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1、DNA电泳相关试剂及缓冲液的配 制作者:日期:DNA电泳相关试剂及缓冲液的配制1L50 X TAE缓冲液 pH8.52M Tris-HAc100mM EDTApH= 8.51. 称取 Tris 碱242.3g ,置于烧杯中2. 再称取EDTA固体 29.3g 或 NaEDWHO5 X TBE缓冲液TTTtrpH8.3-配-配制PL H卩j4 890mMTris-H 3BO1L1. 称取 Tris 碱 53.88g , EDTA固体 2.93g或NaEDTA 2HO 固体100ml1. 称取1g EB固体于 专用容器中2. 加入 100ml 的ddHO,搅拌数小时-配10mM EDTA50%(V
2、/V)丙EDTA (500mM , pH8.0)加入约 40ml10x上样缓冲液Load ing Buffer配100ml配制 I 1.用移液器吸取2ml1%(W/V溴酚蓝配6x上样缓冲液Load ing Buffer配一配制30mM EDTA36%(V/V)丙100ml1.用移液器吸取 6mlEDTA (500mM ， pH8.0)加入约 50ml ddHO 屮配舶1.称取1g溴酚蓝置于10%(W/V)过硫酸铵1%(W/V溴酚配烧杯中2.加入约80ml的50ml4 10%(W/V) AP1.称取5g过硫酸铵置 于烧杯中30%(W/V)丙烯酰胺储液(DNA用)配制L 29.0%(W/V)Acr
3、1.0%(W/V)-Bis1L1. 称取丙烯酰胺固体 290g置于专用的烧 杯中2. 再称取10g甲叉双 丙烯酰胺配置方法方法1： 1%的溴酚蓝将托盘天平上称取1g溴酚蓝定溶于100ml无水乙醇中，转移入 滴瓶中，贴标签备用。方法2: 0.05%的溴酚蓝配western blot用的2*SDS上样缓冲液需要用到0.1%的溴酚蓝，2-DE中溴酚蓝一般也是配成 0.1%母液。实际上，溴酚蓝在水中 的溶解度不高，直接将 0.1g溴酚蓝溶于100ml水是有困难的。 下面是其较合适的配制方法：0.05%的溴酚蓝配制方法：取溴酚蓝 01g，加0.05mol/L氢氧化 钠溶液3.0ml使溶解，再加水稀释至
4、200ml，即得。变色范围 pH2.84.6 （黄-蓝绿）。只是不知道加入 NaOH 会不会影响2-DE实验。估计影响不大，因为指示剂用量毕竟很少。方法3: 1%溴酚蓝加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完 全溶解。溴酚蓝其钠盐易溶解在水里。相关词条甲醇、乙醇、苯、有机化学、氢氧化钠Western上样缓冲液配制整理 6XSDS样品缓冲液4XTris Cl/SDS,PH6.87ml(0.28mol/L)甘油30%(V/V)3.0ml甘油密度为 1.2613g/cm3(3.8g)(20/4 C)SDS 1% (m/V)1g溴酚蓝1.2mg0.0 012%(m/V)DTT (0
5、.5mol/L)0.93g如果需要，加去离子蒸馏水至10ml;等量分装成0.5ml并于-70 C贮存 8XTris Cl/SDS,PH6.8Tris-base6.05g40ml水中溶解后以1mol/L盐(0.5mol/L)酸调至PH6.8，补加至100ml。HCl调至6.80.45um滤膜过滤，再加0.4gSDSSDS0.4%(m/V)0.4g4C可保存1月丽春红S染色液丽春红S0.2%SDS Loading buffer2X10ml4X10mlTris-HCIPH=6.80.125 M1.25ml(1mol/L)0.25 M2.5ml(1mol/L)SDS4%0.4g或者 (10%SDS4ml)8%0.8g2-ME25%10%DTT30.15 M1.5ml(1mol/L)0.3 M3ml (1mol/L)Glycerol20%2ml30%3mlBromphenol blue.01%0.001g.02%0.002gddHzO1.25ml1.5ml1. Prepared using Tris base, pH adjusted with HCI.2. If 2-ME is used, omit DTT.3. If DTT is used, omit 2-ME.