《菌落总数测定方法.doc》由会员分享，可在线阅读，更多相关《菌落总数测定方法.doc（5页珍藏版）》请在三一文库上搜索。
1、食品有限公司作业指导书文件号:KJWI-QA-25版本:A/1日期：2012-05-25页数：Page 1 of 7标题：菌洛总数测定方法文件修改记录版本修订 次数修订日期修订内容002011-02-01A12012-05-25修订分发号：（仅适用于控制文件）（仅盖有红色印章的文件才有效）批准:食品有限公司作业指导书文件号:KJWI-QA-25版本:A/1日期：2012-05-25页数：Page 2 of 7标题：菌洛总数测定方法1.0目的规定菌落总数的测定方法。2.0范围适用于加多宝凉茶、浓缩汁、原辅材料、流程卫生中菌落总数的检测。3.0术语3.1菌落总数食品检样经过处理，在一定条件下（如培
2、养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得 每g（ mL检样中形成的微生物菌落总数。4.0职责质检部：负责按此方法对加多宝凉茶、浓缩汁、原辅材料、流程卫生中菌落总数进行检测。5.0工作流程图见附录A6.0内容及要求6.1设备和材料除微生物实验室常规无菌及培养设备外，其他设备和材料如下：6.1.1恒温培养箱：36C±仁C、55C±C（必要时可选用）6.1.2 冰箱：2C 5C6.1.3 恒温水浴锅：46C± 1C6.1.4天平：感量0.1g6.1.5 pH 计6.1.6 无菌吸管：1ml （具0.01刻度）、5ml （具0.05刻度）、10ml （具0.1刻度）。批准
3、:食品有限公司作业指导书文件号:KJWI-QA-25版本:A/1日期:2012-05-25页数：Page 3 of 7标题：菌洛总数测定方法6.1.7 无菌锥形瓶：容量250ml、500ml6.1.8 无菌试管：18X 200mm6.1.9无菌培养皿：直径 90mm6.1.10放大镜6.2培养基和试剂6.2.1平板计数琼脂培养基。6.2.2 75%乙醇溶液。6.2.3 无菌生理盐水：称取8.5g氯化钠溶于1000ml蒸馏水中121C高压灭菌15min。6.3操作步骤6.3.1样品的稀释6.3.1.1固体和半固体样品：称取25 g样品置盛有225 mL生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min1
4、0000 r/min 均质1 min2 min，或放入盛有225 mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min2 min，制成1:10的样品匀液。6.3.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取25 mL样品置盛有225 mL生理盐水的无菌锥形瓶（瓶 内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成 1:10的样品匀液。6.3.1.3 用1 mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1 mL，沿管壁缓慢注于盛有9 mL稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。6.3.1.4 按 6.3.1.3操作程序，
5、制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1mL无菌吸管或吸头。6.3.1.5 根据对样品污染状况的估计，选择2个3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可 包括原液），在进行10倍递增稀释时，吸取1 mL样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两批准:食品有限公司作业指导书文件号:KJWI-QA-25版本:A/1日期：2012-05-25页数：Page 4 of 7标题：菌洛总数测定方法个平皿。同时，分别吸取1 mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。631.6 及时将15 mL20 mL冷却至46 C的平板计数琼脂培养基（可放置于 46 C± 1 C 恒温水浴箱中保温）倾注平皿
6、，并转动平皿使其混合均匀。6.3.2培养6.3.2.1 待琼脂凝固后将平板翻转，36C± 1 C培养48 h ±2或55°C± 1 C培养48 h ±2。6.322 如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4 mL）,凝固后翻转平板，按6.3.2.1条件进行培养。6.3.3菌落计数可用肉眼观察，必要时用放大镜，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形 成单位（colony-forming units，CFU 表示。6.3.3.1选取菌落数在30 CFU-300 CFU之间、无蔓延菌落
7、生长的平板计数菌落总数。低于30 CFU的平板记录具体菌落数，大于300 CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数 应采用两个平板的平均数。6.3.3.2其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板 作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即 可计算半个平板后乘以2,代表一个平板菌落数。6.3.3.3当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。6.3.4结果与报告6.3.4.1菌落总数的计算方法6.3.4.1.1 若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g （mL样品中菌落总数结果。6.3.4.1.2 若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按公式（ 1）计算：批准: