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1、TECIA法在肿瘤组织药敏试验中的应用 作者：尹有群，王晓文，卢义生，赵继红 【摘要】 目的：探讨组织块培养终点染色计算机图像分析法(TECIA法)的情况以及其在临床上的意义。方法：对46例TECIA法试验进行分析总结。结果：2例结肠癌、1例胃癌、1例直肠癌受污染而致实验失败；实验结果抑制率介于30%左右的临床用药效果不可靠，而50%以上的与临床的疗效相符。结论：TECIA法成功率高，达90%以上，胃肠道肿瘤容易受污染，肿瘤抑制率在50%以上的结果在临床上应用均为有效，介于30%左右的宜作为联合用药。 【关键词】 肿瘤药敏；MTT法；TECIA法肿瘤化疗药物毒副作用大，而且同肿瘤不同个体差别大
2、，而临床的化疗方案过于固定，无法针对不同患者进行选择，当临床医生确定患者对所选用的化疗药不敏感时，药物已产生了严重的毒副作用，而且也可能导致错失最佳的治疗机会。因此，了解患者对各种化疗药物的敏感和耐受情况，对指导临床“个体化”治疗有重要意义，而肿瘤药敏试验是实现“个体化”化疗的科学依据。传统的体外肿瘤药敏试验方法是MTT法，采用新鲜实体瘤标本洗净后制成单细胞悬液，调整细胞数然后放入培养板中加药培养，最后计算肿瘤细胞的存活率来预测肿瘤对药物的敏感性1。MTT法采用的是单细胞培养，模拟实体瘤的体内生长环境尚有不足2。现介绍一种用组织块培养代替单细胞培养的方法TECIA法。1 材料与方法11 材料
3、46例恶性肿瘤新鲜标本，其中肺癌4例，结肠癌4例，肝癌5例，乳腺癌17例，子宫颈癌4例，前列腺癌1例，甲状腺癌1例，直肠癌3例，子宫内膜癌2例，食管癌1例，胃癌3例，卵巢癌1例；1640培养液、链霉素、青霉素、二氧化碳培养箱、计算机图像分析仪、无菌操作台或无菌室、无菌手套、培养孔板、封口膜、稀释的各种肿瘤化疗药、培养皿、吸管、滤纸、手术刀片、酒精灯、镊子。12 方法 手术切取肿瘤标本，用生理盐水冲洗2次后放入含有培养基的无菌标本瓶中并尽快送检(切除4 h内)。整个过程严格要求无菌；肿瘤组织先用培养液冲洗2次，放入加有链霉素(100万U加5 ml蒸馏水溶解)和青霉素(80万 U加蒸馏水4 ml溶
4、解)各500 l的培养液中(培养液应变成淡黄色)10 min；培养液冲洗；培养板的各孔中放入拱好的小铁丝网并在上面放滤纸，培养液刚好把滤纸湿润为宜，把肿瘤组织切成1 mm3的小块放在滤纸上，盖上盖子并用封口膜把培养板周边封严，再放进二氧化碳培养箱中培养24 h；取出测定初始面积；根据需要分组加入化疗药，每组6个孔，其中一组不加药作为对照，放入培养箱中作用4 d;在各培养孔中加入25 l MTT染色4 h并测定终点面积;图像分析计算抑制率;打印报告;追查患者的临床用药情况。2 结果2例结肠癌、1例胃癌、1例直肠癌受污染而致实验失败；实验结果为抑制率介于30%左右的临床有效率不可靠，而抑制率在50
5、%以上的临床用药有一定的疗效。3 讨论与传统的MTT法的单细胞培养相比较，TECIA法试验方法更稳定，重复性好，试验周期短(5 d)，所需标本量少，可评价率高(90%以上)，采用组织块培养能更好地模拟肿瘤的体内生长环境，能更准确地测定肿瘤组织对化疗药物的敏感性，从而减少同一化疗模式的盲目性，减少由于患者的个体差异和肿瘤的异质性造成的毒副作用，有效提高治疗效果，合理优化化疗开支，避免不敏感化疗药物的费用支出，最终达到降低医疗费用，减轻国家和患者经济负担，自动化程度高(电脑软件自动统计数据并配有图像分析系统)，结果直观可靠(通过测定用药后存活癌组织面积获得化疗药物的抑制率)，为临床制定合理的化疗方
6、案提供了更科学的依据，使肿瘤的“个体化”治疗真正走向成熟；TECIA法的实验原理是，先把肿瘤组织培养一天后用图像分析仪测量每孔组织块的初始面积(area，A)，加入化疗药后培养4 d再测定终点面积(Blue Area，BA)并根据下面公式计算化疗药物的抑制率(inhibition rate， IR)：IR%=1-(BA处理/A处理)/(BA对照/A对照)×100%。IR30%为不敏感，IR50%为高度敏感，30%IR50%为敏感。因为在测定初始面积和终点面积时存在一定的主观因素，因此应专人操作，尽可能地减少误差，抑制率介于30%左右的结果最容易受影响。经与临床用药比较，实验结果抑制率
7、在30%左右的临床药效不可靠，但某些作为联合化疗用药，效果尚满意；实验的关键是要把细胞养活并不受污染，因此标本宜尽快处理并送检，最好2 h处理并在4 h内送检，标本放置时间过长造成细胞死亡多和容易受污染，影响实验结果；实验必须在绝对无菌的情况下进行，不然受细菌污染造成实验失败，受污染后培养孔里的培养液变混浊，若只是一个培养孔受污染，可以把受污染的孔里的组织和液体弃掉，并用青霉素、链霉素彻底清洗，因为每组化疗药试验均有6个孔，弃掉一个不影响结果，分析仪会自动剔除并进行统计，在组织培养的过程中要每天检查培养的情况；胃肠道标本在取材时应尽量从浆膜面对准肿瘤底部切取标本，避免采取肿物表面组织，并彻底冲
8、洗干净以免受污染；在把标本切成小组织块时，注意切取组织的刀片和小砧板上要先用1640培养液湿润以减少与组织过多摩擦造成细胞的过多死亡；刀不宜来回地拉动，应一刀一刀地切下去，否则细胞在来回拉动中死亡而影响结果。标本切成小组织块时不宜过大也不宜过小，1 mm3为最适宜，过大，里面的细胞得不到足够的营养而死亡；过小，细胞被切割过度而过多死亡。每个培养孔里堆放的组织的体积应尽量均匀，否则会影响结果的准确性；在测定初始面积时操作要快，因为组织面积的测定是利用光源透过组织块而造成的阴影来测定的，若操作时间过长，细胞会因为过热而导致死亡造成结果出现误差；在测定终点面积时就不存在这种情况，因为活的细胞都已染上
9、了颜色；二氧化碳培养箱要保持一定的温度、湿度和二氧化碳浓度，以人体内的环境为基准，培养箱要定期用紫外线消毒。【参考文献】 1 赵国刚，骆云鹏，王崇树，等.MTT比色法在临床抗癌药物感性实验中的应用及进展J.川北医学院报，2001，16(3):108109.2 Hoffman RM. Threedimensional gelsupported nativestate histoculture for evaluation of the tumorspecial pharmacolotical activity: principle， practice and possibilityJ. J Cell Pharmacol .5 / 5文档可自由编辑打印