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1、CRISPR/Cas9既述技术原理：CRISPR/Cas9( Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)是最新出现的 一种由RNA指导Cas核酸酶对靶向基因进行特定DNA修饰的技术，是一个细菌及古细菌进化出来用以抵御病毒和质粒入侵的适应性机制。CRISPR/Ca源统的高效基因编辑功能已被应用于多种生物，包括斑马鱼、小鼠、大鼠、秀丽 隐杆线虫、植物。此系统的工作原理是 crRNA (CRISPR-derived RNA)通过碱基配对与 tracrRNA (trans-activating RNA)结合形成tracrRNA/
2、crRNA复合物，此复合物引导核酸酶Cas9蛋白在与 crRNA配对的序列靶位点处剪切双链DNA,从而实现对基因组 DNA序列进行编辑；而通过人工设计这两种RNA,可以改造形成具有引导作用的gRNA (guide RNA),足以引导 Cas9对DNA的定点切割。作为一种 RNA导向的dsDNA结合蛋白，Cas9效应物核酸酶是已知的第一个统一因子 (unifying factor),它能够共定位 RNA、DNA和蛋白，从而拥有巨大的改造潜力。将蛋白与 无核酸酶的 Cas9(Cas9 nuclease-null融合，并表达适当的 gRNA,即可靶定任何 dsDNA序列， 而RNA可连接到gRNA的末端，不影响 Cas9的结合。因此，Cas9能在任何 dsDNA序列 处带来任何融合蛋白及RNA,这为生物体的研究和改造带来巨大潜力。CRISPR/Cas9引起的双链DMA断裂WWW WWW/修复 非同源性末端接合,利用同源重组，替换或插 入片段基因条件敲除基因敲入点突变点突、条件性敲除)，效率高。接合过程中发生片段插入 或丢失导致基因失活基因破除CRISPR/Cas豉术特点：1)可实现对靶基因多个位点或多个基因同时敲除;2)可对基因进行定点修饰( Tag GFR RFR3)实验周期短，价格低；4)可应用于大、小鼠等，无物种限制。精选范本精选范本