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1、超声波提取肾蕨总黄酮及辨别黄锁义，罗建华，蒙春越，李容【关键词】超声波提取；，肾蕨；，总黄酮；，辨别摘要：目的为充分利用肾蕨植物资源，幸免资源的浪费，探 讨肾蕨植物总黄酮的提取及辨别方式。方式采纳超声波乙醇浸提法从 肾蕨植物中提取黄酮类物质，对所提取的黄酮类物质进行验证，并用 紫外分光光度法测定含量。结果测得样品中总黄酮的含量为9 mg/ml, 回收率为，其纯度和产率均较高。结论该方式采纳全物理进程，无任 何污染，是提取肾蕨植物黄酮类物质的有效途径。关键词：超声波提取；肾蕨；总黄酮；辨别The Total Flavanone of Nephrolepis cordifolia (L.) Pre
2、sl Extraction and the Identification by Ultrasonic WaveAbstract： Objective To investigate the extraction and distinguishing method of total flavanone of Nephrolepis cordifolia (L. ) Presl. MethodsThe flavonoids were extracted by ethanol as the solvent from Nephrolepis cordifolia (L. ) presl with ult
3、rasonic wave and ethanol flavanone of Nephrolepis cordifolia (L.) Presl was checked and determined by content of the total flavanone of nephrolepis cordifolia (L.) Presl obtained by this method was C= mg/ml and the rate of recovery was %. ConclusionThis text provides the extraction and purifying met
4、hods to get the outcome and the purity of the method is a purely physical process and has no pollution. It is an ideal way to extract the flavanone of Nephrolepis cordifolia (L. ) Presl.Key words： Ultrasonic wave extraction； Nephrolepis cordifolia (L. ) Presl； Total flavanone； Identification蕨类植物是具有椎
5、管制的泡子植物，全世界现有蕨类植物约 12 000种。散布于热带、亚热带为多。喜生擅长温暖阴湿的丛林地带, 我国约有2 600种。其中可供药用的约300余种，药用蕨类植物因其 散布普遍、资源丰硕，历年来为民间所习用。为扩大药源，最近几年 来对其研究慢慢重视起来。药用蕨类植物的化学成份较复杂，其中具 有生物活性的成份要紧有酚类化合物、黄酮类成份、生物碱类、笛体、 三葩类化台物、糅质、氨基酸及脂肪酸等1L肾蕨，又名石黄皮、狗 骆卵、圆羊齿，连年生草本，高3060 emo地生或附生于溪边下、石 缝中或树干上。主产于我国西南及福建、台湾、广东、广西、浙江、 湖南。其药用部位为骨碎补科植物肾蕨(Neph
6、rolepis cordifolia (L.) Presl.)的块茎或全草。性味功效为：甘、涩、凉。清 肺止咳，止血，清热利湿。用全草煎服可治湿热黄疸；地茎加糖浓煎 冲酒服，可医治疝气；配杉树尖、夏枯草、野萝卜菜煎服，可治淋浊、 小便点滴、疼痛难忍2。还具有专门好的抗菌、抗微生物、抗肿瘤 等作用3o最近几年来，超声技术应用于提取植物中的生物碱、甘 类、生物活性物质、动物组织浆的毒质等研究己有报导4, 5,说明 其具有能耗低、效率高、不破坏有效成份的特点。很多研究说明，利 用超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、搅拌作用 等，可加速植物材料中的有效成份进入溶剂，从而增加有效成份的提
7、取率，缩短提取时刻，而且还可幸免高温对提取成份的阻碍5。但 超声技术应用于提取蕨类植物中黄酮类物质的研究尚未见报导，本文 报导用超声波提取肾蕨植物总黄酮及辨别。1仪器与试剂仪器KQ5200DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器）； UV755B紫外可见分光光度计（上海分析仪器总厂）；ZFI型三用紫外分 析仪（上海顾村光电仪器厂）；SHBIII循环水式多用真空泵（郑州长城 科工贸）。试剂95%乙醇AR；亚硝酸钠AR；硝酸铝AR；正丁醇AR;氢 氧化钠AR；三氯化铝AR；盐酸AR；氨水AR；镁粉AR;乙酸镁AR;冰醋 酸AR；乙酸乙酯AR；芦】标准品（中国药品生物制品检定所）;新鲜肾蕨植物采自广西
8、金秀县。2方式与结果总黄酮成份提取取新鲜肾蕨植物，烘干，粉碎。称取肾蕨植 物粉末约6 g,加80 ml 95%乙醇，超声波提取h,抽滤。滤渣再加 80 ml 95 %乙醇，超声波提取h,抽滤，归并两次滤液，减压回收乙 醇至滤液仅剩25 ml为止，放置250 ml容量瓶中，用60%乙醇稀释至 刻度，得样品液。测定方式依据以芦丁为对照品测定肾蕨植物中总黄酮的含 量，加入铝离子试剂，同时操纵适宜pH值，使黄酮化合物与铝盐形成 络合物，在可见光区能取得稳固的特点吸收峰。定量实验总黄酮的含量测定波长的选择取样品液适量，在ml 5%亚硝酸钠溶液存在的碱 性条件下，经硝酸铝显色后，以试剂为空白参比液在420
9、700nni波长 范围测定络合物的吸光度，络合物于510 nm波优势有最大吸收，故测 按时选用此波长。标准曲线的绘制别离周密吸取芦丁对照液(mg/ml), , ml于ml容量瓶中，别离加入5%亚硝酸钠溶液ml, 摇匀，静置6 min；再加10%硝酸铝溶液ml,摇匀，静置6 min；再 加4%氢氧化钠溶液ml,用60%乙醇稀释至刻度，摇匀，静置12 min, 以试剂作空白，于510nm处测吸光度。吸光度测定结果见表1。依照 表1得回归方程：A=1+ 4C, r= 9o提取物含量的测定周密吸取样品液ml,置ml容量瓶，按 标准曲线的制备方式测定吸光度A二，依照回归方程：A=1+ 4C,计 算样品中
10、总黄酮的含量O 9 mg/mlo表1紫外可见分光光度计测定（略）回收实验周密量取样品液ml,加入标准芦丁对照品ml （mg/ml）,同前样品测定的操作方式测定吸光度，求出回收率为%。定性实验-总黄酮的辨别颜色反映紫外光下呈色反映：取该样品溶液点在滤纸上，在 可见光下呈灰黄色，在紫外光下呈灰褐色并有荧光斑点。浓氨水反映: 取该样品溶液点在滤纸上，将滤纸在氨水上方熏min,当即在紫外光 下观看，呈极明显的黄褐色荧光斑点。三氯化铝反映：取样品溶液点 在滤纸上，滴加1 %三氯化铝乙醇溶液，吹干。在可见光下呈灰黄色, 在紫外光下呈黄色荧光斑点。乙酸镁反映：取样品溶液点在滤纸上， 滴加1%乙酸镁甲醇溶液，
11、吹干，紫外光下呈黄色斑点。盐酸镁粉反映: 取乙醇提取液1ml于试管中加镁粉，再加入浓盐酸数滴（1次加入）, 在泡沫处呈紫红色。纸层析取样品溶液10 U 1点在滤纸上。用正丁醇：醋酸： 水=4： 1： 5为展开剂，上行展开5 h,掏出晾干。喷1%氯化铝乙醇溶 液。吹干后于紫外光下，可见荧光斑点。3讨论实验结果说明，本实验方式工艺简单，回收率为,利用本 文所提供的超声波提取、纯化方式而取得的黄酮类物质其纯度较高。 超声波能够强化乙醇浸提法，达到省时、高效、节能的目的，此方式 采纳全物理进程，无任何污染，是一层次想的提取黄酮类物质的途径, 具有广漠的应用前景。黄酮类化合物是一大类天然产物，普遍存在于
12、植物界，是许 多中草药的有效成份。在自然界中最多见的是黄酮和黄酮醇，其它包 括双氢黄（醇）、异黄酮、双黄酮、黄烷醇、查尔酮、橙酮、花色甘及 新黄酮类等6o天然来源的生物黄酮分子量小，能被人体迅速吸收, 能通过血脑屏障，能进入脂肪组织，进而表现出如下功能：排除疲劳、 爱惜血管预防动脉硬化、扩张毛细血管、疏通微循环、抗脂肪氧化、 抗衰老、活化大脑及其它脏器细胞的功能。黄酮类化合物具有抗癌、 抗肿瘤、抗心脑血管疾病、抗炎镇痛、免疫调剂、降血糖、医治骨质 疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗辐射等作用最近几 年来，世界上掀起了植物药开发的热潮，植物药以其天然低毒的特点 倍受青睐，而黄酮类化合物以其广谱
13、的药理作用引人注视。当前，天 然产物有效成份的研究与开发方兴未艾，从中提取分离的有效成份应 用于医药、保健食物、食物添加剂和化妆品等行业，深受消费者青睐, 因此具有广漠的进展前景。木文实验结果说明，肾蕨植物中含有较为 丰硕的黄酮。因此，肾蕨植物具有普遍开发和利用价值，值得综合利 用，增强资源开发。参考文献：1徐冬英.药用蕨类植物的研究进展J.中医药信息, 1997, (4)： 20.2谭树辉,潘超美.中草药野外识别手册(一)M.广州: 广东科技出版社，2004： 30.3赵莉，杨文锌.蕨类植物的活性成份研究进展J. 中药材，2004, 27(6) :452.4刘祥义.超声波提取元宝枫叶总黄酮方
14、式研究J.云南化工,2003, 30 (1)： 27.5谢明杰，宋明，邹翠霞，等.超声波提取大豆异黄酮 JJ .大豆科学,2004, 23(1):75.6夏杏洲，张辉，魏传晚.榕树叶中黄酮类化合物的提 取条件研究J.食物研究与开发，2002, 23(5):35.7华光军,郭勇.黄酮类化合物药理研究进展J.广 东药学，1999, 9 (4)： 9.8黄河胜，马传庚，陈志武.黄酮类化合物药理作用研究 进展J.中国中药杂志，2000, 25 (10)： 499.9王玮，王琳.黄酮类化合物的研究进展J.沈阳 医学院学报，2002, 4 (2)： 115.10曹纬国，刘志勤，邵云，等.黄酮类化合物药理作 用研究进展 用.西北植物学报,2003, 23 (12)： 2241.11姜国芳，谢宗波，乐长高.银杏叶黄酮类化合物的研究进展J.时珍国医国药，2004, 15(5):306.