缓冲溶液的配制.docx

《缓冲溶液的配制.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《缓冲溶液的配制.docx（8页珍藏版）》请在三一文库上搜索。

1、序 号溶液名称配制方法PH值1氯化钾-盐酸13ml 0.2mol/L 盐酸与 25mol 0.2mol/L kcl 混合，加水稀释 至 100ml1.72氨基乙酸-盐酸500ml水中溶解氨基乙酸 150g，加480ml浓盐酸，再加水稀释至 1000ml2.33一氯乙酸-氢氧化钠200ml水中溶解2g 一氯乙酸后，加40g氢氧化钠，溶解完全 后再加水稀释至1000ml2.84邻苯二甲酸氢 钾-盐酸25ml 0.2mol/L的邻苯一甲酸氢钾溶液与6ml0.1mol/L盐酸混合，加水稀释至100ml3.65邻苯二甲酸氢 钾-氢氧化钠25ml 0.2mol/L的邻苯一甲酸氢钾溶液与17.5 ml 0.

2、1mol/L NaOH混合，加水稀释至100 ml4.86六亚甲基四胺- 盐酸200 ml水中溶解六亚甲基四胺 40 g ,加浓HCl 10 ml ,再加水稀释至1 L5.47磷酸二氢钾-氢 氧化钠把25ml 0.2 mol/L的磷酸二氢钾与23.6 ml 0.1 mol/L NaOH混合均匀，加水稀释至100 ml6.88硼酸-氯化钾- 氢氧化钠25.0 ml 0.2 mol/L 的硼酸-氯化钾与4.0 ml 0.1 mol/L NaOH混合均匀，加水稀释至100 ml8.09氯化俊-氨水0.1 mol/L氯化俊与0.1 mol/L 氨水以2: 1比例混合均匀9.110硼酸-氯化钾- 氢氧化

3、钠25.0 ml 0.2 mol/L的硼酸-氯化钾与43.9 ml 0.1 mol/L NaOH混合均匀，加水稀释至100 ml1011氨基乙酸-氯化钠-NaOH49ml 0.1 mol/L酸-氯化钠与 51ml 0.1 mol/L NaOH混合均匀11.612磷酸氢二钠-氢 氧化钠50ml 0.05 mol/L Na2HPO4 与 26.9 ml 0.1 mol/L NaOH 混合均匀，加水稀释至 100 ml1213氯化钾-氢氧化 钠25.0 ml 0.2 mol/L KCl与 66.0 ml 0.2 mol/L NaOH 混合均匀，加水稀释至100 ml13.0一、常用溶液的配制(一)

4、溶液配制注意事项1 .药品要有较好的质量 试剂分为优级纯(保证试剂， Guaranteed reagent , G. R.)、 分析试剂(Antalytical reagent , A. R.)化学纯(Chemical pure , C. P.)和实验试剂(Laboratory reagent , L. R )等等。工业用的化学试剂，杂质较多，只在个别情况下应 用，如配洗液用的硫酸、配干燥剂的氯化钙等。2. 药品称量要精确。3. 配制试剂用水应用新鲜的去离子水或双蒸储水，比电阻值在50万欧姆以上，pH在5.57.0之间才可应用，在组织培养等特殊用途时应注意此项要求，配制一般化验用溶液只要求用双

5、蒸e留水或去离子水。4 .配好后的溶液，应立即除菌处理(如高压灭菌、抽滤或加抑菌物质)，以防杂菌生长。(二) 0.067 (1/15 ) Mol/L 磷酸缓冲液1. 1/15Mol/L 磷酸二氢钾溶液的配制：称取磷酸二氢钾( KH2PO4 A. R. ) 9.08g ,用蒸储 水溶解后，倾入 1 000ml容量瓶内，再稀释至刻度(1 000ml )。2. 1 /15Mol/L磷酸二氢钠溶液的配制：称取无水磷酸氢二钠( Na2HPO4 A.R.) 9.47g (或者Na2HPO4 2H2O 11.87g ）用蒸储水溶解后，放入 1 000ml容量瓶内，再加蒸储水稀释至 刻度（1 000ml ）。

6、3. 按附表的比例，配制成不同pH值的缓冲溶液。附表1磷酸盐缓冲液配制法(单位：毫升)pH 1/15Mol/L Na2HPO4 1/15Mol/L KH2PO4 pH 1/15Mol/L Na2HPO4 1/15Mol/L KH2PO45.8 8.0 92.0 7.1 66.6 23.45.9 9.9 90.1 7.2 72.0 28.06.0 12.2 87.8 7.3 76.8 23.26.1 15.3 84.7 7.3 80.8 19.26.2 18.6 81.4 7.5 84.1 15.96.3 22.4 77.6 7.6 87.0 13.06.4 26.7 73.3 7.7 89.4

7、 10.66.5 31.8 68.2 7.8 91.5 8.56.6 37.5 62.5 7.9 93.2 6.86.7 43.5 56.5 8.8 94.7 5.36.8 49.6 50.4 8.1 95.8 4.26.9 55.4 44.6 8.2 97.0 3.07.0 61.1 38.9 8.4 98.0 2.0(三) 0.15Mol/L PB 液附表2 0.15Mol/LPB 液配制法pH 0.15Mol/L Na2HPO4 (ml) 0.15Mol/L NaH2PO4 (ml)6.4 26.5 73.56.6 37.5 62.56.8 49.0 51.07.0 61.0 39.07

8、.2 72.0 28.07.4 81.0 19.07.6 87.0 13.0溶液含26.7g/L。溶液含53.7g/L。溶液含20.7g/L。溶液含23.4g/L。Na2HPO4 2H2O分子量=175.05 0.15Mol/LNa2HPO4 12H2 O 分子量=358.22 0.15Mol/LNaH2PO4 H2O分子量=138.00 0.15Mol/LNaH2PO4 2H2O分子量=156.03 0.15Mol/L（四）0.2Mol/L PB缓冲液附表3 0.2mol/L PB缓冲液配制法pH 0.2 Mol/L Na2HPO4 ( ml) 0.2Mol/L NaH2PO4 (ml)5.

9、8 8.0 92.06.0 12.3 87.76.2 18.5 81.56.4 26.5 73.56.6 37.5 62.56.8 49.0 51.07.0 61.0 39.07.2 72.0 28.07.4 81.0 19.07.6 87.0 13.07.8 91.5 8.58.0 94.7 5.30.2Mol/L Na2HPO4 - 2 H2O 溶液 35.61g/LNa2HPO4- 12 H2O 溶液含 71.64g/L0.2Mol/LNaH2PO4- H2O溶液含 27.60g/LNaH2PO4 - 2 H2O 溶液含 31.21g/L欲配0.1Mol/L PB缓冲液则在0.2Mol/

10、L PB缓冲液的基础上加H2O稀释1倍即可。欲配制PBS液时，则在溶液中加 0.85 %的NaCl溶液即可。（五）无钙镁离子磷酸缓冲盐水（ PBS（0.15Mol/L PH 7.2）NaCl8.0gKCl0.2gNa2HPO41.15g（如为 Na2HPO4 12H2O 贝U为 2.89g ）KH2PO40.2g将上述试剂依次溶于1 000ml去离子水中，完全溶解后，115C高压灭菌10min15min,存在4C冰箱中备用。此液可用于配制和稀释细胞分散剂以及洗涤细胞培养物。（六）硼酸盐缓冲液（ Borate saline buffer ）1 .硼酸（H 3BO30.2Mol/L 硼酸：硼酸 1

11、2.37g 加水至 1 000ml。2. 硼砂（Na2B4O70.05Mol/L 硼砂：硼砂 19.07g 加水至 1 000ml。附表4 不同pH的0.2Mol/L硼酸缓冲液配制法pH 0.05Mol/L 硼砂（ml） 0.2Mol/L 硼酸（ml） pH 0.05Mol/L 硼砂（ml） 0.2Mol/L 硼酸 （ml）7.4 1.0 9.0 8.2 3.5 6.57.6 1.5 8.5 8.4 4.5 5.57.8 2.0 8.0 8.7 6.0 4.08.0 3.0 7.0 9.0 8.0 2.0（七）巴比妥缓冲液1 . pH8.2离子强度0.05Mol/L巴比妥缓冲液巴比妥钠47.6

12、g蒸储水3 000ml1.17N HCl 55.0ml（1.17 N HCl=193ml 浓 HCl 加 1 807ml 蒸储水）将4.76g巴比妥钠溶于3 000ml蒸储水。 加 1.17 N HCl 55ml 。用HCl调节pH到8.2，并加蒸储水至 4 265ml。2 . pH8.4 0.06Mol/L巴比妥缓冲液巴比妥1.84g巴比妥钠10.30g加蒸储水至1 000.00ml3 . pH8.6 0.06Mol/L巴比妥缓冲液巴比妥1.66g巴比妥钠12.76g加蒸储水1 000.00ml（八）0.2Mol/L醋酸盐缓冲液见表附表5附表5 0.2Mol/L醋酸盐缓冲液配制法pH 0.2

13、Mol/LTris (ml) 0.1Mol/LHCl (ml) pH 0.2Mol/LTris (ml) 0.1Mol/LHCl (ml)23C 37 C 23 C 37 C9.10 8.95 25 5 8.06 7.90 25 27.58.92 8.76 25 7.5 7.96 7.82 25 30.08.75 8.60 25 10.5 7.87 7.73 25 32.58.62 8.48 25 12.5 7.77 7.63 25 35.08.50 8.37 25 15.5 7.66 7.52 25 37.58.40 8.27 25 17.5 7.54 7.40 25 40.08.32 8.

14、18 25 20.0 7.36 7.22 25 42.5(九)三羟甲基甲烷一盐酸缓冲液( Tris HCl缓冲液)不同 pH, 0.05Mol/L25ml0.2Mol/L 三羟甲基氨基甲烷加 x ml0.1NHCl，加水稀释至 100ml (见下表)附表6 Tris HCl缓冲液配制法pH 0.2Mol/LTris(ml) 0.1NHCl(ml) pH 0.2Mol/LTris(ml) 0.1NHCl(ml)23C 37 C 23 C 37 C9.10 8.96 25 5 8.05 7.90 25 27.58.92 8.78 25 7.5 7.96 7.82 25 30.08.74 8.60

15、25 10.0 7.87 7.73 25 32.58.62 8.48 25 12.5 7.77 7.63 25 35.08.50 8.37 25 15.0 7.66 7.52 25 37.58.40 8.27 25 17.5 7.54 7.40 25 40.08.32 8.18 25 20.0 7.36 7.22 25 42.58.23 8.10 25 22.5 7.20 7.05 25 45.08.14 8.00 25 25.0 25三羟甲基氨基甲烷（Tris ）分子量=121.140.2Mol/L 三羟甲基氨基甲烷：Tris24.23g ，加水至1 000ml。0.1NHC1 :取 HCl

16、8.6ml ,加水至 1 000ml。（十）0.5Mol/L pH9.5 碳酸盐缓冲液NaHCO33.70gNa2CO30.60g溶于600.00ml蒸储水中即得。不用时塞紧瓶塞，以免吸收空气中二氧化碳使PH下降。最好小量配制。（一）甘油磷酸缓冲液1 .配制pH8.0磷酸缓冲液0.1Mol/L Na2HPO4 94.50ml0.1N NaH2PO4 5.50ml混合即可2. 9份甘油与1份pH8.0磷酸缓冲液混合，即为甘油磷酸缓冲液。用途：用于免疫荧光试验。（十二）Hank's液1.贮存液NaCl80.00gKCl4.00gNa2HPO4 - 12 H2O 1.52gKH2PO40.6

17、0g葡萄糖4.00g0.4%酚红液50.00ml双储水加至100.00ml115 C高压灭菌15min,冰冻保存。2.工作液贮存液1份双储水9份115 C高压灭菌15min。临用时用灭菌的 5.6 % NaHCO：B调pH值至7.2左右（溶液呈橙红 色）。（十三）荼（钠）氏试剂（ Nessler ' s reagent ）配方1:氯化汞6.0g碘化钾12.4g20% NaOH 30ml加蒸储水至100ml配方2：碘化汞11.5g碘化钾8g蒸储水50ml（完全溶解后）过滤，加20% NaOH 50ml。用途：检测溶液中氨离子。（十四）阿氏（Alsever ' s）液葡萄糖2.05

18、g柠檬酸钠 0.80g氯化钠0.42g蒸储水100ml溶解后，以10%宁檬酸调节pH至6.1，过滤，分装，10磅10min灭菌，4C保存。（十五）青、链霉素混合液（简称S. P.液或双抗液）青霉素（40万U 5 支链霉素（ 200万私g） 1支分别溶于100ml灭菌无离子水中或共同溶于200ml灭菌无离子水中，混合后分装小瓶，置-10 C -20 C冰箱保存备用（1万单位g/ml ）。临用时，按1%勺量加入营养液或其他溶液中，最后浓度是青霉素100U/ml,链霉素100ug/ml 。（十六）洗液（清洁液）配方1:重铭酸钾150g蒸储水300ml浓硫酸3 000ml将重铭酸钾加入蒸储水中，使之自

19、然溶解或水浴溶解，亦可在大土甘蜗中加热溶解，然后慢慢加入浓硫酸，边加边搅拌，见发热过剧则稍停，冷却后再继续加。此为强洗液。盛清洁液的容器要坚固，上加厚玻璃盖，操作时要穿橡皮围裙、长统胶靴、戴上眼镜和厚胶 皮手套，以保安全。洗液一旦变绿，表示铭酸已经还原，失去了氧化能力，不宜再用。如将这样洗液加热，再加 适量重铭酸钾，又可重新使用。配方2:浓硫酸50%蒸储水50%重铭酸钾5%此为中等强度洗液。配方3:重铭酸钾100g蒸储水1 000ml加热溶解，冷却后缓慢加入工业硫酸100ml此液为弱洗液，为棕红色。使用此液时，必须预先用热肥皂水将玻璃器皿洗净，经自来水冲洗，沥干然后才能浸入，否则该洗液很快失效

20、缓冲溶液（英文：buffer solution ）是一种能在加入少量酸或碱和水时大大减低pH变动的 溶液o pH缓冲系统对维持 生物的正常pH值和正常 生理环境起到重要作用.多数细胞仅能 在很窄的pH范围内进行活动，而且需要有缓冲体系来抵抗在代谢过程中出现的pH变化。在生物体中有三种主要的 pH缓冲体系，它们是 蛋白质 缓冲系统、重碳酸盐缓冲 系统以及 磷酸盐 缓冲系统。每种缓冲体系所占的分量在各类细胞和 器官中是不同的。在生化研 究工作中，常常需要使用缓冲溶液来维持实验体系的酸碱度。研究工作的溶液体系 pH值的变化往往直 接影响到研究工作的成效。如 果“提取酶”实验体系 的pH值变动或大幅度

21、变动，酶活性就会下降甚至完全丧失。所以配制缓冲溶液是一个不可或缺的 关键步骤。 常用作缓冲溶液常用作缓 冲溶液的酸类由 弱酸及其共轴酸 盐组合成的溶液具有缓冲作用。生化实验室常用的缓 冲系主要有 磷酸、柠檬酸、碳酸、醋酸、巴比妥酸、Tris （三羟甲基氨 基甲烷）等系统，生化实验或研究工作中要慎重地选择缓冲体系，因为有时影响实验结果的因素并 不是缓冲液的 pH值，而是缓冲液中的某种离子。如硼酸盐、柠檬酸盐、磷酸盐和三羟 甲基甲烷等缓冲剂都可能产生不需要的化学反应。硼酸盐：硼酸盐与许多化合物形成复盐、如蔗糖。柠檬酸盐：柠檬酸盐离子容易与钙结合，所以存在有钙离子的情况下不能使用。磷酸 盐：在有些实

22、验，它是酶的抑止剂或甚至是一个代谢物，重金属易以磷酸盐的形式从溶液中沉淀出来。而且它在pH7.5以上时缓冲能力很小。三羟甲基氨基甲烷：它可以和重金属一起作用，但在有些系统中也起 抑制作用。其主要缺点时 温度效应。这点往往被忽视，在 室温pH是7.8的Tris缓冲液，4C时 是8.4 , 37 C时是7.4，因此，4C配制的缓冲液在37 C进行测量时，其氢离子浓度就增加了 10倍。在pH7.5以下，其缓冲能力极为不理想。 缓冲溶液组成缓冲体系由1、弱酸和它的盐（如 HAc-NaAc ）2、弱碱和它的盐（NH3.H2O-NH4C1 ）3、 多元弱酸的酸式盐及其对应的次级盐（如 NaH2PO4-Na

23、2HPO4 ）的水溶液组成。决定缓冲液pH值的因素设缓冲系 统的弱酸的 电离常数 为K （平衡常数），平衡时弱酸的浓度为酸,弱酸盐的浓度为盐，则由弱酸的电离平衡式可得下式：H+ = Ka 弱酸/共轴碱pH = pKa + log 共轴碱/弱酸这就是 Henderson-Hasselbach 等式。如果弱酸=共轴碱,pH = pKa根据此式 可得出下列几点结论：1缓冲液的pH值与该酸的 电离平衡 常数K及盐和酸的浓度有关。 弱酸的pH值衡 定，但酸和盐 的比例不同时，就会得到不同的pH值。酸和盐 浓度相等时，溶液的 pH值与PK值相同。2酸和盐浓度等比例增减时，溶液的 pH值不便。3酸和盐浓度相

24、等时，缓冲液的缓冲效率为最高，比例相差越大，缓冲效率越低，缓冲液的一般有效缓冲范围为PK土 1pH。缓冲溶液的配制只要知道 缓冲对 的PK值，和要配制的缓冲液的 pH值（及要求的缓冲液总浓度），就能按 公式计算盐和酸的量。这个算法涉及对数换算，较麻烦，前人为减少后人 的计算麻烦， 已为我们总结出 pH值与缓冲液对离子用量的关 系列出了 表格。只要我 们知道要配制 的缓冲液的 pH,经查表便可 计算处所用缓冲剂的比例和用量 。例如配制 500nmpH5.8浓度为0.1M磷酸缓冲液。经查表知 pH5.8浓度为 0.2M Na2HPO48.0 毫升，而 0.2M Na2HPO492.0毫升。依 此可推论 出配制100ml0.1M 的磷酸缓冲液需要0.1M Na2HPO48.0毫升，而0.1M Na2HPO4需要92.0毫升。计算好后，按计算结果准确称好固态化学成分，放于烧杯中，加少量蒸储水溶解，转移入50ml容量瓶，加蒸偏水 至刻度，摇匀，就能得到所需的缓冲液。各种缓冲溶液的配制，均按表格按比例混合，某些试剂，必须标定配成准确浓度才能进行，如醋酸、 氢氧化钠等。另外，所有缓冲溶剂的配制计量都能从以上的算式准确获得。'