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1、PCRS计引物时酶切位点的保护酶募核甘酸序列切割2 hr率%20 hrAcc IGGTCGAC C CGGTCGAC CGCCGGTCGAC CGG000000Afl IIICACATGT G CC ACATGT GGCCC ACATGT GGG0 90900 9090Asc IGGCGCGCC AGGCGCGCC TTTGGCGCGCC AA909090909090Ava ICCCCGGG G CC CCCGGG GGTCC CCCGGG GGA50 9090909090BamH ICGGATCC G CG GGATCC CGCGC GGATCC GCG10 909025 9090Bgl I
2、ICAGATCT G GA AGATCT TCGGA AGATCT TCC0 75 250 9090BssH IIGGCGCGC C AG GCGCGC CTTTG GCGCGC CAA0 0 500 0 90BstE IIG GGT(A/T)ACC C010BstX IAACTGCAGAA CCAATGCATTGGAAAACTGCAG CCAATGCATTGG AA0 25 250 50 90CTGCAGAA CCAATGCATTGG ATGCATCla ICATCGAT G GATCGAT C CC ATCGAT GG0 0 900 0 90CCC ATCGAT GGG5050EcoR I
3、G GAATTC C CG GAATTC CG90909090CCG GAATTC CGG9090Hae IIIGGGGCC CC AGC GGCC GCT90909090TTGC GGCC GCAA9090Hind IIICAAGCTT G CC AAGCTT GG0 0 100 0 75CCC AAGCTT GGGKpn IGGGTACC C GG GGTACC CC0 900 90CGG GGTACC CCG9090Mlu IGACGCGT C CG ACGCGT CG0 250 50Nco ICCCATGG G CATG CCATGG CATG0 500 75Nde ICCATATG
4、G CC CATATG GG0 0 0 00 0 0 0CGC CATATG GCG75759090GGGIII CATATG AAACCCGGAATTC CATATG GAATTCCGGGAATTC CATATG GAATTCCCNhe IGGCTAGC C CG GCTAGC CG0 10 100 2550CTAGCTAGC TAGNot III GCGGCCGC AA Alli GCGGCCGC IIIA0 10 100 1010AAATAT GCGGCCGC IAIAAA25259090AIAAGAAI GCGGCCGC IAAACIAIAAGGAAAAAA GCGGCCGC AAAA
5、GGAAAANsi IIGCAIGCAI GCA10 909090CCA AIGCAI TGGTTCTGCAGTTPac ITTAATTAA GTTAATTAA C CCTTAATTAA GG0 0 00 25 90Pme IGIIIAAAC GGIIIAAAC C0 0 00 2550GGGIIIAAAC CC7590AGCIII GIIIAAAC GGCGCGCCGGPst IGCIGCAG C IGCA CIGCAG IGCA0 100 10 90AA CIGCAG AACCAAIGCAIIGG90 90900AAAA CIGCAG CCAAIGCAIIGGAA0CIGCAG AACCA
6、ATGCATTGGATGCATPvu ICCGAICG G AICGAICG AI0 1000 2510ICG CGAICG CGASac ICGAGCIC G1010Sac IIGCCGCGG C ICC CCGCGG GGA0 500 90Sal IGICGAC GICAAAAGGCCAIAGCGGCCGC0 10 100 5075GC GTCGAC GTCTTGGCCATAGCGGCCGCGGACGC GTCGAC GTCGGCCATAGCGGCCGCGGAASca IGAGTACT C AAA AGTACT III10752575Sma ICCCGGG CCCCGGG G CC CCC
7、GGG GGTCC CCCGGG GGA0 0 109010 10 5090Spe IGACTAGT C GG ACTAGT CC CGG ACTAGT CCG CTAG ACTAGT CTAG10 10 00909050 50Sph IGGCATGC C CAT GCATGC ATGACAT GCATGC ATGT0 0 100 2550Stu IAAGGCCT T GAAGGCCT TCAAA AGGCCT m909090909090Xba ICTCTAGA G GC TCTAGA GCTGC TCTAGA GCA CTAG TCTAGA CTAG0 9075750 909090Xho ICCTCGAG G CC CTCGAG GGCCG CTCGAG CGG0 10 100 2575Xma ICCCCGGG G CC CCCGGG GG CCC CCCGGG GGG TCCC CCCGGG GGGA0 25 50900 75 9090注释:1如果要加在序列的5 端，就在酶切位点识别碱基序列（红色）的5端加上相应的碱基（黑色），相同如果要在3端加保护碱基，就在酶切位点识别碱基序列（红色）的3 端加上相应的碱基（黑色）2切割率：正确识别并酶切的效率3加保护碱基时最好选用切割率高时加的相应碱基