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1、如何建立气相色谱分析方法气相色谱分析方法的建立步骤在实际工作中，当我们拿到一个样品，我们该怎样定性和定量，建立一套 完整的分析方法是关键，下面介绍一些常规的步骤：1、样品的来源和预处理方法GC能直接分析的样品通常是气体或液体，固体样品在分析前应当溶解在适 当的溶剂中，而且还要保证样品中不含 GC不能分析的组分（如无机盐），可能 会损坏色谱柱的组分。这样，我们在接到一个未知样品时，就必须了解的来源， 从而估计样品可能含有的组分，以及样品的沸点范围。如果样品体系简单，试 样组分可汽化则可直接分析。如果样品中有不能用GC直接分析的组分，或样品 浓度太低，就必须进行必要的预处理，如采用吸附、解析、萃取
2、、浓缩、稀释、 提纯、衍生化等方法处理样品。2、确定仪器配置所谓仪器配置就是用于分析样品的方法采用什么进样装置、什么载气、什 么色谱柱以及什么检测器。一般应首先确定检测器类型。碳氢化合物常选择 FID检测器，含电负性基 团（F、Cl等）较多且碳氢含量较少的物质易选择 ECD检测器；对检测灵敏度 要求不高，或含有非碳氢化合物组分时，可选择 TCD检测器；对于含硫、磷的 样品可选择FPD检测器。对于液体样品可选择隔膜垫进样方式，气体样品可采用六通阀或吸附热解 析进样方法，一般色谱仅配置隔膜垫进样方式，所以气体样品可采用吸附-溶剂解析-隔膜垫进样的方式进行分析。根据待测组分性质选择适合的色谱柱，一般
3、遵循相似相容规律。分离非极 性物质时选择非极性色谱柱，分离极性物质时选择极性色谱柱。色谱柱确定后， 根据样本中待测组分的分配系数的差值情况，确定色谱柱工作温度，简单体系 采用等温方式，分配系数相差较大的复杂体系采用程序升温方式进行分析。常用的载气有氢气、氮气、氮气等。氢气、氮气的分子量较小常作为填充 柱色谱的载气；氮气的分子量较大，常作为毛细管气相色谱的载气；气相色谱 质谱用氮气作为载气。3、确定初始操作条件当样品准备好，且仪器配置确定之后，就可开始进行尝试性分离。这时要 确定初始分离条件，主要包括进样量、进样口温度、检测器温度、色谱柱温度 和载气流速。进样量要根据样品浓度、色谱柱容量和检测器
4、灵敏度来确定。样 品浓度不超过10mg/mL 时填充柱的进样量通常为1-5uL ,而对于毛细管柱， 若分流比为50: 1时，进样量一般不超过2uL。进样口温度主要由样品的沸点 范围决定，还要考虑色谱柱的使用温度。原则上讲，进样口温度高一些有利， 一般要接近样品中沸点最高的组分的沸点，但要低于易分解温度。4、分离条件优化分离条件优化目的就是要在最短的分析时间内达到符合要求的分离结果。在改变柱温和载气流速也达不到基线分离的目的时，就应更换更长的色谱柱， 甚至更换不同固定相的色谱柱，因为在 GC中，色谱柱是分离成败的关键。5、定性鉴定所谓定性鉴定就是确定色谱峰的归属。对于简单的样品，可通过标准物质
5、对照来定性。就是在相同的色谱条件下，分别注射标准样品和实际样品，根据 保留值即可确定色谱图上哪个峰是要分析的组分。定性时必须注意，在同一色 谱柱上，不同化合物可能有相同的保留值，所以，对未知样品的定性仅仅用一 个保留数据是不够的，双柱或多柱保留指数定性是GC中较为可靠的方法，因为 不同的化合物在不同的色谱柱上具有相同保留值的几率要小得多。条件允许时 可采用气相色谱质谱联机定性。6、定量分析要确定用什么定量方法来测定待测组分的含量。常用的色谱定量方法不外 乎峰面积（峰高）百分比法、归一化法、内标法、外标法和标准加入法（又叫 叠加法）。峰面积（峰高）百分比法最简单，但最不准确。只有样品由同系物 组
6、成、或者只是为了粗略地定量时该法才是可选择的。相比而言，内标法的定 量精度最高，因为它是用相对于标准物（叫内标物）的响应值来定量的，而内 标物要分别加到标准样品和未知样品中，这样就可抵消由于操作条件（包括进 样量）的波动带来的误差。至于标准加入法，是在未知样品中定量加入待测物 的标准品，然后根据峰面积（或峰高）的增加量来进行定量计算。其样品制备过程与内标法类似但计算原理则完全是来自外标法。标准加入法定量精度应该 介于内标法和外标法之间。7、方法的验证所谓的方法验证，就是要证明所开发方法的实用性和可靠性。实用性一般 指所用仪器配置是否全部可作为商品购得，样品处理方法是否简单易操作，分 析时间是否
7、合理，分析成本是否可被同行接受等。可靠性则包括定量的线性范 围、检测限、方法回收率、重复性、重现性和准确度等。四）分流歧视问题所谓分流歧视是指在一定分流比条件下，不同样 品组分的实际分流比是不同的，这就会造成进入 色谱柱的样品组成不同于原来的样品组成， 从而 影响定是分析的准确度。因此，采用分流进样时 必须注意这个问题。那么，是什么因素造成分流 歧视的呢？不均匀汽化是分流歧视的上要原因之一，即由于 样品中各组分的极性不同，沸点各异，因而汽化 速度各不相同。理论上讲，只要汽化温度足够高， 就能使样品的全部组分迅速汽化。只要汽化室内 样品处于均相气体状态，分流歧视就是可以忽略 的。然而，实际上样品
8、在汽化室是处于一种运动 状态，即必须随载气流动。从汽化室汽化到进入 色谱柱的时间很短（以秒计），沸点不同的组分到达分流点时，汽化状态可能不完全相同。这样， 由于分流流最远大于柱内流量，汽化不太完全的 组分就比完全汽化的组分可能多分流掉一些样 品。造成分流歧视的另外一个原因是不同样品组 分在载气中的扩散速度不同。而扩散速度与温度 是成正比的。所以。尽量使样品快速汽化是消除 分流歧视的重要措施，包括采用较高的汽化温 度，也包括使用合适的衬管。分流比的大小也会影响分流歧视口 一般地讲， 分 流比越大，越有可能造成分流歧视口所以，在样 品浓度和柱容量允许的条件下，分流比小一些有 利。至于分流比的测定定
9、是很简单的， 只要在分 流出口用皂膜流量计测定分流流量， 再测定柱内 流量（因为柱内流量很小，用皂膜流量计测定时 误差较大，故常用测定死时间的办法进行流量计 算）。二者之比即为分流比。严格地讲，两个流 量值应校正到相同的温度和压力条件下， 才能获 得准确的分流比。实际工作中人们更关心的是分 流比的重现性，分流比则常用整数之比表示，故 一般不需要很准确地测定。具体分析中要消除分流歧视，还应注意色谱柱的 初始温度尽可能高一些。这样，汽化温度和柱箱温度之差就会小一些，因而样品在汽化室经历的 温度梯度就会小一些，可避免汽化后的样品发生 部分冷凝。最后一个问题是色谱柱的安装， 一是 要保证柱入口端超过了
10、分流点。二是保证柱入口 端处于汽化室衬管的中央，即汽化室内色谱柱与 衬管是同轴的（参看上一章有关色谱柱安装的内 谷）。尽管分流进样有歧视间题，但它仍然是毛细管G C中最常用的进样方式。在实际工作中。分流歧 视是很难完全消除的，但只要操作是重现的，一 定程度的歧视是重现的。就可以通过标准样品的 校准来消除歧视效应对定量精度的影响另一方面。由于分流进样给检测灵敏度提出了更 高的要求，而当样品浓度太低时。分流进样并不 总是合适的选择。除了进行样品预处理（如浓缩） 外。读者很容易想到不分流进样。既然分流进样 是因为柱容量小、样品浓度高而不得不采用的方 法。那么低浓度样品采用不分流进样，以提高检 测灵敏度就是理所当然的选择了。