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1、实训十(0.5mol/LNaHCO3浸提-铝狒抗比色法一、目的要求土壤速效磷也称土壤有效磷,包括水溶性磷和弱酸溶性磷,其含量是判断土壤供磷水平的一项重要指标.测定土壤速效磷的含量,可为合理分配和施用磷肥提供理论依据.实验要求了解测定土壤速效磷的根本原理,掌握其测定方法.二、方法原理用 pH8.5 的 0.5mol/L 的 NaHCO3作浸提剂处理土壤,由于碳酸根的存在抑制了 土壤中的碳酸钙的溶解,降低了溶液中Ca2+浓度,乡音的提升了3+3+磷酸钙的溶解度.由于浸提剂的 pH较高,抑制了 Fe和Al的活性,有利-3-2-于磷酸铁和磷酸铝的提取.止匕外,溶液中存在着OH、HCQ CO3等阴离子,
2、也有利于吸附态磷的置换.用 NaHCO3作浸提剂提取的有效磷与作物吸收磷有良好的相关性,其适应范围也广泛.浸出液中的磷,在一定的酸度下,用硫酸铝锡抗复原显色成磷铝蓝,蓝色的深浅在一定浓度范围内与磷的含量成正比,因此,可以用比色法测定其含量.三、主要仪器震荡机、分光光度计或光电比色计、天平0.01g、三角瓶250ml、容 量瓶50ml、漏斗、无磷滤纸、移液管10ml.四、试剂配制1.0.5mol/L 的 NaHCO3 pH8.5浸提液称取化学纯 NaHCO342.0g 溶于 800ml蒸储水中,以4mol/L NaOH溶液调节pH至8.5 用pH计测定,然后稀 释至1000ml,保存在试剂瓶中.
3、如果贮存期超过 1个月,是用时应重新调整pH.2.无磷活性炭将会活性炭先用1:1 V/V的盐酸浸泡过夜,在布氏漏斗- 上抽滤,用蒸储水冲洗屡次至无 Cl为止,在用0.5mol/L NaHCO3溶液浸泡过夜,在布氏漏斗上抽滤,用蒸储水洗尽NaHCO3,检查至无磷为止,烘干备用.3.7.5mol/L硫酸铝锡抗贮存液在1000ml烧杯中参加400ml蒸储水,蒋烧杯浸在冷水中,然后缓慢注入 208.3ml浓硫酸分析纯,并不断搅拌,却至室温.另称取分析纯铝酸镂 20g溶于60c的150ml蒸储水中,冷却.再将硫酸溶液慢慢倒入铝酸镂溶液中,不断搅拌,最后参加1000m10.5%酉石酸锡钾溶液,用蒸储水稀释
4、至1000ml,摇匀,贮存于棕色试剂瓶中,避 光保存.4 .铝狒抗混合显色剂称取1.50g抗坏血酸左旋,旋光度+12+22,分析纯溶于100ml铝锡抗贮存液中,混匀.此试剂有效期为24h,宜用前配随配随用.5 .磷标准液准确称取在105c烘箱中烘干2h的分析纯KH2PO40.2195g,溶于400ml蒸储水中.加浓硫酸5ml,转入1000ml容量瓶中,加蒸储水定容至刻度,摇匀,此溶液为50mg/L磷标准液,此溶液不易久贮.6 .磷标准曲线绘制分别吸取50mg/L磷标准液0、1、2、3、4、5 ml于50ml容量瓶中,各参加 0.5mol/L的NaHCO3浸提液1ml和铝镶抗显色剂5ml,除尽气
5、泡后定容,充分摇匀,即为0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mol/L 的磷的系列标准液.30min后与待测液同时进行比色,读取吸光度值.再方 格坐标纸上以吸光度值为纵坐标,磷 mol/L为横坐标便绘制成磷标准曲线.五、操作步骤1 .待测液的制备称取通过1mm筛孔的风干土样5.00g置于250ml三角瓶中,参加一小勺无磷活性炭和 0.5mol/L的NaHCO3浸提液100ml,塞紧瓶塞,在震荡机上震荡30min,取出后立即用枯燥漏斗和无磷滤纸过滤,滤 液用另一只三角瓶盛接.同时作空白试验.2 .测定吸取滤液10ml 对含P2O51%以下的样品吸取10ml,含磷高的可改为5ml或2ml,但
6、必须用0.5mol/L的NaHCO3补足至10ml,于50ml容量瓶中,加铝镶抗混合显色剂 5ml,小心摇动.30min后,在721或722型分光光度计上用波长660nm 光电比色计用红色滤光片比色,以空白液吸收值为0,读出待测的吸光度值.六、结果计算土壤速效磷mg/L=待测液mg/kg待测液体积烘干土重分取倍数mg/kg式中：待测液mg/L-从标准曲线上查得待测液浓度；待测液体积一一50ml;分取倍数一一浸提液总体积ml为吸取浸出液体积ml的倍数；烘干土重一一风干土重乘以水分系数.七、考前须知1铝狒抗混合显色剂的参加量要准确.2参加混合显色剂后,即产生大量的 CO2气体,由于容量瓶口小,CO
7、2气体不易逸出,在混匀的过程中易造成试液外溢,造成测定误差,因此必须小心慢慢参加,同时充分摇动排出 CO2,以防止CO2的存在影响比色结果.-(3)活性炭一定要洗至无Cl反响,否那么不能使用.(4)此法温度影响很大,一般测定应在 2025c的温度下进行.如室温低 于20C,可将容量瓶放在3040c的热水中保温20min,取出冷却后进行色.(5) 0.5mol/L 的 NaHCO3测土壤有效磷分级可参考以下指示土壤速效磷的含量 1020 20(mg/kg)土壤供磷水平低中等高八、复习思考题1 .为什么报告有效磷测定结果时,必须同时说明所用的测定方法？2 .测定过程中,如要获得比拟准确的结果,应注意哪些问题？