仁样品中乙酸龙脑酯占挥发油总量的60%以上（有关数据未发表）。乙酸龙脑酯也是砂仁发挥药理作用的重要有效成分，具有显著的抑制番泻叶所致小鼠腹泻、冰醋酸所致小鼠疼痛及抑制离体家兔小肠平滑肌运动等作用5。为了更好地评价不同栽培品种阳春砂药材的质量，本文对其三个品种中乙酸龙脑酯含量进行了对比研究。从表一结果可以看出，阳春砂春选品种较其他两个品种乙酸龙脑酯含量偏低。对其进行统计分析，结果表明春选品种与长果、圆果相比，乙酸龙脑酯含量有显著性差异；长果与圆果乙酸龙脑酯含量无明显差异。由于
15、测定的春选品种批次较少，因此要进一步确证以上结论，还需要收集更多的阳春砂春选样品进行分析。4.3 本实验在砂仁种子团粉碎过程中，曾比较了两种方法：一种是打粉机打粉，一种是用铜盅捣碎。取阳春蟠龙样品（批次：CG070730）试验，结果用铜盅捣碎的样品挥发油平均含量为3.50%（n=3），而采用打粉的方法粉碎的样品测得挥发油平均含量为3.02%（n=3）。由此推测打粉机打粉过程中产生的机械热会使砂仁挥发油损失，相比之下采用铜盅捣碎的方法可以较大程度减少挥发油的损失。故本实验最终确定用铜盅捣碎的方法来粉碎砂仁样品。参考文献1 中华人民共和国药典.一部M.化学工业出版社.2005.2 赖小平,刘心纯.
16、中药砂仁五个品种的生药鉴定J.广州中医学院学报1989,6(4): 242.3 张丹雁,刘军民,徐鸿华.阳春砂不同栽培品种的比较鉴别J.广州中医药大学学报,2005,22(1) :1.4 杨锦芬,何瑞,詹若挺,等. 道地产区阳春砂不同栽培品种果实、花形态特征的调查与分析研究C. 全国第八届天然药物资源学术研讨会论文集,2008,428.5 李晓光,叶 苗,徐鸿华.砂仁挥发油中乙酸龙脑酯的药理作用研究J.华西药学杂志,2001,16(5) :356.Comparative Study of different cultivated varieties of Amomum villosum Lou
17、r. in chemical compositionsNing Xin1,2, Wu Rui1,2, He Rui1,2, Yang Jinfen1,2, Zhan Ruoting1,2, Su Jing3, Xu Hui1,2, Xu Honghua2,4, Chen Weiwen1,21. Research Center of Chinese Medicinal Resource Science and Engineering, Guangzhou University of Chinese Medicine, Guangdong Guangzhou （510006）2. Key Labo
18、ratory of Chinese Medicine Resources of Ministry of Education, Guangzhou （510006）3. Yangchun Amomum villosum Lour. Breeding Centre, Guangdong Yangchun （529600）4. College of Pharmaceutical Sciences, Guangzhou University of Chinese Medicine, Guangdong Guangzhou （510006）AbstractObjective: To compare th
19、e chemical compositions of the three cultivated varieties of Amomum villosum Lour., namely “changguo”, “yuanguo” and “chunxuan”. Method: GC method, water distillation process and toluene determination of moisture were applied to determine the contents of bornyl acetate, essential oil contents and wa
20、ter, respectively, in dry fruits of Amomum villosum Lour. Result: While the contents of essential oil among the three cultivated varieties showed no difference, the content of bornyl acetate in “chunxuan” was significantly lower than the other two cultivated varieties. The contents of water were all
21、 less than 15%, which matched the regulations of Chinese Pharmacopoeia. Conclusion: The three cultivated varieties of Amomum villosum Lour. varied from each other in the contents of chemical compositions.Key words： Amomurn villosum Lour.; cultivated varieties; essential oil; bornyl acetate作者介绍：宁鑫，女，1984年生，2007级硕士研究生，研究方向：岭南药物的实验研究。