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1、全过程样本、试剂及实验环境均需在 20 ±2 C的条件下进行1. 首先制备组织单细胞悬液，制备方法详见组织单细胞悬液制备技术“。2. 取一支15ml离心管，加入与组织单细胞悬液等量的分离液（注：分离液最少不得少于 3ml ）。3. 用吸管小心吸取组织单细胞悬液加于分离液液面上，400-500g ，离心20-30min 。（注:根据组织单细胞悬液量确定离心条件，组织单细胞悬液量越大，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最理想分离效果）。4. 离心后，此时离心管中由上至下分为四层。第一层为稀释液层。第二层为环状乳白色淋 巴细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细
2、胞层。5. 用吸管小心吸取第二层环状乳白色淋巴细胞层到另一15ml离心管中，向离心管中加入10ml清洗液（产品编号：2010X1118 ），混匀细胞。6.250g，离心 10mi n 。7. 弃上清。8. 用吸管以5ml清洗液（产品编号：2010X1118 ）重悬所得细胞。9. 250g ，离心 10mi n。10. 重复7、8、9，弃上清后以0.5ml后续实验所需相应液体重悬细胞。【注意事项】1. 全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2C的条件下进行。为获得最理想的实验结果，最好在取样2h内进行实验，样品存放时间越长，细胞分离效果越差。样品放置超过6h后分离效果更差甚至不能达到
3、分离目的。2. 本实验最好不要使用高聚合材质（如聚苯乙烯）的塑料制品，应使用无静电、低静电离 心管及未经碱处理过后的玻璃制品，因为静电作用将导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面 会变成毛面，影响细胞分离效果。3. 吸取过多的淋巴细胞层及分离液层会导致分离液交界处的粒细胞被吸岀从而使混杂的粒 细胞数量增加。4. 分离液用量大于组织单细胞悬液样本时，分离效果更佳。5. 如实验后细胞得率或活性过低，请联系上海研谨生物以获得技术支持和帮助。【储存条件及有效期】18-25 C保存，有效期2年。本品易感染细菌，需无菌条件操作。无菌条件下操作，启 封后置常温保存。如4 ©呆存，本分离液易岀现白色结晶，影
4、响分离效果。【参考值（参考范围）】本实验淋巴细胞提取率及纯度大于 80%。【相关实验技术方案】1. 组织单细胞悬液制备技术。2. 所获得淋巴细胞的培养技术。3. 所获得淋巴细胞的核酸提取技术。4. 所获得淋巴细胞的鉴定方法A. 流式细胞技术B. 免疫组化技术C. 原位杂交技术D. PCR技术注：上述技术方案详情请登陆上海研谨生物科技公司搜索细胞分离、纯化、扩增、鉴定及生物治疗技术手册“，并在说明书项目栏下下载使用。【可能存在的问题及解决方法】1. 由于血液粘度、细胞密度等差异可能造成的问题及解决方案如下表所示：岀现情况岀现原因建议解决方案离心后目的细胞存在于血浆层或稀释液层转速过小或离心时间过
5、短适当增减转速离心后目的细胞存在于分离液中转速过大或离心时间过长适当增减转速离心后白环层弥散细胞密度过大调整细胞密度离心后白环层太浅或看不见细胞密度过小调整细胞密度2. 本分离液分离细胞的原理为密度梯度离心，其密度与温度、大气压等密切相关。不同地 区客户可根据当地情况对离心条件进行适当调整。建议对离心条件进行调整时，恒定离 心时间，对离心转速进行调整。3. 本分离液依照国际标准，全部使用药用级原料，性能指标与国产同类产品略有不同，可 能岀现红细胞沉降不完全的情况，可以适当加大离心转速。注：在对离心条件进行调整时，离心转速的加减以50-100g为基数，直至达到最理想分离效果,离心力最小不得小于 400g，最大不得大于1200g。离心时间以20-30min 为准