血小板血型系统.ppt

1、血小板血型系统及检测技术血小板血型系统及检测技术华中科技大学同济医学院附属协和医院华中科技大学同济医学院附属协和医院王晓蓓王晓蓓 教学内容教学内容血小板血型抗原及其抗体血小板血型抗原及其抗体血小板血型检测技术血小板血型检测技术血小板血型的临床应用血小板血型的临床应用适合型血小板输注适合型血小板输注教学目的教学目的重点掌握：血小板输注无效重点掌握：血小板输注无效掌握：血小板血型检测技术掌握：血小板血型检测技术熟悉：血小板血型抗原及其抗体熟悉：血小板血型抗原及其抗体 血小板血型的临床应用血小板血型的临床应用了解：适合型血小板输注了解：适合型血小板输注一、血小板血型抗原一、血小板血型抗原及其抗体及其

2、抗体（一）血小板（一）血小板血型血型抗原抗原定义定义:指用同种免疫抗体检测出指用同种免疫抗体检测出 的血小板表面抗原的血小板表面抗原分类：分类：血小板相关抗原血小板相关抗原 血小板特异性抗原血小板特异性抗原1.血小板相关抗原血小板相关抗原(platelet-associated antigen)定义：定义：血小板表面存在的与其他细胞或血小板表面存在的与其他细胞或 组织共有的抗原组织共有的抗原分类：分类：红细胞血型系统相关抗原红细胞血型系统相关抗原(ABO等）等）组织相容性抗原（组织相容性抗原（HLA）血小板上的红细胞血型抗原血小板上的红细胞血型抗原存在存在ABO、Lewis、I和和P抗原抗原缺

3、失缺失Rh、Duffy、Kell、Kidd和和Lutheran系统的抗原系统的抗原血小板血小板HLA系统血型抗原系统血型抗原Chromosome 6Chromosome 6DPDQDRBCAClass IIClass I存在存在HLA-A和和B位点的抗原位点的抗原HLA-C位点的抗原位点的抗原未发现未发现HLA-DP、DQ和和DR等位点抗原。但经细胞因子刺激，等位点抗原。但经细胞因子刺激，可产生可产生HLA-DR抗原抗原 2.血小板特异性抗原血小板特异性抗原即人类血小板抗原即人类血小板抗原 （human platelet antigen，HPA）血小板特有的，其他组织细胞没有血小板特有的，其他

4、组织细胞没有表现血小板独特的遗传多态性表现血小板独特的遗传多态性均存在于血小板膜糖蛋白（均存在于血小板膜糖蛋白（GP）上）上HPA的命名的命名1990年国际血液学标准化委员会年国际血液学标准化委员会(ICSH)/国国际输血协会（际输血协会（ISBT）血小板血清学研讨会）血小板血清学研讨会对血小板抗原系统进行国际命名对血小板抗原系统进行国际命名2003年国际输血协会（年国际输血协会（ISBT）和国际血栓）和国际血栓和止血协会（和止血协会（ISTH）建立的血小板命名委）建立的血小板命名委员会（员会（PNC）命名规定命名规定在系统前冠以在系统前冠以在系统前冠以在系统前冠以HPAHPA按发现顺序用数字

5、编号按发现顺序用数字编号按发现顺序用数字编号按发现顺序用数字编号只有在只有在只有在只有在2 2个对偶抗原全被检测出来后，才能被称个对偶抗原全被检测出来后，才能被称个对偶抗原全被检测出来后，才能被称个对偶抗原全被检测出来后，才能被称为系统，对偶抗原按其在人群中频率由高到低，为系统，对偶抗原按其在人群中频率由高到低，为系统，对偶抗原按其在人群中频率由高到低，为系统，对偶抗原按其在人群中频率由高到低，用字母命名，高的为用字母命名，高的为用字母命名，高的为用字母命名，高的为a a，低的为，低的为，低的为，低的为b b尚未发现对偶抗原的，给予暂时命名，在等位基尚未发现对偶抗原的，给予暂时命名，在等位基尚

6、未发现对偶抗原的，给予暂时命名，在等位基尚未发现对偶抗原的，给予暂时命名，在等位基因数字后加后缀因数字后加后缀因数字后加后缀因数字后加后缀w w表示表示表示表示（二）血小板抗体（二）血小板抗体产生机理：产生机理：产生机理：产生机理：机体对血小板表面或相关抗原免疫机体对血小板表面或相关抗原免疫机体对血小板表面或相关抗原免疫机体对血小板表面或相关抗原免疫临床分类：临床分类：临床分类：临床分类：血循环里的游离抗体血循环里的游离抗体血循环里的游离抗体血循环里的游离抗体 结合于血小板上的抗体结合于血小板上的抗体结合于血小板上的抗体结合于血小板上的抗体(PAIgG)(PAIgG)血型学分类：血型学分类：血

7、型学分类：血型学分类：血小板同种抗体血小板同种抗体血小板同种抗体血小板同种抗体 自身抗体自身抗体自身抗体自身抗体见于：见于：见于：见于：血小板输注治疗无效血小板输注治疗无效血小板输注治疗无效血小板输注治疗无效 同种免疫血小板减少症同种免疫血小板减少症同种免疫血小板减少症同种免疫血小板减少症 自身免疫血小板减少症自身免疫血小板减少症自身免疫血小板减少症自身免疫血小板减少症 药物、病毒、细菌引起的血小板减少症药物、病毒、细菌引起的血小板减少症药物、病毒、细菌引起的血小板减少症药物、病毒、细菌引起的血小板减少症血小板表面存在众多复杂抗原，因此反复大量输血小板表面存在众多复杂抗原，因此反复大量输血小板

8、表面存在众多复杂抗原，因此反复大量输血小板表面存在众多复杂抗原，因此反复大量输注血小板的患者约注血小板的患者约注血小板的患者约注血小板的患者约50%50%以上产生血小板同种抗体以上产生血小板同种抗体以上产生血小板同种抗体以上产生血小板同种抗体据报道据报道据报道据报道HLAHLA抗体占多数，约抗体占多数，约抗体占多数，约抗体占多数，约80%80%左右左右左右左右HPAHPA抗体单独存在的频率较低（抗体单独存在的频率较低（抗体单独存在的频率较低（抗体单独存在的频率较低（2%-3%2%-3%）HPAHPA抗体与抗体与抗体与抗体与HLAHLA抗体共存（抗体共存（抗体共存（抗体共存（18%18%）左右）

9、左右）左右）左右必须首先识别并去除血清中存在的必须首先识别并去除血清中存在的必须首先识别并去除血清中存在的必须首先识别并去除血清中存在的HLAHLA抗体，才抗体，才抗体，才抗体，才能分析血小板抗体的特异性能分析血小板抗体的特异性能分析血小板抗体的特异性能分析血小板抗体的特异性（二）血小板抗体（二）血小板抗体鉴别有无鉴别有无HLA抗体存在的方法抗体存在的方法 淋巴细胞毒试验淋巴细胞毒试验 混合淋巴细胞培养混合淋巴细胞培养除去血小板表面除去血小板表面HLA抗原方法抗原方法 氯喹或酸溶液在氯喹或酸溶液在0处理血小板处理血小板二、血小板血型检测技术二、血小板血型检测技术血清学检测血清学检测分子生物学检

10、测分子生物学检测 （一）血清学技术（一）血清学技术 血小板免疫荧光试验血小板免疫荧光试验血小板免疫荧光试验血小板免疫荧光试验 简易致敏红细胞血小板血清学试验简易致敏红细胞血小板血清学试验简易致敏红细胞血小板血清学试验简易致敏红细胞血小板血清学试验 单克隆抗体特异的血小板抗原固定试验单克隆抗体特异的血小板抗原固定试验单克隆抗体特异的血小板抗原固定试验单克隆抗体特异的血小板抗原固定试验 改进的抗原捕获酶联免疫吸附试验改进的抗原捕获酶联免疫吸附试验改进的抗原捕获酶联免疫吸附试验改进的抗原捕获酶联免疫吸附试验 流式细胞仪检测技术流式细胞仪检测技术流式细胞仪检测技术流式细胞仪检测技术 微柱凝胶血小板定型

11、试验微柱凝胶血小板定型试验微柱凝胶血小板定型试验微柱凝胶血小板定型试验当当当当HLAHLA类抗原在血小板定型时出现强表达时，类抗原在血小板定型时出现强表达时，类抗原在血小板定型时出现强表达时，类抗原在血小板定型时出现强表达时，要用氯喹或酸进行预处理，去除血小板上的要用氯喹或酸进行预处理，去除血小板上的要用氯喹或酸进行预处理，去除血小板上的要用氯喹或酸进行预处理，去除血小板上的HLAHLA抗原抗原抗原抗原1.血小板免疫荧光试验血小板免疫荧光试验(platelet immunofluorescence test,PIFT)原理原理 用多聚甲醛（用多聚甲醛（PFA）或氯喹预处）或氯喹预处理的血小板，

12、加入异硫氰酸荧光标记理的血小板，加入异硫氰酸荧光标记的抗血小板抗体，通过流式细胞仪或的抗血小板抗体，通过流式细胞仪或荧光显微镜检测血小板抗原抗体结合荧光显微镜检测血小板抗原抗体结合情况情况临床应用临床应用同种异体抗体与血小板的反应同种异体抗体与血小板的反应活性检测活性检测血小板配型血小板配型方法学评价方法学评价 优点优点荧光信号只评估血小板，避免了由细胞碎片引荧光信号只评估血小板，避免了由细胞碎片引荧光信号只评估血小板，避免了由细胞碎片引荧光信号只评估血小板，避免了由细胞碎片引起的非特异性反应起的非特异性反应起的非特异性反应起的非特异性反应多特异性的抗球蛋白试剂可以识别多特异性的抗球蛋白试剂可

13、以识别多特异性的抗球蛋白试剂可以识别多特异性的抗球蛋白试剂可以识别IgGIgG、IgAIgA和和和和IgMIgM抗体抗体抗体抗体最可靠的方法之一最可靠的方法之一最可靠的方法之一最可靠的方法之一 缺点缺点对反应不敏感。血小板至少要结合对反应不敏感。血小板至少要结合对反应不敏感。血小板至少要结合对反应不敏感。血小板至少要结合1 0001 000个个个个IgGIgG分子才能得到阳性结果分子才能得到阳性结果分子才能得到阳性结果分子才能得到阳性结果2.简易致敏红细胞血小板血清学试验简易致敏红细胞血小板血清学试验（Simplified Sensitized Erythrocyte Platelet Ser

14、ology Assay,Simplified Sensitized Erythrocyte Platelet Serology Assay,SSEPASSEPA）原理原理将血小板抗原固定在将血小板抗原固定在将血小板抗原固定在将血小板抗原固定在U U型孔壁上，与被检血清反型孔壁上，与被检血清反型孔壁上，与被检血清反型孔壁上，与被检血清反应后洗净，以抗应后洗净，以抗应后洗净，以抗应后洗净，以抗IgGIgG（或抗（或抗（或抗（或抗IgM)IgM)指示细胞反应结指示细胞反应结指示细胞反应结指示细胞反应结果果果果如果血小板上结合了血小板抗体，则致敏在指如果血小板上结合了血小板抗体，则致敏在指如果血小板上

15、结合了血小板抗体，则致敏在指如果血小板上结合了血小板抗体，则致敏在指示细胞上的抗示细胞上的抗示细胞上的抗示细胞上的抗IgGIgG（抗（抗（抗（抗IgMIgM）与血小板抗体结合，）与血小板抗体结合，）与血小板抗体结合，）与血小板抗体结合，指示细胞向孔底移动被组织，广泛覆盖在固定指示细胞向孔底移动被组织，广泛覆盖在固定指示细胞向孔底移动被组织，广泛覆盖在固定指示细胞向孔底移动被组织，广泛覆盖在固定的血小板单层上，为的血小板单层上，为的血小板单层上，为的血小板单层上，为阳性结果阳性结果阳性结果阳性结果若血小板上无抗体，则指示细胞向孔底移动不若血小板上无抗体，则指示细胞向孔底移动不若血小板上无抗体，则

16、指示细胞向孔底移动不若血小板上无抗体，则指示细胞向孔底移动不受阻，聚集在孔底中央，呈扣状，为受阻，聚集在孔底中央，呈扣状，为受阻，聚集在孔底中央，呈扣状，为受阻，聚集在孔底中央，呈扣状，为阴性结果阴性结果阴性结果阴性结果阳阳阳阳性性性性结结结结果果果果阴阴阴阴性性性性结结结结果果果果结果图示结果图示方法方法直接测定法：测定血小板表面结合的血小直接测定法：测定血小板表面结合的血小板抗体板抗体间接测定法：测定血清内的血小板抗体间接测定法：测定血清内的血小板抗体交叉配血试验：选择配合的血小板供体交叉配血试验：选择配合的血小板供体临床应用临床应用血小板抗体鉴定血小板抗体鉴定血小板血型研究血小板血型研究

17、开展母婴血小板血型及多种血液病的研究开展母婴血小板血型及多种血液病的研究适合性血小板输注适合性血小板输注方法学评价方法学评价简单、微量，重复性、特异性和敏感性均较理想简单、微量，重复性、特异性和敏感性均较理想简单、微量，重复性、特异性和敏感性均较理想简单、微量，重复性、特异性和敏感性均较理想应用范围广，可用于检测血小板抗原抗体以及交应用范围广，可用于检测血小板抗原抗体以及交应用范围广，可用于检测血小板抗原抗体以及交应用范围广，可用于检测血小板抗原抗体以及交叉配合试验；可开展大量样本的检测工作及研究叉配合试验；可开展大量样本的检测工作及研究叉配合试验；可开展大量样本的检测工作及研究叉配合试验；可

18、开展大量样本的检测工作及研究工作工作工作工作固相化的血小板及指示细胞能长期保存备用固相化的血小板及指示细胞能长期保存备用固相化的血小板及指示细胞能长期保存备用固相化的血小板及指示细胞能长期保存备用不需要特殊的仪器设备，易于推广不需要特殊的仪器设备，易于推广不需要特殊的仪器设备，易于推广不需要特殊的仪器设备，易于推广3.单克隆抗体特异的血小板抗原单克隆抗体特异的血小板抗原固定试验固定试验(Monoclonal antibody-specific immobilization of platelet antigens assay,MAIPA)原理原理在血小板上先结合人的同种抗体，然后再结合鼠在血小

19、板上先结合人的同种抗体，然后再结合鼠在血小板上先结合人的同种抗体，然后再结合鼠在血小板上先结合人的同种抗体，然后再结合鼠抗人血小板抗体，裂解血小板后，把裂解产物移抗人血小板抗体，裂解血小板后，把裂解产物移抗人血小板抗体，裂解血小板后，把裂解产物移抗人血小板抗体，裂解血小板后，把裂解产物移至包被的羊抗鼠至包被的羊抗鼠至包被的羊抗鼠至包被的羊抗鼠IgGIgG微孔板内，通过辣根过氧化物微孔板内，通过辣根过氧化物微孔板内，通过辣根过氧化物微孔板内，通过辣根过氧化物酶标记羊抗人酶标记羊抗人酶标记羊抗人酶标记羊抗人IgGIgG检测人的血小板同种抗体检测人的血小板同种抗体检测人的血小板同种抗体检测人的血小板

20、同种抗体单克隆抗体特异的血小板抗原固定试验单克隆抗体特异的血小板抗原固定试验方法学评价方法学评价优点：优点：优点：优点：敏感性强。可检测出被污染的抗体、微量敏感性强。可检测出被污染的抗体、微量敏感性强。可检测出被污染的抗体、微量敏感性强。可检测出被污染的抗体、微量抗原（抗原（抗原（抗原（HPA-5HPA-5）、低频率抗原。）、低频率抗原。）、低频率抗原。）、低频率抗原。缺点：缺点：缺点：缺点：在未知抗原检测时必须使用一组单克隆抗在未知抗原检测时必须使用一组单克隆抗在未知抗原检测时必须使用一组单克隆抗在未知抗原检测时必须使用一组单克隆抗体，而又不能对所有糖蛋白具有活性体，而又不能对所有糖蛋白具有

21、活性体，而又不能对所有糖蛋白具有活性体，而又不能对所有糖蛋白具有活性 如果人抗体与单克隆抗体和同一个抗原决定簇反如果人抗体与单克隆抗体和同一个抗原决定簇反如果人抗体与单克隆抗体和同一个抗原决定簇反如果人抗体与单克隆抗体和同一个抗原决定簇反应，就会引起假阴性结果应，就会引起假阴性结果应，就会引起假阴性结果应，就会引起假阴性结果4.改进的抗原捕获酶联免疫吸附改进的抗原捕获酶联免疫吸附试验试验(Modified antigen capture ELISA,MACE)原理原理血小板与抗体致敏，将形成的抗原血小板与抗体致敏，将形成的抗原血小板与抗体致敏，将形成的抗原血小板与抗体致敏，将形成的抗原-抗体复

22、合抗体复合抗体复合抗体复合物分别加入包被有抗物分别加入包被有抗物分别加入包被有抗物分别加入包被有抗GP IbGP Ib、GP IIbGP IIb、GP IIIaGP IIIa、GP IXGP IX、HLAHLA等鼠抗人单克隆抗体的微孔内，等鼠抗人单克隆抗体的微孔内，等鼠抗人单克隆抗体的微孔内，等鼠抗人单克隆抗体的微孔内，再加入酶标羊抗人再加入酶标羊抗人再加入酶标羊抗人再加入酶标羊抗人IgGIgG底物显色，终止反应后测底物显色，终止反应后测底物显色，终止反应后测底物显色，终止反应后测405nm405nm吸光度吸光度吸光度吸光度方法学评价及应用方法学评价及应用优点：优点：优点：优点：特异性较高特异

23、性较高特异性较高特异性较高缺点：缺点：缺点：缺点：非特异的物质和某些血清中的非特异的物质和某些血清中的非特异的物质和某些血清中的非特异的物质和某些血清中的IgGIgG结合非常结合非常结合非常结合非常牢固牢固牢固牢固应用：应用：应用：应用：对于已经去除了对于已经去除了对于已经去除了对于已经去除了HPA-1aHPA-1a的大量标本的定型常的大量标本的定型常的大量标本的定型常的大量标本的定型常使用竞争性使用竞争性使用竞争性使用竞争性ELISAELISA技术技术技术技术5.流式细胞仪检测技术流式细胞仪检测技术(Flow cytometry,FCM)原理原理免疫荧光标记技术，抗原抗体结合免疫荧光标记技术

24、抗原抗体结合同一激光光源激发得到特异荧光色同一激光光源激发得到特异荧光色细胞体积、结构、荧光种类及性质等多种细胞体积、结构、荧光种类及性质等多种参数分析参数分析FCM检测血小板相关抗体检测血小板相关抗体6.微柱凝胶血小板定型试验微柱凝胶血小板定型试验（microcolume gel test for platelet typing）原理原理向微柱凝胶中依次加入待检血清、血小板、指示向微柱凝胶中依次加入待检血清、血小板、指示向微柱凝胶中依次加入待检血清、血小板、指示向微柱凝胶中依次加入待检血清、血小板、指示红细胞红细胞红细胞红细胞阳性结果：阳性结果：阳性结果：阳性结果：若待检血清中存在血小板抗

25、体，则形若待检血清中存在血小板抗体，则形若待检血清中存在血小板抗体，则形若待检血清中存在血小板抗体，则形成血小板成血小板成血小板成血小板-血小板抗体血小板抗体血小板抗体血小板抗体-抗抗抗抗IgGIgG-指示红细胞四位一指示红细胞四位一指示红细胞四位一指示红细胞四位一体的免疫复合物不能通过凝胶柱体的免疫复合物不能通过凝胶柱体的免疫复合物不能通过凝胶柱体的免疫复合物不能通过凝胶柱阴性结果：阴性结果：阴性结果：阴性结果：若待检血清无血小板抗体，则不能形若待检血清无血小板抗体，则不能形若待检血清无血小板抗体，则不能形若待检血清无血小板抗体，则不能形成免疫复合物，指示红细胞离心后沉于柱底成免疫复合物，指

26、示红细胞离心后沉于柱底成免疫复合物，指示红细胞离心后沉于柱底成免疫复合物，指示红细胞离心后沉于柱底方法学评价方法学评价方法快速、敏感、操作简单方法快速、敏感、操作简单操作标准化（试剂、设备、工作程序）操作标准化（试剂、设备、工作程序）标本试剂用量少标本试剂用量少结果判断客观准确结果判断客观准确结果保存时间长（数天或数周）结果保存时间长（数天或数周）安全：减少医源性传播安全：减少医源性传播（二）分子生物学检测（二）分子生物学检测2222个个个个HPAHPA抗原中除抗原中除抗原中除抗原中除HPA-14bwHPA-14bw基因外，其它所有基因外，其它所有基因外，其它所有基因外，其它所有HPAHPA基

27、因多态性都表现为基因多态性都表现为基因多态性都表现为基因多态性都表现为SNPSNP（单核苷酸多态性）（单核苷酸多态性）（单核苷酸多态性）（单核苷酸多态性），因此，因此，因此，因此检测检测检测检测SNPSNP的方法基本上适用于的方法基本上适用于的方法基本上适用于的方法基本上适用于HPAHPA基因分基因分基因分基因分型型型型 共同特点：共同特点：共同特点：共同特点：以聚合酶链反应（以聚合酶链反应（以聚合酶链反应（以聚合酶链反应（polymerase chain polymerase chain reactionreaction，PCRPCR）为基础，所不同的只是在于）为基础，所不同的只是在于）为基

28、础，所不同的只是在于）为基础，所不同的只是在于PCRPCR引物设计以及检测引物设计以及检测引物设计以及检测引物设计以及检测PCRPCR产物的方法产物的方法产物的方法产物的方法方法方法PCR-SSP:PCR-SSP:首选首选首选首选，最简单常用，快速经济，最简单常用，快速经济，最简单常用，快速经济，最简单常用，快速经济PCR-RFLP:PCR-RFLP:繁琐，无法对繁琐，无法对繁琐，无法对繁琐，无法对HPA-4HPA-4基因分型基因分型基因分型基因分型PCR-ASO:PCR-ASO:繁琐，不太容易判断结果繁琐，不太容易判断结果繁琐，不太容易判断结果繁琐，不太容易判断结果SSCPSSCP：不适合常

29、规不适合常规不适合常规不适合常规HPAHPA检查检查检查检查DNADNA序列分析法序列分析法序列分析法序列分析法:操作复杂，成本较高操作复杂，成本较高操作复杂，成本较高操作复杂，成本较高（三）血清学检测与分子生物学检（三）血清学检测与分子生物学检测的关系测的关系 血清学检测血清学检测简单、快速简单、快速成本低成本低主要用于血小板抗体检测和交叉试验主要用于血小板抗体检测和交叉试验血型抗原的血清学定型是基因分型的前提血型抗原的血清学定型是基因分型的前提三、血清学检测与分子生物学检测三、血清学检测与分子生物学检测的关系的关系 分子生物学检测分子生物学检测结果准确、可靠结果准确、可靠不需要特异性抗体的

30、血小板不需要特异性抗体的血小板基因组基因组DNA的来源：可为尿沉淀物、口腔的来源：可为尿沉淀物、口腔黏膜细胞和羊水细胞黏膜细胞和羊水细胞主要用于血小板血型抗原分型主要用于血小板血型抗原分型三、血小板血型的临床应用三、血小板血型的临床应用 血小板输注无效血小板输注无效 输血后紫癜输血后紫癜 新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜 特发性血小板减少性紫癜特发性血小板减少性紫癜（一）血小板输注无效一）血小板输注无效(platelet transfusion refractoriness,PTR)1.定义定义指患者在输注合适剂量的血小板后没有产生指患者在输注合适剂量的血小板后

31、没有产生“适当的反应适当的反应”，即，即连续两次连续两次输注足量随机供输注足量随机供者血小板后，没有达到合适的校正血小板计者血小板后，没有达到合适的校正血小板计数增加值（数增加值（CCI），临床出血表现亦未见改），临床出血表现亦未见改善善长期依靠血小板支持治疗长期依靠血小板支持治疗这是临床输血中颇为棘手的问题这是临床输血中颇为棘手的问题2.原因原因免疫因素（免疫因素（免疫因素（免疫因素（17.5%17.5%）：HLAHLA抗体、抗体、抗体、抗体、HPAHPA抗体、抗体、抗体、抗体、ABOABO抗体、自身抗体、药物抗体、循环免疫复抗体、自身抗体、药物抗体、循环免疫复抗体、自身抗体、药物抗体、循环

32、免疫复抗体、自身抗体、药物抗体、循环免疫复合物等合物等合物等合物等非免疫因素（非免疫因素（非免疫因素（非免疫因素（67.5%67.5%）：发热、败血症、脾肿：发热、败血症、脾肿：发热、败血症、脾肿：发热、败血症、脾肿大、骨髓移植、大、骨髓移植、大、骨髓移植、大、骨髓移植、DICDIC、静注抗菌素等；血小板、静注抗菌素等；血小板、静注抗菌素等；血小板、静注抗菌素等；血小板质量质量质量质量非免疫非免疫非免疫非免疫+免疫因素（免疫因素（免疫因素（免疫因素（15%15%）3.判定指标判定指标临床临床临床临床:出血趋势不减轻，或出现输血性紫癜，出血加重出血趋势不减轻，或出现输血性紫癜，出血加重出血趋势不

33、减轻，或出现输血性紫癜，出血加重出血趋势不减轻，或出现输血性紫癜，出血加重 血小板计数较输注前不仅不增高，有时还会下降血小板计数较输注前不仅不增高，有时还会下降血小板计数较输注前不仅不增高，有时还会下降血小板计数较输注前不仅不增高，有时还会下降校正血小板计数增加值校正血小板计数增加值校正血小板计数增加值校正血小板计数增加值 (corrected count increment,CCI)(corrected count increment,CCI)CCI=CCI=(输注后血小板计数输注后血小板计数输注后血小板计数输注后血小板计数-输注前血小板计数输注前血小板计数输注前血小板计数输注前血小板计数)

34、体表面积体表面积体表面积体表面积(m(m2 2)输入血小板总数（输入血小板总数（输入血小板总数（输入血小板总数（10101111L L）PTR PTR判定标准判定标准判定标准判定标准:1:1 小时小时小时小时 CCICCI 7.5 7.5 10 109 9L L 20-24 20-24小时小时小时小时 CCICCI 4.5 4.5 1 10 09 9L L血小板回收率血小板回收率血小板回收率血小板回收率 (percentage platelet recovery,PPR)(percentage platelet recovery,PPR)PPR=PPR=(输注后血小板数输注前血小板数输注后血小

35、板数输注前血小板数输注后血小板数输注前血小板数输注后血小板数输注前血小板数)血容量血容量血容量血容量(L)(L)输入血小板总数输入血小板总数输入血小板总数输入血小板总数2/32/3 PTR PTR判定标准：判定标准：判定标准：判定标准：1 1小时小时小时小时 PPRPPR30%30%20-24 20-24小时小时小时小时PPR PPR 20%20%4.预防措施预防措施 选用单一供者血小板（机釆血小板）选用单一供者血小板（机釆血小板）自身血小板输注自身血小板输注 去除血小板中白细胞：去除血小板中白细胞：WBC 5 106/L 去除血小板表面抗原：用氯喹或枸橼酸解去除血小板表面抗原：用氯喹或枸橼酸

36、解离技术去除离技术去除HLA抗原抗原 紫外线照射灭活抗原提呈细胞（紫外线照射灭活抗原提呈细胞（antigen presenting cell,APC）功能）功能5.处理流程处理流程 首先要考虑血小板质量问题首先要考虑血小板质量问题首先要考虑血小板质量问题首先要考虑血小板质量问题，可输注，可输注，可输注，可输注ABO ABO 同型的非库存血同型的非库存血同型的非库存血同型的非库存血小板，以排除小板，以排除小板，以排除小板，以排除ABOABO系统的抗体或血小板质量因素系统的抗体或血小板质量因素系统的抗体或血小板质量因素系统的抗体或血小板质量因素 若有发热、感染、若有发热、感染、若有发热、感染、若有

37、发热、感染、DIC DIC 等导致血小板消耗增加的因素存在，等导致血小板消耗增加的因素存在，等导致血小板消耗增加的因素存在，等导致血小板消耗增加的因素存在，积极治疗原发病积极治疗原发病积极治疗原发病积极治疗原发病，并增加输注剂量，并增加输注剂量，并增加输注剂量，并增加输注剂量 若有若有若有若有同种抗体存在同种抗体存在同种抗体存在同种抗体存在，则挑选，则挑选，则挑选，则挑选HLAHLA、HPA HPA 相合的供者血小板，相合的供者血小板，相合的供者血小板，相合的供者血小板，或使用激素、免疫抑制剂或静脉注射免疫球蛋白或使用激素、免疫抑制剂或静脉注射免疫球蛋白或使用激素、免疫抑制剂或静脉注射免疫球蛋

38、白或使用激素、免疫抑制剂或静脉注射免疫球蛋白 若病人持续输注血小板效果不佳而又找不到明确的原因，则若病人持续输注血小板效果不佳而又找不到明确的原因，则若病人持续输注血小板效果不佳而又找不到明确的原因，则若病人持续输注血小板效果不佳而又找不到明确的原因，则应应应应考虑药物性抗体的存在考虑药物性抗体的存在考虑药物性抗体的存在考虑药物性抗体的存在，停用或换用相关药物，停用或换用相关药物，停用或换用相关药物，停用或换用相关药物6.处理处理 供者选择：供者选择：ABO和和Rh相合相合 HLA相合相合 HPA相合相合大量静脉注射免疫球蛋白（大量静脉注射免疫球蛋白（IVIG）血浆置换血浆置换免疫抑制剂免疫抑

39、制剂抗纤溶药物等抗纤溶药物等病病病病 因因因因 处处 理理理理免疫性免疫性免疫性免疫性因素因素因素因素 HLA HLA 同种抗体同种抗体同种抗体同种抗体 输输注注注注HLAHLA抗原配合的血小板或交叉配合抗原配合的血小板或交叉配合抗原配合的血小板或交叉配合抗原配合的血小板或交叉配合试验试验相合的相合的相合的相合的血小板血小板血小板血小板血小板特异性抗体血小板特异性抗体血小板特异性抗体血小板特异性抗体 输输注血小板特异性抗原（注血小板特异性抗原（注血小板特异性抗原（注血小板特异性抗原（HPAHPA）配合的血小板或交）配合的血小板或交）配合的血小板或交）配合的血小板或交叉配合叉配合叉配合叉配合试验

40、试验相合的血小板相合的血小板相合的血小板相合的血小板自身抗体自身抗体自身抗体自身抗体 IVIGIVIG、皮、皮、皮、皮质类质类固醇、脾切除固醇、脾切除固醇、脾切除固醇、脾切除术术药药物（如肝素）物（如肝素）物（如肝素）物（如肝素）停用停用停用停用诱发药诱发药物物物物 非免疫性非免疫性非免疫性非免疫性因素因素因素因素脾脾脾脾肿肿大大大大 治治治治疗疗病因病因病因病因 药药物（如两性霉素物（如两性霉素物（如两性霉素物（如两性霉素B B）若可能若可能若可能若可能时时，停用，停用，停用，停用诱发药诱发药物物物物 消耗增加消耗增加消耗增加消耗增加 治治治治疗疗病因病因病因病因 败败血症血症血症血症 治治

41、治治疗疗病因病因病因病因 PTR的病因及处理的病因及处理（二）输血后紫癜（二）输血后紫癜(post-transfusion purpura,PTP)1.定义及临床表现定义及临床表现 定义定义指输注全血或血小板后引起的急性、暂时性的同指输注全血或血小板后引起的急性、暂时性的同指输注全血或血小板后引起的急性、暂时性的同指输注全血或血小板后引起的急性、暂时性的同种免疫性血小板减少综合征种免疫性血小板减少综合征种免疫性血小板减少综合征种免疫性血小板减少综合征 临床表现临床表现在输血后在输血后在输血后在输血后1 1周左右突然发生周左右突然发生周左右突然发生周左右突然发生皮肤瘀点、瘀斑和黏膜出血，严重者有

42、内脏和颅皮肤瘀点、瘀斑和黏膜出血，严重者有内脏和颅皮肤瘀点、瘀斑和黏膜出血，严重者有内脏和颅皮肤瘀点、瘀斑和黏膜出血，严重者有内脏和颅内出血内出血内出血内出血大多数的患者是女性，有输血或妊娠史大多数的患者是女性，有输血或妊娠史大多数的患者是女性，有输血或妊娠史大多数的患者是女性，有输血或妊娠史2.病因病因出现血小板特异性同种抗体出现血小板特异性同种抗体常见的是抗常见的是抗HPA-1a通常发生于通常发生于HPA-1a阴性患者，欧美多见阴性患者，欧美多见3.预防和治疗措施预防和治疗措施血小板抗体筛选血小板抗体筛选血小板交叉配血试验，选择配合型的血小血小板交叉配血试验，选择配合型的血小板供体输注板供

43、体输注免疫抑制剂免疫抑制剂血浆置换血浆置换大量静脉注射免疫球蛋白大量静脉注射免疫球蛋白（三）新生儿同种免疫性血小（三）新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜板减少性紫癜(neonatal(neonatal alloimmune thrombocytopenic purpura,NAITP)alloimmune thrombocytopenic purpura,NAITP)1.定义定义妊娠期间由于母婴间血小板血型不合，胎儿妊娠期间由于母婴间血小板血型不合，胎儿血小板抗原刺激母体产生血小板相关抗体，血小板抗原刺激母体产生血小板相关抗体，通过胎盘进入胎儿体内，导致胎儿和新生儿通过胎盘进入胎儿体内，导致胎儿

44、和新生儿血小板减少血小板减少常见，病死率较高，约常见，病死率较高，约13%内脏和中枢神经系统出血内脏和中枢神经系统出血内脏和中枢神经系统出血内脏和中枢神经系统出血 脑水肿脑水肿脑水肿脑水肿 出生时有严重而广泛的瘀点和瘀斑出生时有严重而广泛的瘀点和瘀斑出生时有严重而广泛的瘀点和瘀斑出生时有严重而广泛的瘀点和瘀斑 出生时正常，出生时正常，出生时正常，出生时正常，2-32-3天后出现血小板显著减少天后出现血小板显著减少天后出现血小板显著减少天后出现血小板显著减少2.临床症状临床症状3.实验室检查实验室检查血小板抗原的鉴定血小板抗原的鉴定血小板抗原的鉴定血小板抗原的鉴定血小板抗体的检查血小板抗体的检查

45、血小板抗体的检查血小板抗体的检查指指指指 标标HDNHDNNAITPNAITP母母母母细细胞表面缺乏常胞表面缺乏常胞表面缺乏常胞表面缺乏常见见抗原抗原抗原抗原红细红细胞抗原胞抗原胞抗原胞抗原鉴鉴定定定定血小板抗原血小板抗原血小板抗原血小板抗原鉴鉴定定定定抗体特异性抗体特异性抗体特异性抗体特异性红细红细胞抗体胞抗体胞抗体胞抗体筛选筛选血小板抗体血小板抗体血小板抗体血小板抗体筛选筛选婴婴儿血儿血儿血儿血细细胞包被有胞包被有胞包被有胞包被有IgGIgG直接抗人球蛋白直接抗人球蛋白直接抗人球蛋白直接抗人球蛋白试验试验血小板相关血小板相关血小板相关血小板相关IgIg检测检测低低低低频频率抗原抗体率抗原抗

46、体率抗原抗体率抗原抗体母血清母血清母血清母血清+父父父父红细红细胞胞胞胞母血清母血清母血清母血清+父血小板父血小板父血小板父血小板 治疗治疗患者输入母体中同种抗体无不良反应性的血小板患者输入母体中同种抗体无不良反应性的血小板患者输入母体中同种抗体无不良反应性的血小板患者输入母体中同种抗体无不良反应性的血小板对患者进行换血治疗对患者进行换血治疗对患者进行换血治疗对患者进行换血治疗给新生儿静脉内注射免疫球蛋白给新生儿静脉内注射免疫球蛋白给新生儿静脉内注射免疫球蛋白给新生儿静脉内注射免疫球蛋白 预防预防随时监测母亲血清中血小板抗体随时监测母亲血清中血小板抗体随时监测母亲血清中血小板抗体随时监测母亲血

47、清中血小板抗体效价高时可对母亲作血浆置换治疗，降低母亲血效价高时可对母亲作血浆置换治疗，降低母亲血效价高时可对母亲作血浆置换治疗，降低母亲血效价高时可对母亲作血浆置换治疗，降低母亲血浆中抗体的含量浆中抗体的含量浆中抗体的含量浆中抗体的含量4.治疗及预防治疗及预防（四）特发性血小板减少性紫癜（四）特发性血小板减少性紫癜(idiopathic thrombocytopenic purpura,ITP)1.定义及临床表现定义及临床表现定义：定义：由于患者自身免疫系统失衡，体内由于患者自身免疫系统失衡，体内产生针对自身血小板相关抗原的抗体，导产生针对自身血小板相关抗原的抗体，导致血小板大量破坏，引起免

48、疫性血小板减致血小板大量破坏，引起免疫性血小板减少少临床表现：临床表现：出血症状，多为慢性，隐匿性出血症状，多为慢性，隐匿性 女性常见女性常见血小板相关免疫球蛋白（血小板相关免疫球蛋白（血小板相关免疫球蛋白（血小板相关免疫球蛋白（PAIgGPAIgG）：与血小板上）：与血小板上）：与血小板上）：与血小板上的相关抗原结合，的相关抗原结合，的相关抗原结合，的相关抗原结合，PAIgGPAIgG升高的水平与血小板减升高的水平与血小板减升高的水平与血小板减升高的水平与血小板减少的程度有关少的程度有关少的程度有关少的程度有关 血小板自身抗体可与自身和同种血小板结合，破血小板自身抗体可与自身和同种血小板结合

49、破血小板自身抗体可与自身和同种血小板结合，破血小板自身抗体可与自身和同种血小板结合，破坏血小板坏血小板坏血小板坏血小板血小板自身抗体与巨核细胞结合，影响血小板的血小板自身抗体与巨核细胞结合，影响血小板的血小板自身抗体与巨核细胞结合，影响血小板的血小板自身抗体与巨核细胞结合，影响血小板的 生成生成生成生成2.发病机制发病机制3.治疗治疗血小板输注不仅没有疗效，还有可能因血小板表血小板输注不仅没有疗效，还有可能因血小板表血小板输注不仅没有疗效，还有可能因血小板表血小板输注不仅没有疗效，还有可能因血小板表面各类血小板抗原的同种免疫作用，导致输血后面各类血小板抗原的同种免疫作用，导致输血后面各类血小

50、板抗原的同种免疫作用，导致输血后面各类血小板抗原的同种免疫作用，导致输血后紫癜等输血反应紫癜等输血反应紫癜等输血反应紫癜等输血反应应用皮质激素等免疫抑制剂应用皮质激素等免疫抑制剂应用皮质激素等免疫抑制剂应用皮质激素等免疫抑制剂脾切除术脾切除术脾切除术脾切除术大量血浆置换大量血浆置换大量血浆置换大量血浆置换大剂量静脉注射免疫球蛋白大剂量静脉注射免疫球蛋白大剂量静脉注射免疫球蛋白大剂量静脉注射免疫球蛋白长春生物碱类药物偶联单采血小板，给难治型长春生物碱类药物偶联单采血小板，给难治型长春生物碱类药物偶联单采血小板，给难治型长春生物碱类药物偶联单采血小板，给难治型ITPITP患者输注，获得较好疗效患者